連翹提取物對斷奶仔豬抗氧化能力的影響

史東輝，陳 穎

（遼寧醫(yī)學院畜牧獸醫(yī)學院，遼寧 錦州 121001）

在崇尚自然、回歸自然的要求下，以及由于化學合成的抗氧化劑長期使用對機體有一定的副作用,因此，從天然產(chǎn)物中選擇一種高效、無毒的抗氧化劑的意義重大。中草藥連翹為木犀科連翹落葉灌木，果實入藥，是我國藥典已收載的常用中藥[1]。連翹作為一種抗氧化物質，保持了各種成分結構的自然狀態(tài)和生物活性，具有化學合成的抗氧化劑無可比擬的天然性。

正常情況下，體內產(chǎn)生的自由基即活性氧含量很低，且可被自身非酶性或酶性抗氧化系統(tǒng)清除掉。但在疾病、環(huán)境溫度、注射疫苗等應激情況下，動物體內活性氧代謝系統(tǒng)的平衡被破壞，導致機體內自由基的積累和生物膜通透性失常。總抗氧化能力（T-AOC），超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）是常用的抗氧化指標[2]，丙二醛（MDA）含量是反映生物膜脂質過氧化的水平和對細胞膜傷害程度的指標[3]。

連翹提取物主要有連翹酯苷和連翹苷2種主要活性成分[4]。一些研究表明，連翹提取物具抗氧化作用，可以降低小鼠因四氧嘧啶所致氧化損傷而引起的肝臟、心臟、股四頭肌、腦組織、紅細胞中MDA、SOD、過氧化物酶（POD）以及小鼠血清中谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、堿性磷酸酶（AKP）的異常升高[5]。中央民族大學生命與環(huán)境科學學院研究發(fā)現(xiàn)，連翹提取物對肉仔雞生長性能和抗氧化活性也有很大影響。在熱應激下，連翹提取物可能是通過清除自由基途徑，緩解熱應激誘導的活性氧對腸黏膜的損傷，改善營養(yǎng)物質消化率和生長性能，說明連翹提取物是良好的抗氧化物質[6]。但目前許多中草藥添加劑有效成分不明或有效成分含量過低、使用劑量過大等問題，而且對仔豬抗氧化功能的影響國內外還鮮有報道，而連翹提取物在斷奶仔豬日糧中的應用國內外還未見報道。

本試驗測定了仔豬斷奶后1、7、15 d 的血清總抗氧化能力（T-AOC），超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）和丙二醛（MDA）含量的變化，探討連翹提取物對斷奶仔豬抗氧化功能的影響，旨在揭示其可能的作用機理，為連翹提取物的臨床應用提供理論參考。

1 材料和方法

1.1 試驗動物與日糧

試驗選取健康狀況良好、胎次相近、（28±2）d、平均體重8.83 kg的杜×長×大三元雜交斷奶仔豬48頭，采用單因子隨機分組試驗設計，分為3組，其中1組為對照組，其余2組為試驗組，每組設4個重復，每個重復4頭仔豬，公母各半。試驗期為15 d，斷奶前2 d逐漸過渡試驗期日糧，試驗無預飼期。

按照NRC（1998）豬的營養(yǎng)需要結合中國豬飼養(yǎng)標準（2004）配制“玉米-豆粕”基礎日糧，基礎日糧配方為：玉米 63%，膨化大豆 22%，乳清粉 5%，魚粉 5%，豆油 1%，預混料 4%。日糧主要營養(yǎng)指標：消化能 14.14 MJ/kg，粗蛋白 18.26%，鈣 0.93%，有效磷 0.47%，總賴氨酸 1.21%，總蛋氨酸＋胱氨酸 0.75%。基礎日糧中添加抗生素為對照組，添加連翹提取物為試驗組。試驗Ⅰ組添加250 g/t連翹提取物替代50%抗生素，試驗Ⅱ組添加500 g/t連翹提取物替代全部抗生素。

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗豬各組環(huán)境條件一致，高床飼養(yǎng)。均為顆粒料，自由采食，斷奶前2 d逐漸過渡，自由飲水。日常管理與免疫程序按豬場常規(guī)進行。豬舍溫度控制在22～26 ℃。

