桂枝湯對高血脂心肌缺血大鼠脂代謝紊亂的調節作用

焦 宏，陳彥靜、△，金春亭，鞠大宏，王 筠，王樹強

(1.河北北方學院，河北 張家口 075000;2.中國中醫科學院中醫基礎理論研究所，北京 100700)

流行病學、實驗動物學和臨床研究均表明，高脂血癥是動脈粥樣硬化、心腦血管病的重要危險因素［1］。尋找有效的防治高脂血癥藥物已成為目前的迫切任務，中藥在調節血脂、預防動脈硬化及心腦血管疾病方面具有未病先防和既病防變的優勢［2］。“損其心者，調其營衛”是早在《難經》就提出的心系疾病的治法，近年來人們對其治療心系病癥越來越重視。桂枝湯是《傷寒論》的代表方之一，盡管歷代醫家以桂枝湯類方治療心系病證取得了很大成就，現代實驗研究也證明桂枝湯具有抗菌、抗病毒、抗過敏、鎮痛、調節血壓、降血糖、增加心肌血流量、改善胃腸消化傳導等廣泛的藥理作用［3-5］，但桂枝湯是否通過改善消化功能、調理脾主運化功能進而達到祛除痰濕(調節脂代謝)的作用環節，實現防治心系病證(冠心病)的功效，值得深入研究。為此，本研究采用高脂血癥大鼠心肌缺血(胸痹)模型，探討桂枝湯對冠心病(胸痹)模型大鼠血脂代謝的調節作用，為冠心病(胸痹)的防治提供實驗依據。

1 材料

1.1 材料、試劑

高脂飼料:由10%豬油、2%膽固醇、0.5%膽酸鈉、0.2% 丙基硫氧嘧啶、0.1% 鈣片和 87.2% 普通飼料配制成。桂枝、白芍、甘草、生姜、大棗及所有藥材均購自北京同仁堂藥店。按原方比例10∶10∶7∶10∶10配齊藥物(生姜切片，大棗剖開)混合，水浴濃縮成10g/L、20g/L濃度。血脂測定試劑盒(TG、TC、HDL-C、LDL-C)購于北京中生生物工程高技術公司，總脂酶測試盒(脂蛋白脂酶 LPL和肝脂酶HL)購于南京建成生物工程研究所。

1.2 動物與分組

健康雄性 SD大鼠 60只，體重 250g～270g，由北京大學醫學部實驗動物科學部提供。隨機分為5組，即對照組、模型組、辛伐他汀組、桂枝湯10g治療組(簡稱桂枝湯低劑量組)、桂枝湯20g治療組(簡稱桂枝湯高劑量組)，各組動物12只。

2 方法

2.1 動物模型建立

大鼠普通喂養1周后眶內采血檢測血脂正常者用于實驗。高脂飼料喂養12周，每天15g，期間按70萬IU/kg的總劑量肌肉注射給予VD3，于第1周、第4周、第8周初分次給完，建立大鼠高血脂及 AS早期的模型。末次給藥前72h，除空白組外，于灌胃給藥30min后，各組動物腹腔注射垂體后葉素30u/kg，空白組給予等容量的生理鹽水，連續3次，每間隔24h，誘發冠狀動脈痙攣，通過心電圖測定出現明顯的 ST段壓低，形成心肌缺血模型［6］。

2.2 給藥方法

于實驗第12周末大鼠禁食12h斷尾取血，檢查各組大鼠血清總膽固醇含量，高脂飼料喂養各組大鼠與空白對照組比較，均有明顯差異之后，各治療組分別開始灌胃給藥。桂枝湯治療組:于第13周起開始灌胃給藥，每日1次。桂枝湯大、小劑量組給藥劑量分別為 20g/kg·d、10g/kg·d(含生藥量)，l0ml/kg灌胃給藥，1次/d，連續6周。西藥對照組:辛伐他汀 5.0mg/kg·d，為成人劑量的 20 倍，10ml/kg灌胃給藥，1次/d，連續6周，正常組和模型組以相應量的生理鹽水灌胃。

2.3 標本的制備及檢測

實驗結束，從腹主動脈采血5ml，3500rpm，離心10min，制備血清、血漿。

2.3.1 血脂各項指標的測定 按試劑盒說明測定總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度膽固醇(HDL)，根據公式 LDL-c=TC-(TG/5+HDL-C)計算低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-c)水平。

