非小細胞肺癌患者呼出氣冷凝液VEGF檢測的臨床意義

姜劍松

(南通大學第二附屬醫院呼吸內科,江蘇南通,226001)

近年來,我國肺癌的發病率及病死率已躍居惡性腫瘤的首位[1],手術治療、化療及放療對患者的5年生存率未見明顯提高。提高5年生存率的關鍵在于肺癌的早期診斷,尋找和研究在早期階段就能檢測到與肺癌發生和進展相關的腫瘤標志物,已成為近年來的研究熱點。呼出氣冷凝液(EBC)分析作為一種簡單、完全無創的檢測方法,可提示氣道炎癥和其他呼吸系統疾病,如肺癌的發生發展[2-3]。血管內皮生長因子(VEGF)是目前已知作用最強的促血管內皮生長因子,與多種腫瘤的血管生成、腫瘤生長及轉移有關。近年來,肺癌中VEGF表達的研究報道較多,其在肺癌組織和血清中的表達增加與肺癌惡性程度、有無淋巴結轉移及預后不良有關[4]。目前對EBC中VEGF檢測的研究尚不多見,本研究通過檢測NSCLC患者和健康對照組EBC和血清中VEGF水平,探討NSCLC患者EBC中VEGF檢測的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2011年6月—2012年7月于本科住院治療的40例(A組)NSCLC患者為研究對象,其中男28例,女12例,平均年齡(61.2±9.6)歲;其中鱗癌12例,腺癌28例;按照2009年國際抗癌聯盟(UICC)新修訂的肺癌 TNM分期標準進行分期,Ⅰ期9例,Ⅱ期7例,Ⅲ期18例,Ⅳ期6例;有淋巴結轉移的18例,無淋巴結轉移的22例;有吸煙史的23例,無吸煙史的17例。所有患者均經病理或細胞學明確診斷。另選擇本院同期住院的穩定期慢性阻塞性肺病(COPD)20例為COPD組(B組),其中男14例,女 6例,平均年齡(60.4±11.6)歲。同期從門診體檢中心選擇20例健康體檢者作為健康對照組(C組),其中男11例,女9例,平均年齡(59.7±10.5)歲。

1.2 方法

1.2.1 EBC的收集及保存:采用德國Eric Jaeger公司生產的EBC收集器(HAAK EK20 E-coScreen)收集EBC。首先將收集器預冷20 min,檢查前受試者需漱口清潔口腔,戴鼻夾,通過咬口器平靜呼吸。將呼出氣直接呼入-20℃冰浴的收集管中,經單向活瓣平靜呼吸20 min后,呼出氣經冷凝變為雪狀物,取出收集管,待標本融化后可以采集到1～3mL的EBC,移至離心管內,-70℃低溫保存待測。

1.2.2 血清的收集和保存:健康對照組血液標本由本院體檢中心提供。NSCLC患者在入院后清晨空腹抽取外周靜脈血5 mL。穩定期COPD患者室溫下標本靜置1h,3500 r/min離心10 min,分離血清,將血清放入2 mL離心管中,置于-70℃低溫冰箱保存待測。

1.2.3 VEGF檢測:采用ELISA法測定EBC及血清中VEGF濃度。試劑盒為VEGF ELISA Kit(購自武漢貝茵萊生物科技有限公司),嚴格按照試劑盒說明書操作,檢測EBC及血清中VEGF濃度。

2 結 果

2.1 3組EBC及血清VEGF水平比較

NSCLC組EBC和血清VEGF水平高于COPD組及正常對照組(P<0.05);COPD組EBC和血清VEGF水平高于正常對照組(P<0.05),見表 1。

表1 3組EBC及血清中VEGF的測定值(pg/mL,)

表1 3組EBC及血清中VEGF的測定值(pg/mL,)

與COPD組比較,＊P<0.05;與對照組比較,#P<0.05。

組別 n EBC-VEGF 血清VEGF肺癌組 40 11.7±6.1＊# 310.5±23.9＊#COPD組 20 6.3±4.9# 217.1±14.7#對照組 20 3.6±1.2 162.5±16.5

表2 NSCLC患者EBC及血清VEGF水平與臨床病理特征的關系(pg/mL,)

表2 NSCLC患者EBC及血清VEGF水平與臨床病理特征的關系(pg/mL,)

