不同中藥材對(duì)三七黑斑病病原Alternaria panax Whetz抑制作用研究

陳昱君 ，王 勇 ，劉云芝 ，楊建忠 ，朱云飛

（1.文山學(xué)院 文山三七研究院，云南 文山 663000；2.文山華信三七股份有限公司，云南 文山 663000）

名貴藥材三七［Panax notoginseng（Burk.） F.H.Chen］經(jīng)過數(shù)百年的人工馴化種植，形成現(xiàn)廣植于云南文山的栽培種。由于長期規(guī)模化單一種植，加之三七喜陰特性，常導(dǎo)致各種病害的暴發(fā)流行，給三七生產(chǎn)帶來巨大損失。三七黑斑病就是三七產(chǎn)區(qū)常年發(fā)生、流行的一個(gè)主要病害［1］，目前仍以施用殺菌劑為主進(jìn)行防治。現(xiàn)代農(nóng)藥在減輕病、蟲危害方面發(fā)揮了很大作用，但同時(shí)也會(huì)給環(huán)境帶來污染［2］。本研究擬通過不同中藥材對(duì)三七黑斑病病原Alternaria panax Whetz（人參鏈格孢）的控制作用研究，探討生物多樣性控制三七黑斑病的可行性。

1 試驗(yàn)方法

1.1 室內(nèi)抑菌試驗(yàn)

選用本地生產(chǎn)的中藥材品種紫丹參（Salvia miltiorrhiza Bge）、川芎（Ligustici chuanxiong）、麥冬（Ophiopogon japonicus）、魚腥草（Houttuyniae cordata）、山奈（Kaempferia galanga L.）、澤蘭（Lycopus lucidus Turcz.Var.hirtus Regel）、玉竹（Polygonatum Odoratum）及三七植株，每種植物取100 g，清水洗凈，研磨成汁，經(jīng)過濾后分別與瓊脂（8 g）、水（500 mL）混合成培養(yǎng)基，同時(shí)設(shè)清水培養(yǎng)基（清水500 mL+瓊脂8 g）為對(duì)照，滅菌備用。

在無菌條件下，取人參鏈格孢純化培養(yǎng)菌落，用打孔器等距離截取菌塊（φ=5 mm）接種于各中藥材和清水培養(yǎng)基上，每處理重復(fù)4次。接種后的培養(yǎng)基置于25 ℃光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，并于接種后 1、3、5、7 d觀察菌絲生長情況，記錄菌落直徑，最后統(tǒng)計(jì)分析各處理菌絲日均生長量。

1.2 病原致病性測(cè)定

將三七、紫丹參、川芎、麥冬、魚腥草、山奈、澤蘭、玉竹等中藥材各50株按10株/盆種植于30×40 cm花盆中，待成活后，用濃度為6×106-7個(gè)/mL Alternaria panax Whetz 孢子懸浮液進(jìn)行噴霧接種，套袋保濕24 h。

于接種后第9 d檢查各處理是否感病，觀察不同中藥材感病癥狀，統(tǒng)計(jì)發(fā)病株數(shù)，計(jì)算發(fā)病率。同時(shí)將表現(xiàn)病狀的植株帶回實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行病原分離鑒定。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 室內(nèi)抑菌試驗(yàn)

由表1可看出，雖然參試中藥材菌絲生長速度均不同程度低于三七培養(yǎng)基，但川芎、紫丹參培養(yǎng)基的菌落擴(kuò)展速度均達(dá)1.2 cm/d以上，其生長量與對(duì)照清水相比達(dá)極顯著水平，說明川芎、紫丹參的內(nèi)含物質(zhì)可滿足菌絲生長要求。魚腥草菌絲生長量略高于對(duì)照，但未達(dá)顯著水平，說明魚腥草對(duì)菌絲生長促進(jìn)作用不明顯。而菌絲生長速度最慢的是澤蘭、山萘，菌落擴(kuò)展分別僅為0.42 cm/d、0.43 cm/d；其次是麥冬和玉竹，分別為0.88 cm/d、0.98 cm/d。說明澤蘭、山萘、麥冬和玉竹具有仰制菌絲生長的物質(zhì)，其中澤蘭、山萘抑制作用最為明顯，與對(duì)照相比達(dá)極顯著水平。

