Survivin蛋白在鼻咽癌組織中表達及其臨床意義

舒禹先 鄔 蒙

鼻咽癌是我國南方最常見的嚴重危害人們的身體健康的惡性腫瘤之一。它的主要治療手段是放療，但據(jù)國內(nèi)各大放療中心的統(tǒng)計，患者放療后平均5年生存率仍只有50%左右。放療失敗的主要原因是局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移。臨床發(fā)現(xiàn)，不同分期患者，預后差異固然很大，但既便同一分期患者，其生存時間也往往不一樣;另外，有的患者照射后腫塊退縮迅速，而有的卻表現(xiàn)得相當抗拒。這些差異的存在，提示我們腫瘤內(nèi)部還可能有目前常規(guī)檢查不能發(fā)現(xiàn)的某些因素，如能搞清這些因素的作用機理，有可能對每個患者進行更準確地臨床分期和預后評估，最大限度地改善鼻咽癌的療效。許多學者研究表明Survivin在腫瘤組織中的過表達與生存期縮短、預后不良、對治療抵抗和加速復發(fā)有關［1，2］。本研究應用免疫組化，對128例 NPC患者癌組織中Survivin蛋白表達進行檢測，統(tǒng)計其即時療效生存率和復發(fā)率，探討Survivin基因與NPC轉(zhuǎn)移復發(fā)及放療敏感性的關系，為鼻咽癌的綜合治療及基因治療提供實驗和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇江西省腫瘤醫(yī)院1996年～2001年收治的、經(jīng)病理檢查確診的、完成全程根治性放療、臨床資料完整、隨訪5年以上的128例NPC(NPC)患者。年齡18～67歲，平均47.2歲;其中男性81例，女性47例;病理檢查結果均為低分化鱗癌。按1992年福州分期，Ⅰ期10例，Ⅱ期19例，Ⅲ期44例，Ⅳ期55例;頸部淋巴結無轉(zhuǎn)移26例，頸部淋巴結轉(zhuǎn)移102例。

1.2 治療方法

采用6MV直線加速器X線或Co60γ線常規(guī)分割照射，患者均行根治性放療，5次/周，2 Gy/次。鼻咽照射設雙側(cè)面頸聯(lián)合野加下頸部切線野，完成40 Gy后，避脊髓改用小面頸野或耳前野加頸部切線野，后頸部改用電子線照射補量，鼻咽照射劑量DT70 Gy/7周左右，淋巴結腫大者頸部照射劑量DT64～70 Gy/6～7周;未觸及頸部淋巴結者預防照DT50 Gy/5周。脊髓及腦干劑量控制在45 Gy以下。

1.3 療效評價

放療結束時及放療后6個月根據(jù)臨床和CT檢查結果評價鼻咽原發(fā)灶和頸部淋巴結消退情況。按WHO實體瘤客觀療效的評定標準進行評價。

1.4 隨訪

放療后1年內(nèi)每3個月隨訪1次，放療后2～3年每半年隨訪1次，3年以上每年隨訪1次。隨訪內(nèi)容包括鼻咽鏡檢查、鼻咽CT掃描、腹部B超、胸片，隨訪時間為5～10年，失訪9例，失訪者自失訪之日起按死亡計算，隨訪率為92.9%。

1.5 免疫組化染色

所有標本經(jīng)10% 中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，常規(guī)HE染色，光鏡下觀察確定分型。免疫組化染色采用MaxvisionTM二步法。采用高溫高壓檸檬酸修復法進行抗原修復，以試劑公司提供的陽性切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。DAB染色，蘇木精返藍。由兩位有經(jīng)驗的病理醫(yī)生在不知道任何臨床和病理資料的情況下，對免疫組化切片進行判斷:①根據(jù)陽性染色強度判斷，細胞無染色記0分;細胞呈淺棕色為弱陽性，記1分;細胞呈棕色、并無背景染色，或細胞呈深棕色、有淺棕色背景，為中等陽性，記2分;細胞呈深棕色、無背景著色，為強陽性，記3分。②根據(jù)陽性細胞數(shù)計分，每例隨機計數(shù)5個高倍鏡(×400)視野，確定其每個視野的陽性細胞數(shù)，取平均數(shù):無陽性細胞，計0分;陽性細胞數(shù)≤25%，計1分;26% ～50%，計2分;﹥50%以上，計3分。③由2位病理學專家進行結果判斷計分，以上兩項計分的乘積作為最終計分結果:0分為陰性表達;1～2分為弱陽性;3～4分為中等陽性;6～9分為強陽性。

