雙參素膠囊抗大鼠心肌缺血再灌注損傷的機(jī)制

劉 兵 楊春梅 曲紹春 于曉風(fēng) 睢大筼 (吉林大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室，吉林 長(zhǎng)春 3002)

雙參素膠囊是從五加科人參屬植物人參及西洋參莖葉中提取得的雙參葉皂苷有效部位。臨床前藥理學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)，該藥對(duì)小鼠的神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)均無(wú)明顯的影響，且本課題組前期研究表明，雙參素膠囊對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷具有明顯保護(hù)作用〔1〕，本文進(jìn)一步探討其保護(hù)大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組 60只Wistar大鼠，雌雄各半，體重220～250 g，購(gòu)自吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)SCXK-(吉)2007-0003。將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、心肌缺血再灌注(I/R)組、陽(yáng)性對(duì)照組(福辛普利20 mg/kg)及17.5、35.0、70.0 mg/kg雙參素膠囊組，每組10只大鼠。

1.2 藥品與試劑 雙參素膠囊原料粉(吉林省人參研究院天然藥物化學(xué)研究室，批號(hào)：20091015);陽(yáng)性對(duì)照藥福辛普利片(上海施貴寶公司，批號(hào)：20101120)，兩者均以0.5%羧甲基纖維素鈉配制成所需濃度;6-酮-前列腺素F1α(PGIα)放及血栓素B2(TXB2)放免試劑盒購(gòu)于中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院東亞免疫技術(shù)研究所。

1.3 給藥、造模及檢測(cè)指標(biāo) 各組大鼠均自由進(jìn)食和飲水，各藥物組給予不同劑量藥物灌胃，1次/d，連續(xù)給藥7 d后開始造模及檢測(cè)指標(biāo)。大鼠心肌I/R模型制作參照文獻(xiàn)〔2〕結(jié)扎左前降支冠狀動(dòng)脈，30 min后松開結(jié)扎線對(duì)心臟進(jìn)行再灌注，24 h之后腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血，檢測(cè)全血及血漿黏度、PGIα、TXB2。剖取大鼠心臟，在結(jié)扎點(diǎn)以下區(qū)域取缺血區(qū)心肌及非缺血區(qū)心肌各100 mg，用一次提取比色法測(cè)心肌FFA含量。

2 結(jié)果

2.1 雙參素膠囊對(duì)心肌I/R損傷大鼠全血及血漿黏度的影響與假手術(shù)組比較，I/R組大鼠全血低切、中切、高切及血漿黏度均明顯增加(P＜0.05或P＜0.01)。與I/R組比較，雙參素膠囊35、70 mg/kg組均能明顯降低全血低切、中切、高切及血漿黏度(P＜0.05或P＜0.01)，見表1。

表1 各組大鼠全血及血漿黏度( s，n=10，mPa/s)

表1 各組大鼠全血及血漿黏度( s，n=10，mPa/s)

與假手術(shù)組比較：1)P＜0.05，2)P＜0.01;與 I/R組比較：3)P＜0.05，4)P ＜0.01，下表同

血漿黏度組別 劑量(mg/kg)全血黏度－ 10.50±2.12 5.02±0.85 3.74±0.42 1.22±0.21 I/R組 － 14.83±2.982)6.19±1.641)4.57±0.811)1.75±0.472)陽(yáng)性對(duì)照組 20 10.86±3.233) 5.04±1.023)3.89±0.513)1.37±0.543)雙參素膠囊17.5 13.56±4.18 5.78±1.14 4.19±0.87 1.65±0.63 35.012.01±2.533)5.36±1.52 3.87±0.553)1.35±0.263)70.011.22±2.823)5.10±0.873)3.83±0.423)1.30±0.194)120/s假手術(shù)組10/s 40/s 120/s

2.2 雙參素膠囊對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠血漿前列環(huán)素及TXA2水平的影響 與假手術(shù)組相比，I/R組大鼠血漿TXA2水平明顯升高，前列環(huán)素水平及前列環(huán)素/TXA2比值明顯降低(P＜0.05或 P＜0.01)。與 I/R組比較，雙參素膠囊 35、70 mg/kg組均可明顯降低心肌I/R損傷大鼠血漿TXA2水平，增加血漿前列環(huán)素水平及前列環(huán)素/TXA2比值(P＜0.05或P ＜0.01)，見表2。

2.3 雙參素膠囊對(duì)心肌I/R損傷大鼠心肌FFA含量的影響與假手術(shù)組相比，I/R組大鼠心肌梗死區(qū)及非梗死區(qū)FFA水平均明顯增加(P＜0.05或P＜0.01)。與I/R組比較，雙參素膠囊35、70 mg/kg組均可明顯降低心肌I/R損傷大鼠梗死區(qū)及非梗死區(qū)FFA水平(P＜0.05或P＜0.01)，見表3。

表2 各組大鼠血漿前列環(huán)素及TXA2水平(s，n=10，pg/ml)

表2 各組大鼠血漿前列環(huán)素及TXA2水平(s，n=10，pg/ml)

