熱休克蛋白B1在胰腺癌組織中的表達及臨床意義

劉清華 趙晨燕 張晶 陳穎 倪燦榮 朱明華

·論著·

熱休克蛋白B1在胰腺癌組織中的表達及臨床意義

劉清華 趙晨燕 張晶 陳穎 倪燦榮 朱明華

目的檢測熱休克蛋白B1(HSPB1)在胰腺癌組織中的表達，分析其與腫瘤臨床病理特征間的關系。方法選取47例胰腺癌、13例癌旁組織、3例慢性胰腺炎組織標本，用組織芯片構建儀制備組織芯片，應用免疫組織化學SP法檢測HSPB1的表達。以陽性細胞所占的比例和染色強度兩者評分乘積為標準進行結果判斷。結果胰腺癌、癌旁和慢性胰腺炎組織中HSPB1的陽性表達率分別為80.9%(38/47)、12.5%(2/16)，兩者差異具有統計學意義(χ2=24.058，P=0.000)。胰腺癌組織HSPB1的表達與患者性別、年齡及腫瘤部位、組織學類型、神經浸潤均無關(P值均>0.05)。結論HSPB1參與了胰腺癌的發生、發展，這一過程可能是早期的分子事件。

胰腺腫瘤； 熱休克蛋白質類； 芯片分析技術； 免疫組織化學

熱休克蛋白(heat shock protein, HSPs)是細胞受到刺激后產生的一類高度保守的蛋白質。熱休克蛋白B1(HSPB1)又稱HSP27，屬于小分子量HSP。近年來，關于HSPB1與惡性腫瘤的關系日益受到重視。本研究采用組織芯片技術和免疫組織化學染色法探討HSPB1在人胰腺癌組織中的表達，分析其與腫瘤臨床病理特征的關系。

材料和方法

一、組織標本

收集我院2003年病理科存檔的臨床資料完整的石蠟標本63例，其中胰腺導管腺癌47例，慢性胰腺炎3例，癌旁正常胰腺組織13例。病理診斷結果經兩名以上病理醫師確認。47例胰腺導管腺癌中男性 28例，女性19例；年齡34～75歲，中位年齡60歲；高分化腺癌10例，中分化腺癌30例，低分化腺癌7例；伴有神經浸潤者26例，無神經浸潤者21例。

二、組織芯片構建

根據HE切片確定具有代表性的病變部位( 癌和癌旁組織)，然后參照Kononen等[1]方法用組織芯片構建儀(Beecher Instruments, Silver Spring公司)制備組織芯片。即應用構建儀器在1個新的空白蠟塊( 45 mm×20 mm)中穿孔(直徑2 mm)，在選取組織的蠟塊中穿取組織(直徑2 mm)，準確放入空白蠟塊的小孔內，按次序操作，直至將所有組織標本種植于空白蠟塊中，并加以記錄，最后進行連續切片。組織芯片蠟塊含有198個位點，無組織芯脫落。

三、SP免疫組化染色

兔抗人HSPB1多抗(ab5579)購于美國Abcam公司，工作濃度1∶100；SP試劑盒和DAB顯色液均購自北京中杉生物技術公司，按說明書操作。采用PBS緩沖液代替一抗作空白對照，用非免疫血清代替一抗作陰性對照。蛋白陽性染色為淡黃色至棕黃色，定位于細胞質或細胞核。參考Ohuchida等[2]標準，從陽性細胞所占的比例和細胞染色強度兩個方面分別計分：無陽性細胞為0分，<20% 1分，20%～75% 2分，>75% 3分；無著色為0分，淡黃色1分，黃或深黃色2分，褐或棕褐色3分。兩者計分乘積，0分為陰性(-)，1～3分為弱陽性(±)，4～6分為中等陽性(+)，>6分為強陽性(++)。

四、統計學處理

所有數據均應用SPSS11.0軟件進行統計處理。組間HSPB1表達的差異用χ2檢驗， 胰腺癌HSPB1表達與臨床病理特征之間的關系用Spearman相關分析。P<0.05為差異具有統計學意義。

結 果

一、胰腺癌、癌旁及慢性胰腺炎組織中HSPB1的表達

47例胰腺癌組織中HSPB1陽性表達38例，陽性率為80.9%；16例慢性胰腺炎和癌旁組織中2例呈低表達，陽性率為12.5%，兩者差異具有統計學意義(χ2=24.058，P=0.000，圖1)。

