車前草幾種提取物的抗菌活性研究

陳紅云，申元英

（大理學院公共衛生學院，云南大理 671000）

車前草幾種提取物的抗菌活性研究

陳紅云，申元英*

（大理學院公共衛生學院，云南大理 671000）

目的：比較車前草不同提取物的抗菌活性。方法：采用分光光度比濁法，用車前草的8種溶劑室溫提取物對3種細菌進行抗菌活性研究，8種溶劑分別是自來水、超純水、無水乙醇、甲醇、乙醚、石油醚、三氯甲烷和苯。結果：車前草提取物C、D、E、G、H均有抗菌活性（P＜0.05），提取物A、B沒有抗菌活性（P＞0.05）。結論：車前草的不同有機溶劑提取物均有良好的體外抗菌活性。

車前草；抗菌活性；最小抑菌濃度

上個世紀以來，隨著抗生素的發現和工業化生產，使細菌引起的傳染病得到了極大的控制。但是抗生素的濫用狀況也不容樂觀，由此產生了大批的耐藥菌，致使半合成和改良抗生素的耐藥周期越來越短，給臨床治療帶來了困難〔1〕。因此，盡快研究和開發新的天然來源的或具有新作用機制的抗生素成為世界各國藥物學家、微生物學家研究的熱點。車前草（Plantago asiatica L.）屬車前科（Plantaginaceae）植物，在民間多用干燥全草入藥，始載于《神農本草經》，列為上品。具有清熱利尿、祛痰、涼血、解毒等功效，用于水腫尿少，熱淋澀痛，暑濕瀉痢，痰熱咳嗽，吐血衄血，痛腫瘡毒等諸癥〔2〕。本研究在楊亞軍等〔3-5〕研究報道的基礎上，采用車前草多個溶劑的8種提取物對3種細菌進行抗菌活性研究，從而比較車前草不同提取物的抗菌活性，為細菌性感染的治療及車前草的開發應用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 藥材 車前草于2011年7月采集于云南省大理市蒼山腳下，海拔高度為1 981 m的將軍洞，樣品經有關專家鑒定為車前草植物〔6〕。草藥經洗凈，除去泥沙及雜草，于室內自然陰干得干燥植株全草，用搖擺式高速中藥粉碎機粉碎成長短不規則狀粗粉（過40目篩），儲藏于4℃冰箱，備用。

1.2 儀器 隔水式恒溫培養箱（上海一恒科技有限公司），高壓蒸汽滅菌器（MLS-3780，三洋電機株式會社），雙人單面超凈工作臺（AIRTECH，蘇凈集團安泰公司制造），無菌瓶（高溫121±0.5℃，高壓0.2± 0.05 Mpa滅菌的試劑瓶）。

1.3 試劑 MH瓊脂（生化試劑杭州天和微生物試劑有限公司，批號：110908），MH肉湯（生化試劑杭州天和微生物試劑有限公司，批號：110806）。

1.4 供試菌株 供試菌株為金黃色葡萄球菌（ATCC 25923）、大腸桿菌（ATCC 25922）、銅綠假單胞菌（ATCC 27853）由大理學院基礎醫學院病原生物學綜合實驗室提供。

2 實驗方法

2.1 提取物制備 取8份車前草粗粉各50 g，分別加入自來水、超純水、無水乙醇、甲醇、乙醚、石油醚、三氯甲烷和苯200 mL，20～25℃浸潤提取，每次24 h，共提取4次，合并提取液，減壓干燥的干粉，依次編號為提取物A、B、C、D、E、F、G、H號提取物。儲存于無菌瓶中4℃以下保存備用〔7-9〕。

2.2 供試菌株活化 將供試菌株菌種于MH瓊脂平板上，置37℃恒溫培養箱培養24 h活化，待用。

2.3 菌液制備 挑取活化好的瓊脂平板上形態相同的菌落，用滅菌生理鹽水校正菌液濃度，使其相當于0.5麥氏標準比濁管，再用MH液體培養基稀釋后，備用，稀釋后的菌液在15 min內接種完〔10-11〕。

2.4 最低抑菌濃度（MIC）測定 取無菌小試管15支為一組，共30組。其中第13、14、15管分別為“原液對照管”、“MH肉湯對照管”、“供試菌生長對照管”。每支試管加入肉湯2 mL。配制8種不同提取物原液濃度為250 mg/mL，用移液器吸取藥液1 mL放入第1管內，混勻后吸取1 mL放入第2管，依次逐管進行稀釋到第12管，最后第12管混勻后取出1 mL棄之。除第13、14管外，每支管加入菌液1 mL，置37℃恒溫培養箱內，培養24 h后觀察結果。在對照符合要求的條件下，凡無肉眼可見的細菌生長的藥物最低濃度即為藥物對該供試菌的MIC〔12-13〕。

2.5 數據統計方法 數據資料采用統計學軟件Epidata 3.1版錄入，檢驗數據資料的有效性，SPSS 16.01進行統計分析，統計數值P＜0.05，有統計學意義。