組別 劑量(mg/kg)前列環(huán)素 TXA2前列環(huán)素/TXA2－ 481.23±57.30 134.98±32.03 3.57±0.52 I/R組 － 413.87±42.461)214.52±55.652)1.93±0.682)陽(yáng)性對(duì)照組 20 480.37±58.563)159.28±41.333)3.08±0.684)雙參素膠囊 17.5 437.71±67.92 198.37±48.09 2.21±0.79 35.0 466.21±50.763)160.76±38.213)2.78±0.424)70.0 475.42±62.123)153.16±36.473)3.10±0.744)假手術(shù)組

表3 各組大鼠心肌FFA含量(s，n=10，μEq/L)

表3 各組大鼠心肌FFA含量(s，n=10，μEq/L)

－ 625.47±108.68 705.85±106.52再灌I/R組 － 989.35±219.722) 841.24±117.821)福辛普利組 20 730.48±130.524) 710.41±123.873)雙參素膠囊 17.5 856.37±238.14 815.57±121.38 35.0 786.20±125.643) 725.28±120.143)70.0 737.52±124.174) 713.60±116.383)梗死區(qū) 非梗死區(qū)假手術(shù)組組別 劑量(mg/kg)

3 討論

多數(shù)情況下，缺血后再灌注可使組織器官功能得到恢復(fù)，損傷的結(jié)構(gòu)得到修復(fù)，患者病情好轉(zhuǎn)康復(fù);但有時(shí)缺血后再灌注不僅不能使組織、器官功能恢復(fù)，反而加重組織、器官的功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷。心肌I/R的發(fā)生機(jī)制尚未徹底闡明。目前認(rèn)為自由基的作用、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、血管內(nèi)皮細(xì)胞功能異常、能量代謝異常及血流動(dòng)力學(xué)異常等均與心肌I/R的發(fā)生密切相關(guān)。心肌缺血時(shí)，細(xì)胞便開始無(wú)氧代謝，提供能量減少，同時(shí)卻產(chǎn)生乳酸、FFA、脂酰CoA、肉毒堿CoA等大量有害代謝產(chǎn)物，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，心肌I/R后，心肌細(xì)胞梗死區(qū)和非梗死區(qū)內(nèi)FFA均明顯增加。高FFA血癥可增加心肌耗氧量而加重心肌缺血，擴(kuò)大缺血或梗死范圍〔3〕。另外，體內(nèi)I/R時(shí)，體內(nèi)的氧自由基生成增加，同時(shí)清除障礙故在體內(nèi)大量堆積，增多的氧自由基可以導(dǎo)致抑制前列腺素合成酶、激活血小板環(huán)化酶，生成大量TXA2;本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明I/R組大鼠血漿TXA2水平明顯升高，TXA2通過抑制腺苷酸環(huán)化酶，使血小板和血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)cAMP減少，從而促進(jìn)血小板聚集和局部血管收縮，加重內(nèi)皮損傷。因此TXA2與前列環(huán)素的平衡失調(diào)是心肌缺血或心肌壞死的主要原因〔4〕。本文結(jié)果提示可能通過糾正前列環(huán)素與TXA2之間失衡失調(diào)發(fā)揮抗心肌I/R損傷作用。

心肌I/R損傷時(shí)，膜磷脂大量降解，產(chǎn)生前列環(huán)素、TXA2、白三烯等炎癥介質(zhì)，引起毛細(xì)血管通透性增加，導(dǎo)致紅細(xì)胞壓積明顯增高，血液黏度升高。由于血液濃縮，使得血漿蛋白濃度相對(duì)升高，尤其是纖維蛋白原濃度的升高能明顯增加血漿黏度〔5〕。雙參素膠囊能明顯降低全血黏度及血漿黏度，提示可能通過改善血流狀態(tài)防止血栓形成，對(duì)于降低冠心病患者發(fā)生心肌I/R損傷的危險(xiǎn)性具有益處。

1 劉 兵，楊春梅，于曉風(fēng)，等.雙參素膠囊對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌I/R損傷的保護(hù)作用〔J〕. 武警醫(yī)學(xué)，2008;19(8)：713-6.

2 翟玉榮，于小鳳，曲紹春，等.苦碟子總黃酮對(duì)大鼠心肌缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用〔J〕.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2010;26(2)：276-7.

3 王 宏，曲紹春，于曉風(fēng)，等.血栓心脈寧片對(duì)急性血瘀I/R大鼠血小板功能及血液流變學(xué)的影響〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2010;30(22)：3335-7.

4 王絢卉，于曉風(fēng)，曲紹春，等.洋參二醇皂苷注射液對(duì)大鼠急性心肌梗死的影響及其機(jī)制研究〔J〕.中國(guó)中藥雜志，2009;34(24)：3281-5.

5 曲紹春，睢 誠(chéng)，于曉風(fēng)，等.人參Rb組皂苷對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌I/R損傷的保護(hù)作用〔J〕.吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2007;33(5)：849-52.