HPLC測(cè)定靈丹草合劑中洋艾素的含量

高 麗，鄧忠峻

（云南盤龍?jiān)坪Ｋ帢I(yè)有限公司，云南 楚雄 675000）

臭靈丹草為菊科植物翼齒六棱菊屬Laggera pterodonta（DC.）Benth.的干燥地上部分［1］，民間廣用其水煎劑治療上呼吸道感染、扁桃腺炎、口腔炎，防治流感等［2］。

藥理試驗(yàn)亦證明臭靈丹草具有治療急性支氣管炎，祛痰、抗腫瘤作用［3］，靈丹草合劑是由臭靈丹草藥材經(jīng)提取揮發(fā)油、煮提、濃縮，加入揮發(fā)油及橙皮酊等輔料制劑而成，具有清熱疏風(fēng)，解毒利咽，止咳祛痰的功效，用于風(fēng)熱邪毒，咽喉腫痛，肺熱咳嗽；急性咽炎，扁桃體炎，上呼吸道感染見上述癥候者［4］。該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［4］中含量測(cè)定方法為標(biāo)準(zhǔn)曲線法，為了提高該制劑的質(zhì)量控制，我們以從臭靈丹草水煎濃縮液中提取分離得到的洋艾素（C20H20O8）［5-6］為對(duì)照品，采用高效液相色譜法對(duì)靈丹草合劑中洋艾素的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，此方法更為簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

安捷倫HP-1100型高效液相色譜儀；洋艾素對(duì)照品（由中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所提供，采用面積歸一法測(cè)定，其純度達(dá)99.4%以上）；靈丹草合劑（云南盤龍?jiān)坪Ｋ帢I(yè)有限公司自制樣品，批號(hào)060301、060302、060603）；乙腈為色譜純，水為二次蒸餾水，其余試劑試藥均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱采用大連依利特 C18（Hypersil ODS2，5μm，4.6 mm×200mm）；以乙腈-1%甲酸溶液（35：65）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)350nm，流速為1.0mLomin-1，柱溫30℃，進(jìn)樣量為10μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取洋艾素對(duì)照品適量，精密稱定，加乙腈制成每1mL含20μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品，搖勻，精密量取5mL，置25mL量瓶中，加乙腈至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備

按靈丹草合劑處方比例及制備工藝制備不含臭靈丹草藥材的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制備，即得。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

在上述色譜條件下分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10μL，注入液相色譜儀，得色譜圖1；結(jié)果供試品色譜圖中呈現(xiàn)與洋艾素對(duì)照品保留時(shí)間相一致的色譜峰，陰性對(duì)照在此處未見色譜峰，說明陰性對(duì)照無干擾，理論塔板數(shù)按洋艾素峰計(jì)算不低于4000。

圖1 樣品HPLC色譜

2.6 線性關(guān)系考察

精密稱取洋艾素對(duì)照品適量，制成濃度為252.8 μg·mL-1的對(duì)照品貯備液，再加乙腈分別稀釋成每1mL含3.16、6.32、12.64、25.28、37.92、50.56、63.20μg的溶液，分別精密吸取各溶液10μL，注入液相色譜儀，進(jìn)行測(cè)定，以洋艾素進(jìn)樣濃度對(duì)峰面積值作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程為Y＝32.42979X-0.187644（r＝0.99995），表明洋艾素在3.16～63.20μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn)

取同一洋艾素對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，連續(xù)6次，計(jì)算得洋艾素峰面積RSD為0.32%，結(jié)果表明該方法精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24h依法測(cè)定，計(jì)算得洋艾素峰面積RSD為0.88%，結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)（060301）的靈丹草合劑6份，按供試品溶液的制備方法制備后進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得洋艾素平均含量為87.47 μg·mL-1，RSD為0.26%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.10 回收試驗(yàn)

采用加樣回收法，取已知含量的同一批（批號(hào)為060301）的靈丹草合劑6份，每份2.5mL，置25mL量瓶中，分別精密加入洋艾素對(duì)照溶液10mL（其濃度23.3 μg·mL-1），按供試品溶液制備方法制備后，精密吸取10μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表1。

表1 靈丹草合劑中洋艾素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.11 樣品測(cè)定

取3批號(hào)的靈丹草合劑樣品，按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備后進(jìn)樣測(cè)定，經(jīng)計(jì)算3批靈丹草合劑中洋艾素（n＝2）的平均含量分別為88.80μg·mL-1、91.30 μg·mL-1、93.15μg·mL-1。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

［1-7］的基礎(chǔ)上，取洋艾素對(duì)照品溶液，在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，在350nm處有較大吸收值，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為350nm。

3.2 流動(dòng)相的選擇

參照文獻(xiàn)［7］，以乙腈-2%甲酸溶液（35：65）為流動(dòng)相進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明此流動(dòng)相適合本品，考慮到2%甲酸酸性較強(qiáng)，對(duì)色譜柱會(huì)造成一定損害，故以1%甲酸溶液為流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明兩種流動(dòng)相對(duì)理論板數(shù)、峰對(duì)稱性、峰面積、保留時(shí)間均無影響，故選擇乙腈-1%甲酸溶液（35：65）為流動(dòng)相。

3.3 提取溶劑的選擇

取本品，精密量取5mL，置25mL容量瓶中，分別選用乙腈、甲醇為溶劑，定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，注入液相色譜儀，以選定的色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，以峰面積比較，結(jié)果乙腈提取的峰面積較高，峰對(duì)稱性較好，因此本實(shí)驗(yàn)采用了乙腈為提取溶劑。

4 結(jié)論

本研究建立了一種HPLC法測(cè)定靈丹草合劑中洋艾素的含量，其操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，具有重復(fù)性、穩(wěn)定性好，回收率高及專屬性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，可為該制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［S］.一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：267.

［2］云南省衛(wèi)生局革命委員會(huì).云南中草藥［M］.昆明：云南人民出版社，1971：656.

［3］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社出版，1996：1889-1890.

［4］國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編（中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)部分）內(nèi)科肺系（一）分冊(cè)［S］.2002：314-317.

［5］趙愛華，魏均嫻.臭靈丹化學(xué)成分研究Ⅱ［J］.化學(xué)學(xué)報(bào)，1994，52（5）：517.

［6］李順林，丁靖塏.臭靈丹中的黃酮醇成分［J］.云南植物研究，1994，16（4）：434.

［7］云南省食品藥品監(jiān)督管理局.云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)［S］.第二冊(cè)，彝族藥.昆明：云南美術(shù)出版社，2005：79-80.