食用菌生產(chǎn)中污染霉菌敏感性殺菌劑的測定*

謝春芹，陳嘯寅，賈 君，宋子明，謝正林，楊鶴同

（江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 句容 212400）

食用菌是指可供人類食用或藥用的，能形成大型肉質(zhì)、膠質(zhì)、膜質(zhì)、革質(zhì)、木栓質(zhì)或木質(zhì)的子實體或菌核的一類大型菌（Fungus）總稱。通常也稱菇、菌、蕈、耳、芝等。食用菌約90%以上種類屬于擔子菌綱（Basid ionycetes），少數(shù)屬于子囊菌綱（Ascomycetes）[1]。

食用菌營養(yǎng)豐富、風味獨特、藥食同源，具有一定的保健功能，是人們所喜愛的健康理想食品。食用菌生產(chǎn)投資少，見效快，效益好，是廣大農(nóng)村致富的一個重要門路[1]。但食用菌生產(chǎn)中常受到多種病原霉菌的侵染，嚴重時會造成大面積減產(chǎn)，因此食用菌生產(chǎn)中如何防治霉菌污染是亟待解決的重要問題[2－4]。鑒于此，立題開展對食用菌生產(chǎn)中常見5種霉菌敏感性殺菌劑的檢測研究。通過平板抑菌試驗，測定幾種殺菌劑對霉菌的抑制效果，旨在篩選出對食用菌生產(chǎn)中常見霉菌有較強抑制作用的殺菌劑，為食用菌安全生產(chǎn)提供理論依據(jù)和技術(shù)指導(dǎo)。

1 材料和方法

1.1 材料及來源

1.1.1 供試殺菌劑及來源

70%克霉靈，山西運城化工廠生產(chǎn)；50%多菌靈可濕性粉劑，江蘇江都市化工廠生產(chǎn)； 30%菇豐可濕性粉劑，江蘇蘇科農(nóng)化有限公司生產(chǎn)；70%甲基托布津，浙江威爾達化工廠生產(chǎn)； 綠霉凈，山東單縣高港食用菌公司生產(chǎn)。

1.1.2 供試霉菌菌種及來源

霉菌菌種（木霉、青霉、曲霉、毛霉、根霉），由江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院食用菌研究所提供。

1.1.3 供試培養(yǎng)基

PDA 培養(yǎng)基[5，7]。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗設(shè)計

將生產(chǎn)上常用5種殺菌劑稀釋成適當?shù)臐舛鹊谷隤DA培養(yǎng)基中，制成PDA平板，并設(shè)空白對照，將5種霉菌病原分別接入到制好5種殺菌劑的平板和空白對照平板中，放入相同的條件下培養(yǎng)，定期測不同殺菌劑下各種霉菌的生長速度，比較5種殺菌劑分別對5種霉菌的抑制效果[8－17]。

1.2.2 方法

采用PDA培養(yǎng)基平板抑菌試驗[8]。為避免因高溫而破壞殺劑的藥效，待PDA培養(yǎng)基溫度降至50℃～60℃時，將5種的殺菌劑稀釋成適當?shù)臐舛仍跓o菌條件下加入到PDA培養(yǎng)基的三角瓶中，充分混勻后倒入無菌培養(yǎng)皿中，冷卻成藥液平板培養(yǎng)基。在無菌條件下，采用打孔接種法（霉菌接種塊直徑為0.5 cm），每種霉菌接5個平板培養(yǎng)基，并設(shè)有空白對照，放置恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25℃，24 h后定期測量霉菌菌落生長的大小。根據(jù)測定結(jié)果，選出具有能抑制多種霉菌的殺菌劑，再對該種藥劑最適抑制濃度進行測定，即在初步抑制濃度的基礎(chǔ)上再設(shè)定幾種梯度濃度，每個濃度設(shè)5個重復(fù)，并設(shè)有對照，通過抑菌效果比較，篩選出該種藥劑最適抑菌濃度。

（1）5種殺菌劑平板的制作

將滅菌好的PDA培養(yǎng)基，取出移至超凈工作臺內(nèi)，在無菌條件下，將每種藥劑按照1∶1 200比例的量，分別加入三角瓶中，搖均后迅速將三角瓶中的培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿中，每個培養(yǎng)皿倒入15 mL培養(yǎng)基，寫上標簽，冷卻待用。

（2）接種霉菌

按無菌操作要求，挑取一塊霉菌菌餅塊迅速移接到平板培養(yǎng)基的中央[8－10]。

（3）培養(yǎng)

將接好霉菌的平板倒置放入恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，溫度25℃，培養(yǎng) 7 d～10 d[11]。

（4）抑菌效果的測定

接種后每隔24 h觀察1次，記錄各霉菌菌落生長面積，用自動式游標卡尺量不同殺菌劑平板中各霉菌的生長面積，即以各霉菌菌落的長（cm）和寬（cm）來計算[12，13]，直至霉菌菌落完全布滿平板。

