鹽酸莫西沙星眼用凝膠體外釋放行為的3種考察方法比較

楊紅艷，夏敬民，張見歡，林三清

（湛江師范學院化學科學與技術學院，廣東湛江 5 2 4 0 4 8）

鹽酸莫西沙星眼用凝膠體外釋放行為的3種考察方法比較

楊紅艷＊，夏敬民，張見歡，林三清

（湛江師范學院化學科學與技術學院，廣東湛江 5 2 4 0 4 8）

目的：篩選考察鹽酸莫西沙星眼用凝膠（MHG）體外釋放行為的方法。方法：采用紫外法在2 8 5 nm波長處測定人工淚液中鹽酸莫西沙星的含量，用改良槳法、透析袋法、擴散池法考察MHG的釋藥行為并進行比較。結果：3種方法考察MHG的體外釋放均更符合Higuchi方程（r分別為0.9 9 9 7、0.9 8 1 5、0.9 9 1 2），1 4 0 min時累積釋放率分別約為9 0%、8 0%、3 0%，以改良槳法考察藥物的釋放速度更快、更完全。結論：鹽酸莫西沙星眼用凝膠宜采用改良槳法考察其體外釋放行為。

鹽酸莫西沙星；眼用凝膠；體外釋放；槳法；透析袋法；擴散池法；比較

鹽酸莫西沙星（MH）是第4代新型超廣譜喹諾酮類抗菌藥，其C-7位上二氮雜環結構加強了對革蘭陽性菌的抗菌作用，8位引入的碳甲氧基則加強了對厭氧菌的作用[1]，且革蘭陽性菌對本品很少產生耐藥性或耐藥性產生很慢，其對需氧革蘭陽性球菌體外抗菌活性比環丙沙星強4～8倍[2]。其在眼內通透性優良，藥物濃度較高[3]，眼用制劑可用于治療敏感菌引起的眼瞼炎、瞼緣腺炎、淚囊炎、結膜炎、角膜炎等癥[4]。

眼用凝膠是一種新型的眼部給藥劑型，能克服普通滴眼液在結膜囊內滯留時間短、藥物難透過角膜、眼內生物利用度低等問題，可以延長藥物在眼部的滯留時間，提高生物利用度。而藥物釋放的速度和釋放持續的時間將影響其在體內的吸收及藥效的發揮，因此運用恰當的方法分析和評價藥物的釋放規律，可以掌握影響藥物釋放的因素，通過控制藥物的釋放行為獲得預期的治療效果。本研究主要比較了3種不同釋放度測定方法測定MH眼用凝膠（MHG）的體外釋藥特性的結果，為眼用凝膠體外釋放考察方法的選擇提供借鑒和參考。

1 儀器與材料

Gold S5 3型紫外-可見分光光度計（上海棱光技術有限公司）；AY-1 2 0型電子分析天平（日本Shimadzu公司）；RYJ-6 A型藥物透皮擴散試驗儀（上海黃海藥檢儀器有限公司）；RC8 0 6溶出試驗儀（天津市天大天發科技有限公司）。

MH原料藥（武漢遠城科技發展有限公司，批號：1 0 0 5 0 3，純度：9 9.9 8%）；卡波姆（9 4 0型，武漢合中化工生物有限公司，批號：2 0 0 9 0 9 0 2）；羥丙基甲基纖維素（HPMC，天津市光復精細化工研究所，批號：2 0 0 7 1 1 1 2）；MHG（自制，規格：每瓶1 0 g ，鹽酸莫西沙星含量為：2 mg·g－1）；MH滴眼液（自制，規格：每瓶1 0 mL，鹽酸莫西沙星含量為：2 mg·mL－1。該處方中除去了卡波姆和HPMC，其余成分同凝膠）；其他試劑均為分析純。

透析袋（北京鼎國生物技術有限公司，截留分子量：6 0 0 0～8 0 0 0）。

2 方法與結果

2.1 MHG的制備

2.1.1 處方。MH 0.2 g，卡波姆0.3 g，HPMC 0.5 g，甘露醇5 g，甘油5mL，苯扎溴銨1mL，三乙醇胺適量，蒸餾水加至1 0 0 mL。

2.1.2 制備。按處方量取甘油加入卡波姆研磨細膩后加3 0 mL水，放置過夜，使卡波姆充分溶脹；另取HPMC加3 0mL水，放置過夜，使其充分溶脹。將溶脹后的卡波姆和HPMC溶液混合均勻，再將處方量的MH、甘露醇、苯扎溴銨于攪拌條件下緩慢加入，使其完全溶解，加水至1 0 0 mL，再加入適量三乙醇胺，調節pH值約為7.0，即得MHG。

