降鈣素基因相關(guān)肽基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓易感性的關(guān)聯(lián)研究

胡遠(yuǎn)東

（貴州省人民醫(yī)院ICU，貴州 貴陽(yáng) 550002）

約80%左右的高血壓病是由多個(gè)基因的遺傳變異與環(huán)境因素共同作用所致的多基因疾病[1]，降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）是人類用分子遺傳學(xué)方法發(fā)現(xiàn)并在機(jī)體得到證實(shí)的神經(jīng)肽，是迄今發(fā)現(xiàn)的舒血管作用最強(qiáng)的物質(zhì)。本研究通過(guò)對(duì)293例原發(fā)性高血壓患者及208例血壓正常者的基因型進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)CALCA基因多態(tài)性（SNP）與原發(fā)性高血壓易感性有關(guān)。

1 材料與方法

1.1 樣本來(lái)源

原發(fā)性高血壓病例標(biāo)本來(lái)自2011～2012年貴州省人民醫(yī)院門診新發(fā)高血壓患者，排除非原發(fā)性高血壓、心肌病、風(fēng)濕性心臟瓣膜病、2型糖尿病、慢性腎功能衰竭及其他心血管疾病患者。正常對(duì)照組來(lái)自貴州省人民醫(yī)院健康體檢者，排除高血壓病史。抽取每名研究對(duì)象靜脈血5ml，EDTA抗凝后離心分離血漿和血細(xì)胞并凍存，分別測(cè)定ADMA濃度和提取基因組DNA。同時(shí)記錄病例和對(duì)照組人群的基本資料和一般情況如性別、年齡、血壓、吸煙、身高、體重及糖尿病、高脂血癥、肝腎疾病等疾病史，并記錄肝腎功能等相關(guān)生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果，以上資料錄入數(shù)據(jù)庫(kù)。兩組之間的一般情況比較如表1。

表1 高血壓病病例和對(duì)照人群一般情況比較

1.2 研究方法

提取外周血基因組DNA，PCR擴(kuò)增基因目標(biāo)片段，根據(jù)人CALCA基因組DNA序列，應(yīng)用軟件Primer設(shè)計(jì)PCR和基因分型引物，PCR擴(kuò)增CALCA基因T-692C的PCR產(chǎn)物，用限制性內(nèi)切酶PshAI進(jìn)行酶切消化，瓊脂糖凝膠電泳分析基因型。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用LDA軟件檢驗(yàn)哈-溫平衡（HWE），單倍型的構(gòu)建采用Phase 2.0軟件進(jìn)行，單倍型標(biāo)簽SNP的確定采用SNP tag軟件進(jìn)行。數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS11.5，病例與對(duì)照組基因型與等位基因頻率的比較采用χ2檢驗(yàn)。病例和對(duì)照組的臨床特性計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間的比較計(jì)數(shù)資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用χ2檢驗(yàn)。應(yīng)用非條件logistic回歸分析，對(duì)影響高血壓發(fā)病率的相關(guān)因素如年齡、性別、吸煙史、大量飲酒史、高脂血癥和高血壓病家族史的有無(wú)進(jìn)行校正，分析基因型與高血壓病易感性的關(guān)聯(lián)關(guān)系，計(jì)算出P值，比值比（Odds ratio，OR）及其95%的置信區(qū)間（Confidence index，CI）。P＜0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著意義。

2 結(jié) 果

高血壓病組CALCA多態(tài)性位點(diǎn)TT、TC、CC基因型的頻率分別為：85.7%、12.6%、1.7%，對(duì)照組分別為92.8%、7.2%、0.0%（表2），基因型頻率符合Hardy-Weinberg平衡。高血壓病組與對(duì)照組CALCA T-692C基因型分布比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=4.286，P=0.038）。高血壓組C等位基因頻率為8.0%，對(duì)照組為3.7%。C等位基因在高血壓病以及對(duì)照組的分布差異有顯著性（P＝0.023）。

