RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定酚酞含片中酚酞及雜質(zhì)熒光母素的含量

李居安，王 麗（寧夏固原市藥品檢驗(yàn)所，寧夏固原 756000）

RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定酚酞含片中酚酞及雜質(zhì)熒光母素的含量

李居安＊，王 麗（寧夏固原市藥品檢驗(yàn)所，寧夏固原 756000）

目的：建立同時(shí)測(cè)定酚酞含片中酚酞及雜質(zhì)熒光母素含量的方法。方法：采用反相高效液相色譜法。色譜柱為Phenomenex-C18，流動(dòng)相為甲醇-水（80∶20），流速為1.0mL·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng)為285nm，進(jìn)樣量為20μL。結(jié)果：酚酞與熒光母素色譜峰可有效分離，酚酞、熒光母素檢測(cè)濃度的線性范圍分別為4～100（r＝0.9999）、0.21～5.30（r＝0.9999）μg·mL－1，平均回收率分別為100.27%、99.89%，RSD分別為0.45%、1.04%；3批樣品中雜質(zhì)含量＜0.11%。結(jié)論：本方法專屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

反相高效液相色譜法；酚酞含片；熒光母素；含量測(cè)定

酚酞為刺激性瀉藥，主要用于治療慢性便秘。酚酞含片是化學(xué)藥品地標(biāo)升國(guó)標(biāo)第14冊(cè)[1]收載的品種，含量測(cè)定方法為滴定法，該法操作煩瑣，容易引起誤差。另由于在酚酞合成過(guò)程中伴有熒光母素生成，各國(guó)藥典都規(guī)定了酚酞中熒光母素的限量檢查。《中國(guó)藥典》（2010年版二部）采用薄層色譜法檢查[2]，酚酞原料藥中其檢測(cè)限量為0.10%；酚酞片中其檢測(cè)限量為0.5%，但該法容易造成判斷誤差；酚酞含片標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下尚無(wú)熒光母素限量檢查。為控制該制劑質(zhì)量，筆者采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法對(duì)酚酞含片中酚酞及熒光母素含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，該法專屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1200系列HPLC儀、G1314BVMD紫外檢測(cè)器（美國(guó)Agilent公司）；AG-135雙量程電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

1.2 試藥

酚酞對(duì)照品（批號(hào)：100091-199601，純度：100%）、熒光母素對(duì)照品（批號(hào)：100075-197902，純度：100%）均來(lái)源于中國(guó)食品藥品檢定研究院；酚酞含片（寧夏啟元國(guó)藥有限公司，批號(hào)：090615、20090612、110328，規(guī)格：每片0.1g）；甲醇為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Phenomenex-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（80∶20），流速：1.0mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：285nm；進(jìn)樣量：20μL；柱溫：30℃。在該色譜條件下，取“2.2.1”項(xiàng)下樣品溶液和“2.2.3”項(xiàng)下對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣，理論板數(shù)按酚酞計(jì)不低于5000。結(jié)果，酚酞保留時(shí)間為3.130min，熒光母素保留時(shí)間為6.186min，色譜見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對(duì)照品；B.樣品；1.酚酞；2.熒光母素Fig1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；1.phenolphthalein；2.fluoran

2.2 溶液制備

2.2.1 樣品溶液的制備。取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于酚酞10mg）置于100mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為樣品溶液。

2.2.2 熒光母素對(duì)照溶液制備。精密稱取熒光母素對(duì)照品10mg置于100mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻作為對(duì)照溶液。

2.2.3 對(duì)照品溶液制備。精密稱取酚酞對(duì)照品10mg置于100mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解，再精密量取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照溶液5mL，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

精密量取“2.2.3”項(xiàng)下對(duì)照品溶液2、5、10、25、50mL分別置于50mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。進(jìn)樣分析，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，濃度（c）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得酚酞、熒光母素回歸方程分別為A＝12752.36c+36.24（r＝0.9999）、A＝20272.88c+7.18（r＝0.9999）。結(jié)果，酚酞、熒光母素檢測(cè)濃度線性范圍分別為4～100、0.21～5.30μg·mL－1。

