HPLC法測定老年咳喘膠囊中甘草酸的含量

邱宏聰孟夏臨

1.廣西壯族自治區中醫藥研究院，廣西南寧530022;2.廣西中藥質量標準研究重點實驗室，廣西南寧530022

HPLC法測定老年咳喘膠囊中甘草酸的含量

邱宏聰1，2孟夏臨1

1.廣西壯族自治區中醫藥研究院，廣西南寧530022;2.廣西中藥質量標準研究重點實驗室，廣西南寧530022

目的:建立老年咳喘片中甘草酸的HPLC含量測定方法。方法:采用高效液相色譜法，色譜柱為Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 mm)，流動相為乙腈－0.05%磷酸溶液(35:65)，流速為1.0 mL·min－1，檢測波長為237 nm;進樣體積為10 mL。結果:該方法的線性范圍為0.098～1.97 mg，r=0.9998(n=5);平均回收率(n=6)為99.36%，RSD為1.81%。結論:該法簡便、準確，可用于老年咳喘片的質量控制。

老年咳喘膠囊;甘草酸;高效液相色譜法

老年咳喘膠囊是由黃芪、補骨脂、淫羊藿、甘草等七味藥材組成，具有滋陰壯陽，扶正固本之功效，可提高免疫能力，促進病體康復，用于老年慢性支氣管炎及各種體虛癥。目前已有文獻報道通過測定黃芪甲苷［1］指標物質，建立本品的質量控制方法。為更全面的控制本品的質量，保證用藥安全、有效，本文采用HPLC法測定老年咳喘膠囊中甘草酸的含量。

1 儀器與試藥

日本島津公司LC－20A高效液相色譜儀;SPD－20A紫外檢測器;威瑪龍多媒體色譜數據工作站。甘草酸銨對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110731－200614，供含量測定用)，老年咳喘膠囊(購自A公司，共三批)。乙腈為色譜純，水為重蒸水，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性

色譜柱為Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 mm)，流動相為乙腈－0.05%磷酸溶液(35:65)，流速為1.0 mL·min－1，檢測波長為237nm;進樣體積為10 mL;柱溫為室溫;理論板數按甘草酸峰計算應不低于2000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取甘草酸銨對照品，加流動相制成0.2 mg·mL－1的溶液，即得(甘草酸重量=甘草酸銨重量/1.0207)［2］。

2.3 供試品溶液的制備

取本品20片，研細，混勻，取約0.5 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入流動相25 ml，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用流動相補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 線性關系考察

精密量取對照品溶液0.5、1、3、5、10ml，分別置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，按擬定色譜條件分別進樣10ml，測定。以甘草酸對照品進樣量(mg)為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)進行線性回歸，回歸方程為:Y=706 453.8X+29 745.3，r=0.999 8，表明進樣量在0.098～1.97 mg范圍內時，進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

對同一供試品溶，按擬定色譜條件連續進樣測定5次，結果峰面積平均值為325 491，RSD為1.37%，表明儀器精密度較好。

2.6 穩定性試驗

對同一供試品溶液分別在0，1，2，4，8，12、24 h按擬定色譜條件進行測定，結果峰面積平均值為330 752，RSD為1.68%，表明供試品溶液至少在24 h內穩定。

2.7 重復性試驗

精密稱取同一批次樣品6份，制成供試品溶液，按擬定色譜條件測定，結果甘草酸含量的平均值為1.06 mg·g－1，RSD為1.89%，表明重復性較好。

2.8 加樣回收率測定

精密稱取6份已知含量(1.06 mg·g－1)的樣品0.25 g，分別精密加入甘草酸銨對照品(11.76 mg·mL－1)25 mL，制成供試品溶液，按擬定色譜條件測定，計算回收率，結果平均回收率(n=6)為99.36%，RSD為1.81%，見表1，表明方法回收率較好。

圖1 HPLC色譜圖

2.9 陰性對照試驗

取缺甘草的陰性樣品0.5g，按擬定方法提取，測定。結果陰性樣品在甘草酸出峰位置無吸收峰，表明處方中其他成分對測定無影響。見圖1。

2.10樣品測定

分別取3批樣品，按擬定方法提取，測定，計算樣品中甘草酸的含量，結果分別為0.38 mg/粒，0.35 mg/粒，0.32 mg/粒。

3 討論

方中的甘草為中國藥典收載品種，成分清楚。其主要成分甘草酸的含量較高，具有抗炎、解毒、保肝和增強免疫等作用［3］，為處方中主要的藥效成分。因此，將其確定為含量測定項，可更全面、有效的控制本品的質量。

本試驗對樣品提取溶劑進行了篩選，曾采用70%乙醇、1%醋酸無水乙醇、40%甲醇及本試驗流動相乙腈－0.05%磷酸溶液，結果流動相提取的樣品雜質峰較少，峰型較好，因此采用流動相作為提取溶劑。試驗還對超聲時間進行了考察，結果樣品超聲30 min，甘草酸基本提取完全。通過含量測定的方法學考察，結果表明，用HPLC法測定老年咳喘膠囊中甘草酸的含量，方法簡便、準確，可用于該制劑的質量控制。

［1］覃軍，黃鳳婷，凌志敏，等.老年咳喘膠囊質量標準研究［J］．中藥材，2010，(6):1005－1007.

［2］中國藥典(一部)［S］.2010:80－81.

［3］謝松梅，崔慧斐.甘草酸的研究進展［J］.食品與藥品，2006，8(03A):1.

Determination of Glycyrrhizic Acid in Laonian Kechuan Capsule by HPLC

QIU Hong－cong1，2，MENG Xia－lin1
1.Guangxi Institute of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences，Nanning 530022，China;2.Guangxi Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Quality Stardands，Nanning 530022，China

Objective:To establish a HPLC method for the determination of glycyrrhizic acid in Laonian Kechuan Capsule.Method:A HPLC method was developed.Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 mm)was adopted and the mobile phase consisted of acetonitrile and 0.05%phosphoric acid solution(35:65)with injection volume of 10 mL.The flow rate was 1.0 mL·min－1 and the UV detection was at 237 nm.Results:The linear ranges were 0.098～1.97 mg(r=0.9998，n=5)，and the average recovery(n=6)was 99.36%with 1.81%of RSD.Conclusion:The method is simple，accurate，and suitable for the quality control of Laonian Kechuan Capsule.

Laonian Kechuan Capsule;glycyrrhizic acid;HPLC

R927.2

A

1007－8517(2012)20－0043－02

邱宏聰，碩士，助理研究員，研究方向:藥物質量標準研究。E－mail:qiuhongcong@163.com。

2012.08.27)