1.6 統(tǒng)計學方法

應用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理，組間比較采用χ2檢驗。如四格表資料中有T＜5時采用四格表的Fisher確切概率法，P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 NPC組織中Survivin蛋白表達情況

128例NPC組織中90例Survivin表達陽性，陽性率為70.3%(90/128)。Survivin在細胞核及細胞質(zhì)中均有表達，呈淡染黃色和棕黃色顆粒。全組病例中陰性表達39例、弱陽性表達19例、中等陽性表達43例、強陽性表達27例。

2.2 Survivin蛋白與NPC臨床分期的關系

Ⅲ～Ⅳ期NPC組織中Survivin蛋白表達率(81.8%)明顯高于Ⅰ～Ⅱ期(27.6%)，兩者比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。Survivin蛋白表達Ⅲ期與Ⅳ期比較無統(tǒng)計學意義(χ2=0.275，P ＞0.05)。Ⅰ +Ⅱ期NPC組織中Survivin蛋白表達僅2例(25.0%)為中等陽性表達，未見強陽性表達病例;而Ⅲ+Ⅳ期NPC組織中Survivin蛋白表達為中等陽性(包括中等陽性)以上者68例，占83.9%，兩者比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，提示Ⅲ+Ⅳ期NPC組織中Survivin蛋白表達強度強于Ⅰ+Ⅱ期組織，說明Survivin蛋白表達與腫瘤發(fā)展相關(表 1、2)。

表1 Survivin蛋白表達與NPC臨床分期的關系

表2 Survivin蛋白表達強弱與NPC臨床分期的關系

2.3 Survivin蛋白表達與NPC頸部淋巴結轉(zhuǎn)移的關系

128例患者中102例發(fā)生頸部淋巴結轉(zhuǎn)移，其Survivin蛋白陽性表達率為74.5%(76/102)。26例無頸部淋巴結轉(zhuǎn)移患者中，Survivin蛋白表達率為50.0%(13/26)，兩者比較有統(tǒng)計學意義(P ＜0.05)，提示Survivin表達陽性患者出現(xiàn)淋巴結轉(zhuǎn)移的可能性較大。

2.4 Survivin表達與NPC放療敏感性的關系

Survivin表達陽性患者，根治性放療后 CR為67.4%(60/89)，PR 為 32.6%(29/89);表達陰性者CR 為 92.3%(36/39)，PR 為 7.7%(3/39)。Survivin蛋白中等陽性(含中等陽性)以上表達者CR為64.3%(45/70)，而Survivin蛋白中等陽性以下表達者CR為87.9%(51/58)，兩者比較有統(tǒng)計學意義(P ＜0.01)，提示隨著Survivin蛋白陽性表達強度增強，其放療敏感性逐漸變差。

2.5 Survivin蛋白表達與患者預后的關系

128例患者治療后生存時間＞5年73例，其中48例(65.7%)Survivin蛋白表達陽性;生存時間＜3年24例，其中21例(87.5%)Survivin蛋白表達陽性，兩者比較有顯著性差異(P＜0.05)。Survivin蛋白表達陽性的89例中，生存時間＜3年49例(55.1%)，生存時間﹥5年34例(38.2%);Survivin蛋白表達陰性39例中，生存時間＜3年13例，生存時間﹥5年21例(61.8%)，兩者比較有顯著差異(P ＜0.05)。提示 Survivin蛋白表達陽性患者預后較差。

2.6 Survivin蛋白表達與腫瘤復發(fā)及遠處轉(zhuǎn)移的相關性

Survivin陽性表達者復發(fā)率為30.3%(27/89)，陰性表達者復發(fā)率為10.3%(4/39)，兩者比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Survivin陽性表達者遠處轉(zhuǎn)移率為22.5%(20/89)，陰性表達者遠處轉(zhuǎn)移率為5.1%(2/39)，兩者比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