2.4 精密度試驗(yàn)

取“2.2.3”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。結(jié)果，酚酞、熒光母素的RSD分別為0.8%、1.0%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一樣品溶液，于0、3、6、12、24h分別進(jìn)樣，依法測(cè)定。結(jié)果，酚酞、熒光母素的RSD分別為0.51%、0.66%。

2.6 回收率試驗(yàn)

精密量取10mL已知酚酞含量的樣品溶液9份，分別精密加入對(duì)照品溶液8、10、12mL（相當(dāng)于樣品中已知酚酞含量的80%、100%、120%）各3份，測(cè)定含量，計(jì)算低、中、高濃度酚酞回收率。另精密量取10mL已知熒光母素含量的樣品溶液9份，分別精密加入對(duì)照品溶液0.16、0.20、0.25mL（相當(dāng)于樣品中已知熒光母素含量的80%、100%、120%）各3份，測(cè)定含量，計(jì)算低、中、高濃度熒光母素回收率。回收率結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1Results of recovery tests（n＝9）

2.7 樣品中酚酞、熒光母素含量測(cè)定

取樣品和對(duì)照品溶液依法測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算酚酞、熒光母素含量，并與化學(xué)藥品地標(biāo)升國(guó)標(biāo)第14冊(cè)滴定法[1]比較，結(jié)果2種方法測(cè)定的酚酞含量結(jié)果無(wú)明顯差異，詳見(jiàn)表2。

表2 樣品中酚酞、熒光母素含量測(cè)定結(jié)果（n＝5）Tab 2Content determination of phenolphthalein and fluoran in samples（n＝5）

3 討論

（1）波長(zhǎng)的選擇。對(duì)熒光母素和酚酞對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外掃描，發(fā)現(xiàn)二者最大吸收波長(zhǎng)分別為285、275nm，由于熒光母素濃度為5μg·mL－1，與酚酞（100μg·mL－1）濃度相差20倍，故本方法檢測(cè)波長(zhǎng)選用熒光母素的最大吸收波長(zhǎng)，即285nm。

（2）流動(dòng)相的選擇。筆者曾試驗(yàn)用甲醇-0.02mol·L－1磷酸溶液（80∶20）[3]作為流動(dòng)相，結(jié)果與本文采用的流動(dòng)相比較分離效果相差不大，但由于該流動(dòng)相制備相對(duì)煩瑣，因此選擇甲醇-水（80∶20）作為流動(dòng)相。

[1]WS-10001-（HD）-1324-2003，酚酞含片標(biāo)準(zhǔn)（第14冊(cè)）[S].2003：14-72.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：882.

[3] 梁選革，武國(guó)怡.高效液相色譜法測(cè)定酚酞溶液與酚酞片中熒光母素含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2006，25（11）：1210.

Simultaneous Determination of Phenolphthalein and Fluoran in Phenolphthalein Buccal Tablets by RP-HPLC

LI Ju-an，WANG Li（Ningxia Guyuan Institute for Drug Control，Ningxia Guyuan 756000，China）

OBJECTIVE：To establish a method for simultaneous determination of phenolphthalein and fluoran in Phenolphthalein buccal tablets.METHODS：RP-HPLC method was adopted.The determination was performed on Phenomenex-C18column with mobile phase consisted of methanol-water（80∶20）at the flow rate of 1.0mL·min－1.The detection wavelength was set at 285nm and injection volume was 20μL.RESULTS：Phenolphthalein and fluoran could be separated completely.The linear range was 4～100μg·mL－1for phenolphthalein（r＝0.9999）with average recovery of 100.27%（RSD＝0.45%）and 0.21～5.30μg·mL－1for fluoran（r＝0.9999）with average recovery of 99.89%（RSD＝1.04%）.The content of impurity in 3batches was lower than 0.11%.CONCLUSION：The method is specific，simple，accurate and reliable for quality control of Phenolphthalein buccal tablets.KEY WORDS RP-HPLC；Phenolphthalein buccal tablets；Fluoran；Content determination

R927.2

A

1001-0408（2012）33-3148-02

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2012.33.31

2011-09-03

2011-11-07）