表1 不同中藥材與Alternaria panax Whetz菌絲生長關(guān)系（單位：cm/d）

2.2 病原致病性測(cè)定

由表2看出，三七、紫丹參、川芎、魚腥草接種后可表現(xiàn)感病癥狀。經(jīng)室內(nèi)分離培養(yǎng)鑒定，在三七、川芎、紫丹參病組織中檢出Alternaria panax Whetz，說明Alternaria panax Whetz可侵染三七、川芎、紫丹參。在魚腥草上未檢出Alternaria panax Whetz，說明該菌在魚腥草上雖然可侵入，但侵入后遇到寄主強(qiáng)烈的抑制反應(yīng)（亦稱過敏反應(yīng)），以致其不能進(jìn)一步擴(kuò)展，并隨著侵入組織的迅速崩解而死亡。玉竹、麥冬、山萘、澤蘭接種后未表現(xiàn)任何癥狀，說明該菌對(duì)上述植物未構(gòu)成侵染。

表2 Alternaria panax Whetz致病性測(cè)定

3 結(jié)論

（1） Alternaria panax Whetz具有一定的寄主專化性，可侵染三七、川芎、紫丹參，導(dǎo)致形成典型病斑；可在魚腥草上形成拮抗性壞死斑。但該菌不能侵染澤蘭、山萘、麥冬、玉竹。 同時(shí)，室內(nèi)抑菌試驗(yàn)表明澤蘭、山萘、麥冬、玉竹所含物質(zhì)均可抑制Alternaria panax Whetz，其中澤蘭、山萘抑制作用最強(qiáng)。

（2） 澤蘭、山萘、麥冬、玉竹均為多年生草本植物。澤蘭具有活血，益氣，消水功效，主治吐血，衄血，產(chǎn)后腹痛，并可菜藥兼用。山萘具有行氣溫中，消食，止痛功效，主治胸隔脹滿，脘腹冷痛，飲食不消，并可作烹飪調(diào)料。麥冬具有養(yǎng)陰生津，潤肺清心的功效，主治肺燥干咳，虛癆咳嗽，心煩失眠，腸燥便秘。玉竹具有養(yǎng)陰，潤燥，除煩，止渴功效，主治熱病陰傷，咳嗽煩渴，虛勞發(fā)熱，消谷易饑，小便頻數(shù)。4種藥材均為常用大宗藥材，有較好的開發(fā)應(yīng)用前景。

（3） 利用生物多樣性持續(xù)控制農(nóng)作物病害，已成為近年來國內(nèi)外研究熱點(diǎn)，并取得了明顯成效［3-4］；但中藥材利用生物多樣性持續(xù)控制病害鮮有學(xué)者研究。本研究針對(duì)三七黑斑病的防治，篩選出可與三七間（套）種中藥材澤蘭、山萘、麥冬、玉竹，為進(jìn)一步探索三七多樣性控病技術(shù)奠定了基礎(chǔ)。

［1］陳昱君，王勇.三七病蟲害防治［M］.昆明：云南科技出版社，2005：40-48.

［2］何光好.我國農(nóng)藥污染的現(xiàn)狀及對(duì)策［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2005（6）：57.

［3］朱有勇.生物多樣性持續(xù)控制作物病害理論與技術(shù)［M］.昆明：云南科技出版社，2004：48-68.

［4］胡新，許艷麗，李春杰.利用作物多樣性控制病害研究進(jìn)展［J］.農(nóng)業(yè)系統(tǒng)科學(xué)與綜合研究，2011（1）：118-122.