2.3.2 血清脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)活性測定 LPL和HL可分解甘油三酯并水解為甘油和游離脂肪酸，用銅試劑測定生成的游離脂肪酸的量，分別計算脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)活性。

2.3.3 血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量測定 取血清按照試劑盒要求測定吸光度值，計算相應酶活性。

2.3.4 肝臟組織蘇丹紅Ⅳ染色觀察 大鼠取血后迅速取出肝臟，觀察肝臟的外觀并取肝臟右葉邊緣1cm處一小塊肝組織進行冰凍切片蘇丹紅IV染色，在光鏡下觀察肝組織變化。

2.4 統計學處理

實驗結果以均數±標準差(珋x±s)表示，數據處理采用SPSS11.5統計軟件。采用單因素方差分析，以P＜0.05為統計學有差異顯著。

3 結果

3.1 各組大鼠血清中 TC、TG、LDL-C、HDL-C濃度的變化

表1顯示，高脂喂養12周時，與對照組相比，模型組 TC、TG、LDL-C均顯著增高(P ＜0.01)，HDL-C濃度顯著降低(P＜0.01)。結果顯示，高脂飼料喂養大鼠形成高脂血癥動物模型。

表1 12周各組大鼠血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C濃度的變化(mmol/L)

表2顯示，高脂喂養18周后，模型組與對照組相比血清 TC、TG、LDL-C濃度明顯升高(P＜0.01)，HDL-C濃度明顯降低(P＜0.01);陽性對照辛伐他汀組和模型組相比，血清TC、TG、LDL-C濃度明顯降低(P＜0.01)，HDL-C濃度升高(P＜0.05);與模型組比較，桂枝湯高、低劑量組均有顯著降脂作用(P＜0.01)，且桂枝湯高劑量組降脂作用強于他汀組。

表2 各組大鼠血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C濃度的變化(mmol/L)

3.2 各組大鼠血漿中LPL和HL的變化

表3顯示，與對照組相比，模型組血漿中 LPL和HL含量明顯降低(P＜0.01);陽性對照辛伐他汀組和桂枝湯高、低濃度組與模型組相比，血漿中LPL和HL含量明顯升高(P＜0.01或0.05);且桂枝湯高濃度組作用強于陽性對照組。

表3 各組大鼠血漿LPL、HL、SOD和MDA的變化(n=8)

3.3 各組大鼠血漿中超氧化物歧化酶(SOD) 活性及丙二醛(MDA)含量測定

表3顯示，與對照組相比，模型組血漿 SOD含量明顯降低(P＜0.01)，MDA明顯升高(P＜0.05);與模型組相比，各治療組血漿SOD含量明顯升高(P＜0.01)，MDA明顯降低(P＜0.05)，且桂枝湯高濃度組作用強于陽性對照組。

3.4 各組大鼠肝臟的病理學變化

病理學檢查:肉眼觀察大鼠肝臟大體變化，正常組大鼠肝臟外觀呈紅褐色，表面光滑，邊緣銳利，質軟有彈性;模型組大鼠肝臟腫大易碎、包膜稍緊張，外觀呈黃紅和灰紅相間，表面和切面油膩，治療組外觀色澤接近于正常組。

圖1顯示，冰凍切片鏡下觀察可見肝細胞核藍染，脂滴呈橘紅色。正常對照組肝細胞形態排列正常，肝小葉規則，細胞質分布均勻，可見少量脂滴分布。模型組多數肝小葉結構輪廓基本消失，肝細胞形態不規則，胞漿內充滿大量橘紅色脂滴，大脂滴和中等大小脂滴較多，呈重度脂肪肝病變。各藥物治療組整個肝小葉脂肪滴明顯減少，脂肪病變程度明顯改善。

圖1 肝臟組織病理組織學觀察結果(蘇丹紅Ⅳ染色×400)A.對照組 B.模型組C.辛伐他汀組D.桂枝湯高劑量組

4 討論

高脂血癥是指血液中一種或多種脂質成分含量的異常增高。研究顯示，血脂異常代謝導致對動脈血管壁的損傷，是形成動脈粥樣硬化的重要促進因素，也是高血壓、冠心病和腦血管意外的重要危險因素［7、8］。因此，保持正常的血脂水平是預防心腦血管疾病發生的重要措施之一。本實驗結果表明，與模型組比較，桂枝湯高、低劑量組血清 TG、TC、LDLC含量有不同程度的降低，尤其是桂枝湯藥高劑量組作用較顯著，同時可以升高HDL-C含量。桂枝湯治療組HDL的升高，意味著膽固醇逆向轉運作用的增強，影響HDL代謝的同時也起著降脂作用。