2 結(jié)果分析

2.1 50%多菌靈對霉菌生長速度的抑制效果

經(jīng)過10 d的觀察測定，50%多菌靈對5種霉菌生長速度的抑制效果有明顯差異，見表1。

表1 50%多菌靈對不同霉菌菌絲生長的抑制效果

結(jié)果表明，50%多菌靈殺菌劑對木霉、曲霉、青霉有抑制作用；對毛霉抑制效果較明顯；而對根霉無抑制作用。

2.2 30%菇豐對霉菌菌落生長的抑制效果

經(jīng)過10 d的觀察測定，30%多菌靈對5種霉菌生長速度的抑制效果有明顯差異，見表2。

表2 30%菇豐對不同霉菌菌絲生長的抑制效果

結(jié)果表明，30%菇豐殺菌劑對木霉、曲霉、青霉、毛霉和根霉均有的抑制作用，其中對根霉和毛霉的抑制效果比較顯著。

2.3 綠霉凈對霉菌菌落生長的抑制效果

經(jīng)過10 d的觀察測定，綠霉凈對5種霉菌生長速度的抑制效果有明顯差異，見表3。

表3 綠霉凈對不同霉菌菌絲生長的抑制效果

結(jié)果表明，綠霉凈對木霉、毛霉、青霉、曲霉均有抑制作用，對根霉無抑制作用。

2.4 70%甲基托布津?qū)γ咕z生長的抑制效果

經(jīng)過10 d的觀察測定，70%甲基托布津?qū)?種霉菌生長速度的抑制效果明顯的差異，見表4。

表4 70%甲托對不同霉菌菌線生長的抑制效果

結(jié)果表明，70%甲基托布津殺菌劑對木霉、青霉、曲霉、根霉和毛霉均有抑制作用，對根霉的效果比較明顯。

2.5 70%克霉靈對霉菌菌落生長的抑制效果

經(jīng)過10 d的觀察測定，70%克霉靈對5種霉菌生長速度的抑制效果有明顯差異，如表5。

結(jié)果表明，70%克霉靈殺菌劑對青霉、根霉、毛霉、曲霉有抑制作用，而對木霉則無抑制作用。

通過對以上5種殺菌劑對食用菌生產(chǎn)中常見霉菌抑制效果的研究，結(jié)果表明30%菇豐對這5種霉菌均抑制作用，效果較好。為了比較準確了解30%菇豐對不同霉菌的最適抑制濃度，需進一步研究其抑菌濃度。

表5 70%克霉靈對不同霉菌菌絲生長的抑制效果

2.6 不同濃度的30%菇豐對5種霉菌生長的抑制

在試驗抑制濃度的基礎(chǔ)上，上下分別設(shè)定4個濃度梯度，共9個濃度試驗，按同樣的方法制作不同濃度梯度平板培養(yǎng)基[8]，按無菌操作要求分別接入霉菌病原，置入相同的條件下培養(yǎng)，每隔24 h測霉菌菌絲生長情況，記錄菌落布滿平皿的時間，見表6。

表6 不同濃度30%菇豐對木霉菌菌絲生長的抑制效果

表6表明，菇豐在 1∶900～1∶1 100倍液之間對木霉抑制作用效果較好，其中1∶1 000倍液對木霉抑制作用效果最好。不同濃度30%菇豐對根霉的抑制效果見表7。

表7 不同濃度30%菇豐對根霉的抑制效果

表7表明，菇豐在 1∶800～1∶1 600倍液之間對根霉均有抑制作用，其中以1∶1 000倍液對根霉抑制效果最好。不同濃度30%菇豐對毛霉菌菌絲生長的抑制效果見表8。

表8 不同濃度30%菇豐對毛霉菌菌絲生長的抑制效果

表8表明，菇豐在 1∶800～1∶1 600倍液之間對毛霉均有抑制作用，其中以1∶900～1∶1 200對毛霉抑制效果最好。不同濃度30%菇豐對青霉的抑制效果見表9。

表9 不同濃度30%菇豐對青霉的抑制效果

表9表明，菇豐在 1∶800～1∶1 400倍液對青霉均有抑制效果，從測量青霉菌絲日生長速度結(jié)果看，在此濃度范圍內(nèi)對青霉抑制效果隨著深度的增加而提高。不同濃度30%菇豐對曲霉的抑制效果見表10。

表10 不同濃度30%菇豐對曲霉的抑制效果

表10表明，菇豐在1∶800～1∶1 500倍液之間對曲霉均有抑制作用，其中以1∶1 000～1∶1 100對曲霉抑制效果最好。

3 小結(jié)與討論

3.1 不同殺菌劑對不同的霉菌抑制效果不同

5種常用殺菌劑中50%多菌靈殺菌劑對木霉、曲霉、青霉有抑制作用，對毛霉抑制效果較明顯，而對根霉無抑制作用；綠霉凈對木霉、毛霉、青霉、曲霉均有抑制作用，對根霉無抑制作用；70%甲基托布津殺菌劑對木霉、曲霉、根霉和毛霉均有抑制作用，對青霉的抑制效果不明顯；70%克霉靈殺菌劑對青霉、根霉、毛霉、曲霉有抑制作用，而對木霉無抑制作用；菇豐對5種霉菌均有抑制作用，抑菌譜最廣。

3.2 不同濃度的菇豐對不同霉菌抑制效果不同

30%菇豐在 1∶900～1∶1 000倍液對木霉抑制作用效果最好；在1∶1 000倍液對根霉抑制作用效果最好；在1∶900～1∶1 200 倍液對毛霉抑制作用效果最好； 1∶800～1∶1 400 倍液對青霉抑制作用效果最好；在1∶1 000～1∶1 100倍液對曲霉抑制作用效果最好。在1∶1 000倍液的濃度下對5種霉菌均有抑制效果，因此，在食用菌生產(chǎn)中推薦使用菇豐作為該5種霉菌殺菌劑，建議使用濃度比為1∶1 000。

3.3 討論

以上5種霉菌在食用菌生料栽培中發(fā)生尤其嚴重，因此，本試驗的殺菌劑是在培養(yǎng)基滅菌冷卻至50℃～60℃時加入的，試驗結(jié)果適用于食用菌生料栽培和發(fā)酵料栽培。熟料栽培由于要高溫滅菌，是否影響藥效，還需進一步試驗研究。

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