2.2 MH含量測定

2.2.1 測定波長的選擇。精密稱取MH原料藥適量，用人工淚液（每1L人工淚液包括：2.1 8g碳酸氫鈉，6.7 8g氯化鈉，0.0 8 4 g二水氯化鈣，1.3 8 g氯化鉀）制備成1 0μg·mL－1的溶液，以人工淚液為空白，在2 0 0～4 0 0nm波長范圍內進行紫外掃描，選擇最大吸收波長為測定波長。按處方比例稱取輔料，用等量人工淚液溶解，制備不含主藥的輔料溶液，進行紫外掃描，考察處方輔料對主藥測定的干擾情況。結果，MH在2 8 5 nm波長處有最大吸收，空白輔料在此處無吸收，詳見圖1。

圖1 紫外掃描光譜圖Fig 1 Ultraviolet scanning map

2.2.2 標準曲線的制備。精密稱取MH原料藥適量，用人工淚液制備成4 0μg·mL－1的溶液，精密量取0.2 5、0.5、1.0、2.0、3.0、3.5 mL，分別置于1 0 mL量瓶中，加人工淚液至刻度，搖勻。測吸光度（A），以A對質量濃度（c）進行線性回歸，得回歸方程為A＝0.0 9 6 2 c+0.0 0 9 1（r＝0.9 9 9 7），結果表明MH檢測濃度線性范圍為1～1 4μg·mL－1。

2.2.3 精密度試驗。取濃度為1 0μg·mL－1的MH溶液，于同日內連續進樣6次及連續測定6 d，計算其日內RSD＝0.1 3%，日間RSD＝0.8 4%，表明本方法精密度符合要求。

2.2.4 回收率試驗。分別精密稱取MH原料藥適量，用人工淚液制備成高、中、低（1 4、1 0、6μg·mL－1）3個濃度樣品，測定回收率。結果分別為9 9.2%、9 6.1%、9 7.2%，RSD分別為0.3 6%、0.3 7%、1.0 9%。

2.3 體外釋藥試驗

眼用凝膠中藥物的釋放行為研究多采用改良槳法[5]、Franz擴散池法[6]、透析袋法[7]等。本研究分別采用這3種方法來考察MHG的體外釋藥行為，以便了解不同釋放度測定方法對眼用凝膠藥物釋放的影響，通過比較分析，從中找出最適于MHG體外釋放行為的考察方法。

2.3.1 改良槳法[8]。精密稱取2 g MHG，加入西林瓶中，將西林瓶小心放入1 0 0 0 mL溶出杯底部，并使西林瓶中充滿釋放介質，沿溶出杯壁小心倒入預熱至3 5℃的人工淚液5 0 0 mL為釋放介質。調節轉速為7 0r·min－1，溫度3 5℃。分別于1 0、2 0、4 0、6 0、9 0、1 2 0、1 4 0 min取樣1 0 mL（同時補充人工淚液1 0 mL），經0.4 5μm微孔濾膜過濾，在2 8 5 nm波長處測定A，采用標準曲線法計算含量，按下式計算累積釋放量和累積釋放率：Qn＝5 0 0 cn+1 0∑ci（Qi＝5 0 0 ci，n＝1，2，3…）。式中Qn為MH累積釋放量，ci為樣品濃度，i、n分別為取樣次數。繪制釋藥曲線見圖2。

2.3.2 透析袋法。精密稱取MHG 2 g，置于透析袋中，袋兩頭用透析袋夾夾緊（除去袋內氣泡），固定于7 0 0 mL人工淚液中，袋上沿距液面約1 cm，人工淚液的溫度控制在（3 5±1）℃，置于電磁攪拌器中，轉速7 0 r·min－1，其余操作同“2.3.1”項下，繪制釋藥曲線見圖2。

取MH滴眼液2 mL，置于透析袋中，同上操作，測定并計算滴眼液的累積釋放率，繪制釋藥曲線見圖2。

2.3.3 擴散池法。將半透膜固定于供給池與接收池之間，有效擴散面積為2.8 cm2，人工淚液為接收液，接收池容量為7.0 mL，透皮擴散試驗儀的磁力攪拌轉速為2 0 0 r·min－1，水浴溫度（3 5±0.2）℃。先于供給池內精密加入2 g凝膠，使其均勻覆蓋于半透膜表面。分別于1 0、2 0、4 0、6 0、9 0、1 2 0、1 4 0 min傾出所有人工淚液，再重新加入等量、恒溫的人工淚液。經0.4 5μm微孔濾膜過濾，在2 8 5 nm波長處測定A，計算其含量及累積釋藥率，并繪制釋藥曲線見圖2。