二、胰腺癌組織HSPB1的表達與其臨床病理特征的關系

47例胰腺導管腺癌中，HSPB1陽性表達率與患者性別、年齡及腫瘤部位、組織學類型、神經浸潤均無相關性(表1)。

圖1慢性胰腺炎(a)、胰腺癌(b、c)組織中HSPB 1表達(SP ×400)

表1 胰腺癌組織HSPB1表達與腫瘤臨床病理特征的關系

討 論

熱休克蛋白是生物細胞在受到刺激時產生的一類特殊蛋白質,它具有生物活性和免疫協同功能,可保護機體或細胞不受或少受傷害,對維持機體自身的穩定性起著重要作用。HSPB1是熱休克蛋白家族中的小分子熱休克蛋白亞家族(sHSP亞家族)的重要一員，定位于7q21，含3個外顯子，分子質量為27 000，由205個氨基酸組成，其中15、78和82位是絲氨酸，具有保守性，是HSPB1發生磷酸化的主要位點。HSPB1可形成分子質量為400 000～800 000的寡聚體，該寡聚體的聚合與解離因其不同的生物學功能而異。在外界環境刺激下可發生向核和核仁的移位[3]。目前已有多項研究證實HSPB1與腫瘤具有密切的關系。Berrieman等[4]報道，HSPB1表達陽性的小細胞肺癌患者的預后不良。Yang等[5]報道，HSPB1蛋白在長春新堿耐藥的胃癌細胞株SGC7901/VCR中表達明顯增加，且與患者化療療效及預后有關。然而在食管癌、惡性纖維組織瘤等腫瘤中HSPB1的高表達則是預后良好的重要指標[6]。Leonardi等[7]亦發現，HSB1在口腔正常黏膜中的表達水平高于其在癌前病變和鱗癌組織中的表達，分化差的組織較分化好的組織表達下調。以上研究結果提示HSPB1在不同腫瘤中可能起著不同的作用。

Melle等[8]應用顯微微切割技術對9例胰腺癌和10例正常胰腺組織進行蛋白質組學分析時發現胰腺癌組織高表達HSP27,并進一步證實HSP27在胰腺癌患者血清中高表達。Bünger等[9]亦發現HSP27在胰腺癌患者血清中高表達。本結果顯示，HSPB1在胰腺癌組織中高表達，在慢性胰腺炎及癌旁組織中低表達，提示HSPB1參與了胰腺癌的發生、發展過程。但胰腺癌HSPB1的表達與患者性別、年齡及腫瘤部位、組織學類型、神經浸潤等均無明顯相關，提示HSPB1可能是胰腺癌發生的早期分子事件。

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DetectionofHSPB1expressioninpancreaticcanceranditsclinicalsignificance

LIUQing-hua,ZHAOChen-yan,ZHANGJing,CHENYing,NICan-rong,ZHUMing-hua.

ZHUMing-hua,Email:mhzhu2000@hotmail.com

ObjectiveTo investigate the expression of HSPB1 in pancreatic cancer and its relationship with clinicopathological characterization.MethodsPathological specimens from 47 cases of pancreatic cancers, 13 cases of para-cancerous normal pancreatic tissues and 3 cases of chronic pancreatitis tissues were selected, and tissue microarray construction instrument was used to prepare tissue microarray, then the expression of HSPB1 was determined by immunohistochemistry SP method. The scores of the proportion of positive cells and staining intensity were multiplied to make the judgment.ResultsThe expression of HSPB1 in malignant, para-cancerous and chronic pancreatitis tissues was 80.9%(38/47), 12.5%(2/16), respectively; and the difference between the two groups was statistically significant (χ2=24.058,P=0.000). The expression of HSPB1 in pancreatic cancer tissue was not significantly related to sex, age, location, differentiation degree and nerve infiltration of tumor (P>0.05).ConclusionsThe expression of HSPB1 is related to development and progression of pancreatic cancer, and may be an early molecular event.

Pancreatic neoplasm; Heat-shock proteins; Microchip analytical procedures; Immunohistoche mistry

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2012.03.009

國家自然科學基金(30770996，81172310)

200433 上海，第二軍醫大學長海醫院病理科

朱明華，Email:mhzhu2000@hotmail.com

2012-01-04)

(本文編輯：屠振興)