表2 高血壓病病例和對(duì)照人群中CALCA 基因T-692C多態(tài)位點(diǎn)基因型分布情況比較

3 討 論

CGRP不僅直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞鈣通道、促進(jìn) NO釋放產(chǎn)生舒血管作用。還可抑制由炎癥因子誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞的增殖，對(duì)心血管系統(tǒng)功能表現(xiàn)出復(fù)雜和多樣的調(diào)節(jié)。CGRP也與其他血壓調(diào)節(jié)通路如去甲腎上腺素血管緊張素Ⅱ（AgiotensinⅡ）相互作用，共同調(diào)節(jié)全身外周阻力[5，7]。血管緊張素Ⅱ通過(guò)突觸前AgiotensinⅡ受體抑制CGRP能神經(jīng)功能，而 CGRP除可對(duì)抗AgiotensinⅡ的縮血管作用外，還能抑制醛固酮的分泌（尤其是AgiotensinⅡ引起的醛固酮的分泌）。上述假設(shè)已得到動(dòng)物模型和人體實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證實(shí)[2，3，4]。

本研究中通過(guò)實(shí)驗(yàn)初步證實(shí)了CALCA基因多態(tài)性與人群高血壓易感性有關(guān)的假設(shè)，即CALCA T-692C位點(diǎn)的SNP與高血壓發(fā)病率相關(guān)，該位點(diǎn)C等位基因攜帶者發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)升高。而在之前，類似的研究只有日本的一項(xiàng)關(guān)于CALCA第1個(gè)內(nèi)含子中的一個(gè)2bp的微缺失與原發(fā)性高血壓的易感性關(guān)系的研究探討過(guò)CALCA基因變異與原發(fā)性高血壓之間的關(guān)系[8]。而我們首次調(diào)查了CALCA T-692C 的SNP與中國(guó)漢族人群高血壓發(fā)病率的關(guān)系。但是，由于亞組樣本數(shù)量的限制，這些結(jié)果仍然是初步的，還需要進(jìn)一步進(jìn)行大規(guī)模的研究。

[1]Chen S,Lu X,Zhao Q,et al.Association of adrenomedullin gene polymorphisms and blood pressure in a Chinese population[J].Hypertens Res,2012,35(9):883-962.

[2]Jung J,Barrett PQ,Eckert GJ,et al.Variations in the Potassium Channel Genes KCNK3 and KCNK9 in Relation to Blood Pressure and Aldosterone Production: An Exploratory Study[J].J Clin Endocrinol Metab,2012,97(6):1802-1822..

[3]Chang YC,Chiu YF,Lee IT,et al.Common ALDH2 genetic variants predict development of hypertension in the SAPPHIRe prospective cohort: Gene-environmental interaction with alcohol consumption[J].BMC Cardiovasc Disord,2012,12(1):58.

[4]Zolk O,Ott C,Fromm MF,et al.Effect of the rs168924 singlenucleotide polymorphism in the SLC6A2 catecholamine transporter gene on blood pressure in Caucasians[J].J Clin Hypertens (Greenwich),2012,14(5):293-298.

[5]Kivisto KT,Niemi M,Schaeffeler E,et al.CYP3A5 genotype is associated with diagnosis of hypertension in elderly patients: data from the DEBATE Study[J].Am J Pharmacogenomics ,2005,5(3):191-195.

[6]Deng PY,Ye F,Zhu HQ,et al.An increase in the synthesis of calcitonin gene-related peptide in two-kidney,one-clip hypertensive rats[J].Regal Pept,2003,114(2-3):l75-182.

[7]Kawasaki H,Okazaki M,Nakatsuma A,et a1.Long-term treatment with angiotensin converting enzyme inhibitor restores reduced calcitonin gene-related peptide-containing vasodilator nerve function in mesenteric artery of spontaneously hypertensive rats[J].Eur J Pharmaco1,1999,79(2):221-229.

[8]Tabara Y,Kohara K,Miki T. Millennium Genome Project for Hypertension.Hunting for genes for hypertension: the Millennium Genome Project for Hypertension[J].Hypertens Res,2012,35(6):567-573.