圖2 3種方法考察MHG的體外釋放曲線比較（n＝3）Fig 2 Comparison of drug release curves in vitro of MHG by 3methods（n＝3）

由圖2可以看出，凝膠明顯延緩了藥物的釋放：凝膠（透析袋法）在2 0 min時釋放2 7.4%的藥物，此后逐步釋放，1 4 0 min累積釋放率約8 0%；而改良槳法和擴散池法1 4 0 min時累積釋放率分別約為9 0%、3 0%。滴眼液在2 0 min時可釋放約8 0%的藥物，4 0 min時藥物幾乎釋放完全。

結果表明，不同測定方法對藥物的釋放有明顯的影響，其中擴散池法藥物釋放的速度最慢，改良槳法中藥物的釋放速度最快。將MHG 3種不同釋放度測定方法的體外釋放曲線分別以零級、一級和Higuchi方程進行擬合，結果見表1。

表1 體外釋放動力學方程擬合結果Tab 1 Release kinetics equation fitting of MHG in vitro

由表1可以看出，Higuchi方程擬合的相關系數最大，說明Higuchi方程能夠很好地描述MHG的體外釋藥特征，表明MHG中藥物的體外釋放為藥物擴散和凝膠溶蝕相結合的作用機制。在3種釋放度測定方法中，改良槳法的Higuchi方程的相關系數（r＝0.9 9 9 7）最好；同時從釋放曲線可以看出，改良槳法中藥物的釋放速度及程度均要優于透析袋法和擴散池法。因此，在3種釋放度測定方法中，以改良槳法為MHG的體外釋藥最佳測定方法。

3 討論

MHG是以卡波姆與HPMC為凝膠基質制成的凝膠制劑，在凝膠狀態下，藥物的釋放被延緩。從體外釋放曲線可以看出，3種測定方法結果均表明，與滴眼液比較，制成凝膠后不同程度地延緩了藥物的釋放；透析袋法與擴散池法對藥物釋放的阻滯作用較明顯，這是由于這2種方法使用了半透膜，具有截留作用，導致聚合物不能擴散進入釋放介質，聚合物阻滯了藥物的擴散，導致藥物的累積釋放率低。眼用凝膠制劑易受淚液及眨眼剪切的影響，在眼內逐漸溶蝕并釋放出其中的藥物；改良槳法不受半透膜的限制，凝膠的溶蝕與藥物的釋放同步進行。因此，本試驗結果表明，改良槳法能較好地考察眼用凝膠的釋藥行為，宜用于眼用凝膠中藥物體外釋放度的測定。

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Comparison of 3 Kinds of Methods for Drug Release Behavior of Moxifloxacin Hydrochloride Ophthalmic Gel in Vitro

YANG Hong-yan，XIA Jing-min，ZHANG Jian-huan，LIN San-qing
（School of Chemistry Science and Technology，Zhanjiang Normal University，Guangdong Zhanjiang 5 2 4 0 4 8，China）

OBJECTIVE：To screen the method for the determination of drug release behavior of Moxifloxacin hydrochloride ophthalmic gel（MHG）in vitro.METHODS：The content of moxifloxacin hydrochloride in artificial tears were determined by UV at 2 8 5nm，and the drug release behavior of MHG were studied and compared by the improved paddle method，bag filter method and diffusion chamber method.RESULTS：The in vitro release behavior of MHG followed Higuchi equation by 3methods（r＝0.9 9 97，0.9 8 15，0.9 9 12）.Accumulative release rates of MHG were 9 0%，8 0%and 3 0%within 1 4 0min by 3methods.The improved paddle method is more rapid and complete.CONCLUSION：Drug release behavior of MHG should be investigated by improved paddle method.

Moxifloxacin hydrochloride；Ophthalmic gel；Release in vitro；Paddle method；Bag filter method；Diffusion chamber method；Comparison

R9 2 7.1；R9 8 8.1

A

1 0 0 1-0 4 0 8（2 0 1 2）3 3-3 1 4 6-0 3

DOI1 0.6 0 3 9/j.issn.1 0 0 1-0 4 0 8.2 0 1 2.3 3.3 0

＊講師，碩士。研究方向：新藥開發與新劑型。E-mail：hongyan7 9 1 0@tom.com

2 0 1 1-0 9-1 3

2 0 1 1-1 0-2 6）

＊副主任藥師。研究方向：藥物分析。電話：0 9 5 4-2 0 4 0 3 7 6。E-mail：nglja@1 2 6.com