臨床病理 生理特征 n EBC-VEGF P值 血清VEGF P值性別 男 28 11.1±4.8 >0.05 306.1±19.6 >0.05女12 10.3±5.2 312.4±21.3年齡 <60歲 15 9.8±5.7 >0.05 315.8±25.7 >0.05≥60歲 25 10.2±4.6 312.5±23.0吸煙史 有 23 11.5±5.9 >0.05 302.5±18.3 >0.05無17 10.8±4.7 296.7±26.8病理類型 鱗癌 12 9.5±5.8 >0.05 302.3±28.6 >0.05腺癌 28 10.3±6.1 313.5±36.2 TNM分期 Ⅰ期 9 5.6±3.2 <0.05 282.3±30.9 <0.05Ⅱ期 7 10.5±3.7 308.4±28.6Ⅲ期 18 14.2±4.0 342.6±25.7Ⅳ期 6 18.7±3.6 375.5±17.6淋巴結轉移 有 18 17.4±5.1 <0.05 347.8±21.1 <0.05無22 8.3±4.6 283.6±35.1

2.2 NSCLC組EBC中VEGF水平與臨床病理特征的關系

EBC和血清 VEGF水平與NSCLC患者的TNM分期及淋巴結轉移呈正相關(P<0.05),與肺癌病理類型及患者性別、年齡吸煙史無密切關系(P>0.05),見表2。

3 討 論

EBC檢測技術與傳統方法相比,具有以下優勢:①EBC的收集過程完全無創,不影響氣道功能或導致炎癥;②可在短期內重復進行;③可作為肺部疾病特異性的檢測手段;④檢測方法簡便,費用低,速度快,患者易于接受,便于推廣。通過EBC檢測肺癌腫瘤標志物,對于肺癌的早期診斷、病情評估、療效評價和預后判斷具有重要意義。研究表明,腫瘤的生長、轉移及轉移部位的生長依賴于組織血管新生[4]。目前已分離純化出30多種促血管內皮生長因子及相關因子,如VEGF、堿性纖維母細胞生長因子、酸性纖維母細胞生長因子、轉化生長因子等,其中以VEGF作用最強、特異性最高。VEGF通過增加內皮細胞的有絲分裂及遷移,重塑細胞外基質和增加血管的通透性,以此調節病理性血管的生成[5],影響腫瘤血管內皮細胞的增殖和遷移等過程[6],因此VEGF可以作為肺癌診斷和組織學分類的標志物。大量研究表明肺癌患者血清及癌組織中VEGF有高水平的表達,其在肺癌中的表達增加與肺癌惡性程度、易發生淋巴結轉移及預后不良有關。Jin等[7]研究發現癌組織VEGF的高表達與病理分級、淋巴結轉移和臨床分期相關(P<0.01)。

目前國內外對EBC中VEGF檢測的研究尚不多。Dalaveris等[8]檢測30例肺癌患者和15例對照組的EBC和血清的VEGF水平,結果發現血清和EBC的VEGF水平具有顯著的相關性(r=0.52,P=0.019)。EBC-VEGF可監測肺癌的病情進展。Gessner等[9]對 17例 NSCLC患者、15例經兩個療程化療的NSCLC患者、穩定期和急性加重期COPD患者各15例及12例健康對照組的EBC水平進行比較,結果發現NSCLC患者EBC-VEGF水平顯著高于其他各組。經過兩療程化療并且腫瘤原發病灶縮小>25%的肺癌患者,其EBC-VEGF顯著低于COPD急性加重期。以上研究表明VEGF參與了NSCLC的發生發展過程,檢測EBC-VEGF的水平對肺癌診斷及預后評估具有一定價值。

本研究采用ELISA方法檢測EBC及血清中的VEGF,結果顯示,EBC和血清中的VEGF水平在肺癌組均高于COPD組及健康對照組,EBC和血清中VEGF水平在COPD組均高于健康對照組,說明EBC-VEGF可作為腫瘤標志物用于肺癌的輔助診斷及肺部良惡性疾病的鑒別診斷。檢測VEGF的結果還顯示,EBC和血漿VEGF水平隨肺TNM分期呈增高趨勢,Ⅳ期患者VEGF水平最高,有淋巴結轉移的的肺癌患者其VEGF水平顯著高于無淋巴結轉移者。說明VEGF促進了肺癌生長轉移,VEGF水平越高,轉移的可能性越大,預后也越差。因而EBC-VEGF可作為肺癌轉移監測和預后評估的指標。

綜上,檢測EBC中VEGF是一種方便、無創的輔助診斷NSCLC的方法,并對病情進展、轉移監測及預后評估有一定提示作用。

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