1.3 樣品采集

試驗開始和結束的早晨8：00空腹個體稱重，試驗期間每天記錄飼料消耗量；試驗期間每組隨機選取4頭空腹仔豬分別于仔豬斷奶后1、7、15 d 早晨8：30—9：30的時候，腔靜脈采血10 mL（全程采血的豬只一致），3 000 r/min離心20 min，制備血清，并分裝成小包裝，4 ℃保存，2 d 內完成酶的指標測定。

1.4 檢測指標與方法

血清總抗氧化能力（T-AOC），超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）及丙二醛（MDA）含量采用試劑盒測定，具體操作方法對照南京建成生物工程研究所的試劑盒說明書。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel處理，應用SPSS13.0軟件One-way ANOVA方法進行統(tǒng)計分析，并采用Duncan法多重比較，結果以平均值±標準誤表示。

2 結果與分析

2.1 連翹提取物對斷奶仔豬血清T-AOC的影響

表1表明，試驗各組仔豬血清T-AOC在斷奶后均有所下降，尤以對照組下降最為明顯，這是因為受斷奶應激影響的結果，但試驗各組間差異均不顯著（P>0.05）。斷奶后1 d 各組仔豬的T-AOC值之間差異不明顯；但斷奶后7 d，試驗I組仔豬血清T-AOC比對照組提高8.44%，試驗Ⅱ組仔豬血清T-AOC比對照組提高8.66%，試驗Ⅱ組仔豬血清T-AOC比試驗I組提高0.20%；斷奶后15 d，試驗I、Ⅱ組仔豬血清T-AOC分別比對照組提高8.80%和11.30%，試驗Ⅱ組比試驗I組的仔豬血清T-AOC提高了2.30%。

表1 連翹提取物對斷奶仔豬血清T-AOC的影響

2.2 連翹提取物對斷奶仔豬血清SOD活性的影響

如表2所示，斷奶后各組仔豬血清SOD活性均呈下降的趨勢，但試驗組始終高于對照組，但試驗各組間差異均不顯著（P>0.05）。斷奶后l d，對照組、試驗I組和試驗Ⅱ組血清SOD活性相差較小，對照組分別比試驗I組和試驗Ⅱ組低2.35% 和1.46%；斷奶后7 d，試驗I、Ⅱ組SOD活性分別比對照組提高4.17%和5.07%，試驗Ⅱ組血清SOD活性比試驗I組提高0.86%；斷奶后15 d，試驗I、Ⅱ組SOD活性分別比對照組提高5.16%和5.31%，試驗Ⅱ組血清SOD活性比試驗I組提高0.14%。

表2 連翹提取物對斷奶仔豬血清SOD的影響

2.3 連翹提取物對斷奶仔豬血清GSH-Px活性的影響

由表3可知，斷奶后隨著時間的增加，各試驗組仔豬血清GSH-Px活性有較大幅度升高，爾后有所下降，但下降幅度不大，試驗各組間差異依然不顯著（P>0.05）。斷奶后1 d，試驗各組仔豬血清GSH-Px活性差異不明顯。斷奶后7 d，試驗I組、試驗Ⅱ組GSH-Px活性比對照組分別提高3.32%和3.98%，而試驗Ⅱ組比試驗I組GSH-Px活性僅僅提高0.64%；斷奶后15 d，試驗I組GSH-Px活性比對照組提高了4.54%，試驗Ⅱ組GSH-Px活性比對照組提高了5.76%，同時試驗Ⅱ組比試驗I組GSH-Px活性提高1.16%。

表3 連翹提取物對斷奶仔豬血清GSH-Px的影響

2.4 連翹提取物對斷奶仔豬血清CAT活性的影響

從表4可以看出，試驗期間斷奶后各組仔豬血清CAT活性呈下降的趨勢。試驗組血清CAT活性較對照組高。斷奶后1 d，試驗各組仔豬血清CAT活性差異不顯著。斷奶后7 d，試驗I組仔豬血清CAT活性比對照組提高14.55%，試驗Ⅱ組仔豬血清CAT活性比對照組提高17.51%。斷奶15 d后，試驗I組、Ⅱ組仔豬血清CAT活性分別比對照組提高1.32%和6.58%，試驗Ⅱ組仔豬血清CAT活性比試驗I組提高5.20%。但整個試驗期內，試驗各組間差異依然不顯著（P>0.05）。

