注射用鹽酸苯達莫司汀的制備及質量控制

陳祥峰，楊奇珍，魏 佳（江蘇奧賽康藥業有限公司，南京 2 1 1 1 1 2）

注射用鹽酸苯達莫司汀的制備及質量控制

陳祥峰＊，楊奇珍，魏 佳（江蘇奧賽康藥業有限公司，南京 2 1 1 1 1 2）

目的：制備注射用鹽酸苯達莫司汀并建立其質量控制方法。方法：以凍干賦形劑甘露醇的不同用量為因素，以制劑的成形性等為指標篩選處方；確立制劑的制備工藝；采用高效液相色譜法測定制劑含量；根據2 0 1 0年版《中國藥典》相關要求考察制劑的鑒別、酸度、水分、有關物質和主藥含量等質量控制指標。結果：選用2.2 5%甘露醇為輔料，制備時不采用脫炭工藝；成品各質量指標均符合《中國藥典》相關要求。結論：所確定的制劑處方和制備工藝合理，所得產品質量可控。

注射用鹽酸苯達莫司?。恢苽?；質量控制

鹽酸苯達莫司?。˙endamustine hydrochloride，BH）是一種含有嘌呤類苯并咪唑環的氮芥衍生物，具有抗腫瘤作用。2 0 0 3年，注射用BH在德國上市，商品名為Ribomustin，在美國上市的商品名為 Treanda[1，2]。

BH分子式為C16H21Cl2N3O2·HCl，分子量為3 9 4.7。其原料藥為白色至灰白色結晶性粉末，在甲醇中易溶，在乙醇中溶解，在水中略溶，在0.1 mol·L－1鹽酸溶液中微溶。其在水溶液中不穩定，易水解，可分解為羥基氯和二羥基衍生物。因國內尚無BH制劑產品上市，所以筆者參考國外上市制劑，設計并制備了注射用BH，初定規格為每支2 5 mg，并對其進行了質量控制，為國內的BH制劑的開發提供依據[3，4]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LYO-0.4型真空冷凍干燥機（上海東富龍科技股份有限公司）；LC-2 0 A型高效液相色譜（HPLC）儀，包括LC-2 0 A泵、SPD-2 0 A型紫外檢器、LC solution色譜工作站（日本島津公司）。

1.2 試藥

BH對照品（批號：2 0 0 8 1 1 2 4，純度：9 9.9 8%）、BH原料藥（批號：0 9 0 2 0 1，純度：9 9.8%）均由南京海光應用化學研究所合成室提供；甘露醇（廣西南寧化學制藥有限責任公司）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 處方與制備

參考Treanda說明書確定本品的處方組成，即每瓶2 5 mg規格的注射用BH處方由BH以及甘露醇組成。

將輔料溶解后再加主藥，溶液制備完成后灌裝，再放入凍干機凍干，得成品制劑。由于BH在水溶液中不穩定，易水解，且在光照條件下也易降解變色，所以灌裝包材選用棕色西林瓶。

2.1 賦形劑用量篩選

設計不同的賦形劑用量與主藥制備凍干藥液：稱取主藥（每瓶2 5mg）和相應量的甘露醇（每瓶4 5、7 5、1 2 5、1 7 5、2 2 5 mg），先加8 0%注射用水攪拌溶解，再補加注射用水至全量。分裝后進行凍干，并觀察凍干成品的顏色、成形性、復溶性、可見異物，各項指標參考2 0 1 0年版《中國藥典》附錄相關內容[5]。結果5種處方顏色均為白色，成形性均為疏松飽滿，復溶性均良好，可見異物檢查均為合格，即各處方結果無差異。由此選擇甘露醇的最小量4 5 mg。確定制劑處方為：BH 2 5 mg，甘露醇4 5 mg（2.2 5%），注射用水2 mL。

2.2 活性炭用量選擇

注射劑制備過程中需要使用活性炭來除去熱原和雜質，但由于活性炭在吸附熱原和雜質的同時也可能會吸附主藥，為此對其用量進行選擇。

按處方量制備2 0 0 mL BH溶液，平均分成4份，1份不加入活性炭作為0活性炭用量溶液，其余3份分別加入0.0 5%、0.1%和0.2%（W/V）活性炭量，將后3份溶液攪拌3 0 min后脫炭，并考察4份溶液的性狀、主藥含量（以0活性炭用量溶液的峰面積為1 0 0%，換算其余3份溶液的含量）及細菌內毒素?？紤]到溶液對放置環境的要求，所以在低溫（2～8℃）環境下對活性炭的用量進行考察?；钚蕴坑昧康目疾旖Y果見表1。