3 結果

車前草各提取物在各管中的濃度見表1，各提取物對供試菌的作用見表2。

表1 車前草各提取物在各管中的濃度（mg/mL）

表2 車前草各提取物對供試菌的MIC（mg/mL）

由表2結果顯示：車前草各種提取物對供試菌的抑制作用為，車前草提取物C、D、E、G、H均有抗菌活性（P＜0.05），提取物A、B沒有抗菌活性（P＞0.05），其中提取物F對銅綠假單胞菌沒有抗菌活性（P＞0.05）。

4 討論與結論

本次實驗采用不同的溶劑對車前草的干品進行有效成份的提取，結果發現，車前草的自來水和超純水提取物無抗菌活性，而車前草的不同有機溶劑提取物均有良好的體外抗菌活性。此次試驗結果與孔陽等〔14〕研究者采用濾紙片擴散法對車前草乙醇提取物的抗菌實驗結果一致。

通過車前草不同的有機溶劑提取物對3種菌株的MIC值大小不同，并且對同一菌株也有大小不同的MIC。說明不同有機溶劑提取的車前草中提取物是由不同種的化學成分組成，它們對不同菌株的抗菌機制有所不同。其抗菌結果差異和作用機制有待進一步研究。本次實驗為體外抗菌實驗，至于在體內能否有抗菌效果，還需要通過動物模型進行體內實驗研究。

志謝 大理學院基礎醫學院病原微生物學綜合實驗室的王濤老師，以及公共衛生學院的張文、林麗佳同學在研究中給予幫助和支持！

〔1〕張堅磊.細菌耐藥性的新問題〔J〕.國外醫學：臨床生物化學與檢驗學分冊，2001，22（1）：45-45.

〔2〕羅晶，李景輝.車前草中有機酸的含量測定〔J〕.中國民族民間醫藥，2010（11）：34-41.

〔3〕楊亞軍，周秋貴，曾紅，等.車前草化學成分及新生物活性研究進展〔J〕.中成藥，2011，33（10）：1771-1776.

〔4〕錢鶯，傅旭春，白海波，等.車前草醇提液降大鼠血尿酸作用的研究〔J〕.中國現代應用藥學，2011，28（5）：406-408.

〔5〕張彤，柳淑玉，柳晨，等.車前草的藥理作用及臨床應用進展〔J〕.時珍國醫國藥，2005，16（1）：67-67.

〔6〕丁迪紅，霍春雁.云南植物志：種子植物：16卷〔M〕.北京：科學出版社，2006：334-340.

〔7〕陳紅云，獎金元，王超芬，等.綿馬貫眾的抗菌活性研究〔J〕.大理學院學報，2005，4（3）：22-23.

〔8〕申元英，楊占秋，劉建軍，等.大黃提取液抗柯薩奇病毒B3的實驗研究〔J〕.北京中醫藥大學學報，1999，22（5）：65-69.

〔9〕張卓然.醫學微生物實驗學〔M〕.北京：科學出版社，2007：1-2.

〔10〕孔陽，馬養民，余博，等.蝙蝠葛莖葉抗菌活性成分的研究〔J〕.西北農林科技大學學報：自然科學版，2005，33（4）：151-153.

〔11〕甘曉玲，黃建林.微生物學與免疫學實踐指導〔M〕.北京：人民衛生出版社，2009：74-77.

〔12〕陳奇，卞如濂，陳修.中藥藥理研究方法學〔M〕.北京：人民衛生出版社，2006：274-277.

〔13〕徐叔云.藥理實驗方法學〔M〕.北京：人民衛生出版社，2002：1649-1661.

〔14〕孔陽，馬養民，李彥軍，等.車前草提取物抗菌活性的研究〔J〕.中國釀造，2010（10）：151-153.

Study on the Antibacterial Activity of Plantago asiatic L.

CHEN Hongyun,SHEN Yuanying*
（College of Public Health，Dali University,Dali，Yunnan,671000，China）

Objective:To compare the antibacterial ability of extracts that was extracted by different dissolvent from plantain. Methods:Tap-water,ultra-pure water,ethanol,methanol,ether,petroleum ether,chloroform and benzene were used to extract the antibacterial ingredients of plantain at room temperature;three kind bacteria were medium containing different extracts,and Spectrophotometry assays were performed to measure the antibacterial ability of extracts.Results:The antibacterial ability of extracts according to C,D,E,G,H（P＜0.05）priority was ingredient extracted.Ingredients extracted by Tap-water,ultra-pure water display non-antibacterial ability（P＞0.05）.Conclusion:Organic solvents were more effective as dissolvent to extract antibacterial ingredients of plantain.

Plantago asiatica L.antimicrobial activity;MIC

Q949.36［文獻標志碼］A［文章編號］1672-2345（2012）03-0021-03

2011-12-20

2012-01-11

陳紅云，碩士研究生，實驗師，主要從事分子流行病學的研究.

*通信作者：申元英，教授.

（責任編輯 毛本勇）