2.5 連翹提取物對斷奶仔豬血清MDA含量的影響

由表5可以看出，各試驗組仔豬血清MDA含量隨著仔豬斷奶后時間的增加均有所下降，但試驗組血清MDA含量始終較對照組低，各組間差異均不顯著（P>0.05）。斷奶后1 d，各試驗組仔豬血清MDA含量差異不顯著；斷奶后7 d，試驗I組血清MDA含量比對照組降低7.06%，試驗Ⅱ組比對照組血清MDA含量降低5.58%，試驗Ⅱ組仔豬血清MDA含量比試驗I組略有上升（1.60%）；斷奶后15 d，試驗I組、試驗Ⅱ組血清MDA含量分別比對照組降低3.50%和8.95%，試驗Ⅱ組仔豬血清MDA含量比試驗I組下降5.65%。

表4 連翹提取物對斷奶仔豬血清CAT的影響

表5 連翹提取物對斷奶仔豬血清MDA含量的影響

3 討論

研究表明，仔豬因斷奶產(chǎn)生的應激反應使動物機體內自由基過量生成，引起脂質、蛋白質和DNA的氧化損傷，易誘導各種疾病的發(fā)生，使動物生長發(fā)育減緩，免疫力減弱，生產(chǎn)性能下降，產(chǎn)品質量降低，飼料轉化率降低等[9]。與此同時仔豬體內存在著一套自由基清除體系，包括酶類和非酶類體系。其中酶類抗氧化劑又稱為內源性抗氧化劑，主要包括SOD、GSH-Px、CAT等。SOD、GSH-Px和CAT清除過氧化物的能力主要取決于其酶的活性。

仔豬斷奶應激可損害仔豬機體抗自由基系統(tǒng)及加速體內過氧化反應。本試驗仔豬受斷奶應激的影響，各組血清T-AOC均有所下降，尤以對照組下降最為明顯。但斷奶后7 d，試驗I組仔豬血清T-AOC比對照組提高8.44%，試驗Ⅱ組仔豬血清T-AOC比對照組提高8.66%，試驗Ⅱ組仔豬血清T-AOC比試驗Ⅰ組提高0.20%，說明日糧中添加連翹提取物提高了仔豬體內血清的總抗氧化能力。有學者報道，連翹提取物其主要成分連翹酯苷和連翹苷有很強的抗氧化性質，而其他次要成分在抗氧化方面發(fā)揮著重要的協(xié)同作用[10]。

斷奶后各組仔豬血清SOD活性、CAT活性均呈下降趨勢，但添加連翹提取物組始終高于對照組。仔豬斷奶后隨著時間的增加，各試驗組仔豬血清GSH-Px活性有較大幅度升高，維持在一個較高水平后有所下降，但下降幅度不大。試驗I組、試驗Ⅱ組GSH-Px活性比對照組有所提高，但差異均不顯著。

自由基作用于脂質發(fā)生過氧化反應，對生物膜具有強烈的破壞作用，氧化終產(chǎn)物為丙二醛（MDA），MDA能引起突變及有致癌的危險。MDA含量反映氧自由基介導的脂質過氧化程度。

本試驗隨仔豬斷奶后時間的延長，各試驗組仔豬血清MDA含量均有所下降。但試驗組血清MDA含量始終較對照組低。斷奶后15 d，試驗I組、試驗Ⅱ組血清MDA含量分別比對照組降低3.50%和8.95%。這可能是連翹提取物中的活性成分連翹酯苷和連翹苷進入循環(huán)系統(tǒng)、分布和存留在組織中表現(xiàn)出了抗氧化活性。這說明連翹提取物可以增強機體清除自由基的能力，減弱脂質過氧化的程度，改善動物的抗氧化能力，能夠一定程度上緩解仔豬斷奶帶來的應激反應[11]。

以上各項指標，試驗Ⅱ組優(yōu)于試驗I組，但差異并不顯著（P>0.05），其原因有待于進一步研究。本試驗時間只有15 d，因此長期添加連翹提取物是否可以提高仔豬的抗氧化能力有待于進一步的試驗研究。

4 結論

本試驗表明，日糧中添加連翹提取物替代50%抗生素和替代全部抗生素均有提高斷奶仔豬抗氧化能力的趨勢。

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