表1 活性炭用量的考察結果Tab 1 Amount of active carbon

表1結果表明，活性炭對主藥有吸附作用。此外，考慮到BH溶液制備后需立即冷卻，但低溫達不到脫炭工藝要求，此外試驗表明不進行脫炭的樣品細菌內毒素也符合規定。因此，本品在生產過程中不采用脫炭工藝。

2.3 制備

稱取處方量的BH和甘露醇，先將甘露醇置于無菌容器中，加8 0%量注射用水使之溶解并攪拌均勻，加注射用水定容至全量，攪拌均勻后，加入BH，攪拌使之全部溶解。隨后打開冷水夾套，溫度控制在2～8℃。溶液初濾后，取樣進行中間體檢查。中間體檢驗合格后，溶液經2次0.2 2μm微孔濾膜濾過后送至無菌室，并按每瓶2 mL灌裝于棕色西林瓶中，半塞上丁基橡膠塞，裝盤。將灌裝好的樣品置入冷凍干燥機中，利用導熱油使樣品溫度下降，當達－4 0℃時繼續冷凍2～4 h，開啟真空系統，最后干燥溫度為4 0℃，保持該溫度6～8 h后，關閉中隔閥，停真空泵，壓塞、出箱，用鋁塑組合蓋軋口，經質檢合格后包裝，即得成品。

3 質量控制

3.1 性狀

本品為白色或類白色疏松塊狀物或粉末。

3.2 鑒別

（1）稱取甘露醇1 0mg，加甲醇1 0mL使溶解，為輔料溶液；稱取BH對照品5mg，加甲醇1 0mL使溶解，為對照品溶液；取本品適量（約相當于BH 5 mg），加甲醇1 0 mL使溶解，為供試品溶液。進樣，記錄3種溶液的色譜圖，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.輔料；B.對照品；C.供試品；1.BHFig 1 HPLC chromatograms A.excipients；B.substance control；C.test sample；1.bendamustine hydrochloride

由圖1可見，甘露醇在此色譜條件下不出峰，供試品主峰的保留時間與對照品峰的保留時間一致。

（2）本品，加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL中約含BH 1 0 μg的溶液，照紫外-可見分光光度法測定，結果，在2 3 3 nm波長處有最大吸收。

3.3 檢查

3.3.1 酸度。取本品1瓶，加水5 mL溶解后，依法測定[5]，pH值應為2.5～3.5。結果均符合要求。

3.3.2 溶液的澄清度與顏色[5]。取本品5瓶，分別加水5 mL溶解后，溶液應澄清無色；如顯渾濁，與1號濁度標準液比較，均不得更濃；如顯色，與黃色2號標準比色液比較，均不得更深。結果均符合要求。

3.3.3 有關物質。取本品適量，加甲醇溶解并制成每1 mL中約含BH 0.2 5 mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取1 mL，置于1 0 0 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。取對照溶液2 0 μL進樣，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的1 0%～2 5%；精密量取供試品溶液與對照溶液各2 0μL，分別進樣，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，單個雜質峰面積不得大于對照溶液主峰面積的0.5倍（0.5%），各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的1.5倍（1.5%）。結果均符合要求。

3.3.4 水分。取本品，照水分測定法[5]測定，含水分不得過4.0%。結果均符合要求。

3.3.5 細菌內毒素。取本品，依法檢查[5]，每1 mg BH中含內毒素的量應小于1.0 EU。結果均符合要求。

3.3.6 無菌。取本品，加滅菌水適量溶解后，轉移至不少于5 0 0 mL的0.9%無菌氯化鈉溶液中，用薄膜過濾法處理后，依法檢查[5]，應符合規定。結果均符合要求。

3.4 含量測定

3.4.1 色譜條件與系統適用性試驗。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.0 5%十二烷基硫酸鈉溶液（用1 0%磷酸調節pH值至4.0）-乙腈（5 5∶4 5）為流動相；檢測波長為2 3 3 nm。理論板數按苯達莫司汀峰計算不低于2 0 0 0，分離度符合要求。

3.4.2 標準曲線的制備。取水分測定后的BH對照品約6 0 mg，精密稱定，置于5 0 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。分別精密量取貯備液0.0 5、0.1、0.5、1.0、2.0、4.0、1 0.0 mL置于5 0 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成一系列濃度的對照品溶液。分別精密量取各2 0 μL進樣分析，記錄色譜圖，以進樣濃度（x）為橫坐標，峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸。結果得方程為y＝8 9 6 7 5.1 x+1 0 5 8 4.7（r＝0.9 9 99，n＝7），表明BH檢測濃度的線性范圍為1.2 5 4～2 5 0.8 μg·mL－1。