LPL 和 HL 是多種脂蛋白代謝的關鍵酶［9、10］，LPL表達或活性增高可以降低血清中TG、LDL和極低密度脂蛋白(VLDL)的水平，從而防止高脂血癥的發生。LPL可催化乳靡微粒(CM)和VLDL中的甘油三酯水解，HL進一步催化水解CM和VLDL殘骸顆粒中的甘油三酯［11］。本研究結果顯示，桂枝湯可增加血清LPL、HL的活性，提示桂枝湯可通過影響脂蛋白代謝酶途徑調節高脂大鼠血脂代謝。

肝臟是脂肪代謝的重要器官，高脂性飼養引起大鼠脂質代謝紊亂時會出現血脂升高以及肝臟的脂質堆積［12］。本實驗發現，桂枝湯能夠減輕高脂大鼠肝臟脂肪變性，其原因可能和桂枝湯降低高脂大鼠血清TC、TG、LDL-C水平，減少 TC和TG在肝臟中蓄積有關。此外，脂肪肝的形成還與肝臟內氧化應激和脂質過氧化反應損傷引起的“二次打擊”有關。從實驗結果分析我們認為，桂枝湯減輕高脂大鼠肝臟脂肪變性與降低肝臟血液中 MDA含量、提高SOD活性，與肝組織抗氧化損傷有關。

綜上，我們認為桂枝湯具有明顯的調節脂代謝的作用，其機制可能通過健脾和胃、補益中氣、調節營衛，恢復虛弱之脾氣，以盡其分清泌濁之職守，使滯留營中膏脂減少，同時和提高大鼠總抗氧化能力有關，對動脈粥樣硬化及冠心病的防治具有重要意義，其作用機制值得進一步的研究。

［1］ Selwyn AP.Antiatherosclerotic effects of statins:LDL versus non-LDL effects［J］.Curr A theroscler Rep，2007，9(4):281-285.

［2］ 黃 銳.中醫對高脂血癥的認識和治療［J］.中國現代醫學雜志，2006，8(7):107-108.

［3］ 秦彩玲，劉 婷，張 毅，等.桂枝湯對大鼠血壓雙向調節作用及其有效部位探討［J］.中國實驗方劑學雜志，2001，7(8):20-23.

［4］ 戴 敏，劉青云，丁 煒，等.桂枝湯對家兔心肌血流量的影響［J］.中國中藥雜志，1995，20(7)431-433.

［5］ 劉 婷，張 毅，秦彩玲，等.桂枝湯降壓作用機制初探—對血漿及組織中 AT，NT 含量的影響［J］.2005，40(6)421-423.

［6］ 焦 宏，陳彥靜，鞠大宏，等.桂枝湯對高脂血癥心肌缺血大鼠心肌缺血損傷的保護作用［J］.中國中醫基礎醫學雜志，2011，17(3):279-281.

［7］ 張勤婷，李 輝，杜迎雪.膽固醇與動脈粥樣硬化性血管病變的研究［J］.中國民康醫學，2006，18(8):640-641.

［8］ 趙水平.臨床血脂學［M］.北京:人民衛生出版社，2006:225-231.

［9］ Deeb S S，Zambon A，CarrM C，et al.Hepatic lipase and dyslipidemia:interactions among genetic variants， obesity，gender，and diet［J］.J L ipid Res，2003，44(7):1279-1286.

［10］ 蔡曼波，尹衛東.脂蛋白酯酶活化劑 NO-1886的研究進展［J］.中國藥理學通報，2004，20(3):251-254.

［11］ Perret B，Mabile L，Martinez L，et al.Hepatic lipase:structure/function relationship，synthesis，and regulation ［J］.J Lipid Res，2002，43(8):1163-1169.

［12］ Zou Y，Li J，Lu C，et al.High-fat emulsion-induced rat model of nonalcoholic steatohepatitis［J］.Life Sci，2006，79(11):1100-1107.