3 討論

Survivin是近年來發(fā)現(xiàn)的1種凋亡抑制因子，是凋亡抑制蛋白家族的成員之一。IAPs是廣泛存在于許多物種細胞內(nèi)的具有凋亡抑制作用的一組蛋白質(zhì)。目前對Survivin的研究已取得了一定進展，發(fā)現(xiàn)其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演了一個重要角色。為此，人們對Survivin的研究給予了極大的關注。Survivin在人體組織中的分布具有明顯的特征，通常Survivin表達于胚胎和胎兒組織，但不表達于分化成熟的正常成人組織(胸腺、生殖腺除外)。而在大多數(shù)腫瘤組織中有表達［3，4］。

本研究中鼻咽癌組織Survivin陽性率為70.3%，在文獻報道的60% ～90%［5，6］范圍之內(nèi)，周圍正常組織未見Survivin表達。其中Ⅰ+Ⅱ期與Ⅲ+Ⅳ期、頸部淋巴轉(zhuǎn)移者與無淋巴結轉(zhuǎn)移者及有無遠處轉(zhuǎn)移組間Survivin陽性表達率的差異均有統(tǒng)計學意義。并且Survivin蛋白表達強度隨著分期升高、淋巴結及遠處轉(zhuǎn)移出現(xiàn)而上升，與蔡俊宏等［7］及陳吉添等［6］的報道一致，提示Survivin在鼻咽癌患者的疾病進展過程中可能起著一定的作用，而且對其預后有重要的臨床價值。但也有結論相反的報道，向秋等［8］研究發(fā)現(xiàn)Survivin表達可能與鼻咽癌淋巴結轉(zhuǎn)移、臨床分期無關。因此，有關Survivin與鼻咽癌淋巴結轉(zhuǎn)移、臨床分期的關系尚需大樣本進一步研究。

鼻咽癌經(jīng)首程根治性放療后鼻咽、頸部復發(fā)約20% ～40%［9］，這其中原因之一是由于部分鼻咽癌對放療存在抗拒。因此，增強鼻咽癌的放療敏感是提高鼻咽癌治療效果策略之一。雷迅等［10］采用脂質(zhì)體將Survivin特異性siRNA轉(zhuǎn)染鼻咽癌5～8F細胞系發(fā)現(xiàn)增強了鼻咽癌5～8F細胞對放療的敏感性，細胞凋亡和抑制百分率較單獨放療明顯增多，S期細胞在細胞周期中的比例明顯升高，細胞周期阻滯在S期。在本研究中，Survivin表達陽性者完全緩解率為67.4%(60/89)，部分緩解率為32.6%(29/89);表達陰性者完全緩解率為92.3%(36/39)，部分緩解率為7.7%(3/39)，兩組比較有統(tǒng)計學意義。Survivin蛋白呈中等陽性以上表達的NPC完全緩解率為64.3%(45/70);而Survivin蛋白呈中等陽性以下表達的NPC完全緩解率為87.9%(51/58)，兩組比較有統(tǒng)計學意義，說明Survivin是鼻咽癌放療增敏作用的一個潛在靶分子。

鼻咽癌的預后指標目前己確立有腫瘤大小、臨床分期、年齡及顱神經(jīng)損害等［11］。隨著分子生物學的發(fā)展，越來越多的分子生物學的指標成為臨床判斷NPC預后的參考指標。蔡俊宏等［7］發(fā)現(xiàn)Survivin蛋白高表達的鼻咽癌患者平均生存時間為28.9個月，明顯低于Survivin蛋白低表達者的44.5個月，Survivin mRNA高水平的鼻咽癌患者平均生存時間為29.9個月，明顯低于SurvivinmRNA低水平者的 40.1個月。姜武忠等［12］研究亦發(fā)現(xiàn)鼻咽癌組織中的Survivin表達陽性患者3、5年生存率明顯低于陰性表達者，本組研究結果與上述結果相似。可見Survivin蛋白表達陽性的鼻咽癌患者預后較差。單因素分析表明Survivin在NPC中的高表達，可作為判斷預后的輔助指標。與國內(nèi)有關Survivin的表達與NPC預后文獻報道的一致，因此，本研究支持Survivin作為鼻咽癌判斷預后的一個輔助指標。

綜上研究，Survivin蛋白在鼻咽癌組織中的有較高的表達，其表達強度對與鼻咽癌患者臨床特征顯著相關，但目前的要求大部分仍停留在回顧性研究上，故需大規(guī)模前瞻性臨床試驗予以驗證。

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