3.4.3 精密度試驗。取“3.4.2”項下濃度為2.0 μg·mL－1溶液，連續進樣6次，得峰面積的RSD＝0.3 5%，表明本法進樣精密度良好。

3.4.4 回收率試驗。分別按處方量的8 0%、1 0 0%、1 2 0%取主藥3份加入輔料，制備3份模擬制劑，測定含量并以測得量與加入量之比計算回收率，結果見表2。

表2 回收率試驗結果Tab 2 Results of recovery test

表2結果表明，本法回收率良好。

3.4.5 重復性試驗。取BH適量制備6份樣品，測定含量，結果

RSD＝0.6 0%。

3.4.6 樣品質量檢查。精密稱取本品適量，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1 mL中含BH 0.0 5 mg的溶液，進樣，記錄色譜圖；另取經水分測定后的BH對照品，同法測定。按外標法以峰面積計算含量。3批樣品的含量及其他指標檢查結果見表3。

表3 3批樣品的質量檢查結果Tab 3 Result of quality inspection of 3batches of samples

4 討論

本文篩選了處方中輔料的用量，確定了制備工藝，并對成品制劑進行了質量考察。結果表明，外觀性狀、酸度、溶液澄清度和顏色、細菌內毒素、無菌等指標按2 0 1 0年版《中國藥典》要求檢查均合格；同時建立了主藥和有關物質的含量測定方法，測定結果也符合要求。表明所確定的制劑處方和制備工藝合理，所得產品質量可控、穩定性好，適于大生產制備。

[1] Dreyling M.Bendamustine is a hybrid antimetabolite and alkylating agent offering new therapeutic options for the treatment of non-Hodgkin lymphomas[J].Hematology Meeting Reports，2 0 0 8，2（5）：1 2 3.

[2] Tageja N，Nagi J.Bendamustine：something old，something new[J].Cancer Chemother Pharmacol，2 0 1 0，6 6（3）：4 1 3.

[3] 陳 棟，宮 平.鹽酸苯達莫司汀[J].中國藥物化學雜志，2 0 0 9，1 9（2）：1 5 9.

[4] Gust G，Krauser R.Investigations on the stability of bendamustin，a cytostatic agent of the nitrogen mustard type，Ⅰ.synthesis，isolation，and characterization of reference substances[J].Monatshefte für Chemie Chemical Monthly，1 9 9 7，1 2 8（3）：2 9 1.

[5] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2 0 1 0年版.北京：中國醫藥科技出版社，2 0 1 0：附錄2 9、4 4、6 0、6 8、7 1、7 8、9 9、1 0 3.

Preparation and Quality Control of Bendamustine Hydrochloride for Injection

CHEN Xiang-feng，YANG Qi-zhen，WEI Jia
（Jiangsu Aosaikang Pharmaceutical Co.，Ltd.，Nanjing 2 1 1 1 1 2，China）

OBJECTIVE：To prepare and control the quality of Bendamustine hydrochloride for injection.METHODS：The prescription was screened with the different amount of frozen-dried supporting agent mannitol as factor and compactibility of preparation as index.The preparation technology was determined and HPLC method was adopted to determine the content of preparation.The identification，acid，moisture，the content of related substances and main components and other quality control index were investigated according to Chinese Pharmacopoeia（2 0 1 0edition）.RESULTS：2.2 5%mannitol was used as excipient，and decarbonization technology wasn’t adopted.The quality index of products were all up to the requirements of Chinese Pharmacopoeia.CONCLUSION：The prescription and preparation technology is appropriate，and the quality of product is controllable.

Bendamustine hydrochloride for injection；Preparation；Quality control

R9 4 2；R9 7 9.1

A

1 0 0 1-0 4 0 8（2 0 1 2）1 3-1 2 0 1-0 3

DOI1 0.6 0 3 9/j.issn.1 0 0 1-0 4 0 8.2 0 1 2.1 3.1 8

＊工程師。研究方向：新藥研發。電話：0 2 5-5 1 1 9 8 9 0 9

2 0 1 1-0 4-2 5

2 0 1 1-0 6-0 3）

＊碩士研究生。研究方向：藥物新劑型與新技術。E-mail：lgl1 9 8 6@1 2 6.com

#通訊作者：教授，博士。研究方向：藥物新劑型與新技術。電話：0 3 1 1-8 6 2 6 5 6 3 3。E-mail：caody3@1 6 3.com