消渴康對DN大鼠腎臟FN、LN、Ⅳ膠原表達的影響

李 夢，李鳳婷，耿建國

(首都醫科大學中醫藥學院，北京 100069)

糖尿病腎病(DN)是糖尿病(DM)主要的微血管并發癥，也是導致糖尿病患者致殘致死的主要原因之一。細胞外基質(ECM)進行性積聚被認為是DN發展過程中最基本的病理損傷，始終貫穿于DN進展前后。FN、LN、Ⅳ膠原是 ECM的主要成分，在DM向DN的發展以及DN自身不斷惡化過程中，三者都不同程度的增多［1］。本實驗運用消渴康對DN大鼠腎組織 FN、LN、Ⅳ膠原表達的影響進行了觀察，其結果表明，消渴康對DN大鼠腎功能具有一定的保護作用，現將實驗結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

SD雄性大鼠48只，體重160g～180g，鼠齡2～3月齡，購自首都醫科大學實驗動物科學部，消渴康藥材購自北京祥威藥業公司，氯沙坦鉀片購自杭州默沙東制藥有限公司，制備藥物后在4℃冰箱保存。鏈脲佐菌素(STZ，購自美國Sigma公司)，免疫組化試劑盒(北京中杉金橋生物技術有限公司)，光學顯微鏡(Nikon)，數字顯微照相機(LEICA，圖像采集分析系統(NIS-Elements Basic Research)。

1.2 方法

1.2.1 動物模型制備 10%水合氯醛(0.35ml/100mg)腹腔麻醉后切除右側腎臟。術后2周，腹腔注射 STZ(50mg/kg)。72h后，尾靜脈采血，當血糖濃度≥16.7mmol/L，尿糖定性 ＞+++，確定DM造模成功。

1.2.2 分組及給藥 正常組(n=8)、模型組(n=8)、氯沙坦組(n=8，含生藥5.2mg/kg·d)、消渴康小劑量組(n=8，簡稱消小組，含生藥6.3g/kg·d)、消渴康中劑量組(n=8，簡稱消中組，含生藥12.6g/kg·d)、消渴康大劑量組(n=8，簡稱消大組，含生藥25.2g/kg·d)。每日1次，連續 12周，正常組、模型組每日灌服等量蒸餾水。

1.2.3 標本采集與指標檢測 藥物干預后第4、8、12周末，眼眶下靜脈叢取血2ml。離心取血清，用全自動生化儀測定腎功能。藥物干預第12周末，處死大鼠，取出腎臟去被膜，Bouin液固定，常規制片。免疫組化法檢測100倍鏡視野下FN、LN、Ⅳ膠原表達情況。

1.2.4 統計方法采用均數±標準差(珋x±s)，統計軟件采用 SPSS13.0，顯著性差異設定為 P＜0.05，極顯著性差異設定為 P＜0.01。

2 結果

2.1 各組大鼠FN免疫組化結果比較

圖1 腎組織FN免疫組化染色(400×)A.正常組，B.模型組，C.西藥組，D.消大組，E.消中組，F.消小組

表1顯示，與模型組比較，消大組FN表達極顯著性降低(P＜0.01);與氯沙坦組比較，消大組極顯著性降低(P＜0.01)，消中組顯著性降低(P＜0.05)。

2.2 各組大鼠LN免疫組化結果比較

表2顯示，與模型組比較，氯沙坦組與消渴康3劑量組均極顯著性降低(P＜0.01);與氯沙坦組比較，消中組、消小組顯著性降低(P＜0.05)。

2.3 各組大鼠Ⅳ膠原免疫組化結果比較

表3顯示，與模型組比較，氯沙坦組顯著性降低(P＜0.05)，消渴康3劑量組均極顯著性降低(P＜0.01);與氯沙坦組比較，消大組顯著性降低(P＜0.05)，消中組、消小組極顯著性降低(P＜0.01)。

表1 各組大鼠FN積分光密度比較(珋x±s)

表2 各組大鼠LN積分光密度比較(珋x±s)

圖2 腎組織LN免疫組化染色(400×)A:正常組;B:模型組;C:西藥組D:消大組E:消中組F:消小組

圖3 腎組織Ⅳ膠原免疫組化染色(400×)A:正常組;B:模型組;C:西藥組D:消大組E:消中組F:消小組

表3 各組大鼠Ⅳ膠原積分光密度比較(珋x±s)

3 討論

腎小球硬化癥被認為是導致腎功能損傷直至腎衰竭的主要原因［2］。作為細胞外基質主要成分的FN、LN、Ⅳ膠原的進行性積聚是 DN發展過程中最基本的病理變化和特征。有研究表明，纖黏連蛋白(FN)可以同時與細胞外基質各類成分相結合，并促進細胞外基質其他成分沉積;層黏連蛋白(LN)可以引起細胞黏附并影響基底膜的電荷選擇性，導致腎小球通透性改變［3］，加重腎小球損害［4］;Ⅳ膠原則穿透整個腎小球基底膜形成膠原纖維網并通過結合細胞黏附分子起到機械屏障作用［2］。研究顯示，2型DM病人Ⅳ膠原可顯示基底膜中生化成分及結構的變化，反映腎臟損害程度［5］。

實驗結果顯示，DN大鼠FN、LN、Ⅳ膠原的高表達不僅出現在腎小球系膜區，在腎小管及腎小管間質同樣也出現高表達，提示在DN的病變發展過程中，FN、LN、Ⅳ膠原在腎小球和腎小管的過度積聚可能是導致腎臟功能進行性損害的的重要原因。

消渴康由生黃芪、葛根、丹參、生苡仁等藥組成，具有益氣養陰、利濕化濁、活血化瘀的作用，較為符合糖尿病腎病氣陰兩虛、痰濕瘀血互阻的病機特點。前期實驗研究表明，消渴康能夠顯著降低DN大鼠血糖、血脂，改善DN大鼠腎臟功能及降低轉化生長因子表達的作用［6］。本次實驗結果進一步證實，消渴康能夠顯著降低 DN大鼠腎組織FN、LN、Ⅳ膠原的表達，減少ECM積聚，對保護腎功能具有一定作用。

［1］ 于 德，民孟東.糖尿病大鼠腎小球纖黏連蛋白在糖尿病腎病時變化及作用的實驗研究［J］.天津醫藥，1999，27(3):163-165.

［2］ Nangatu M.Mechanisms of tubulointerstitial injury in the kidney:final common pathways to end stage renal failure［J］.Intern Med，2004，43(1):9-17.

［3］ 霍 穎，李 斌，周海中.慢性腎功能不全患者血清 HA、LN和β2-MG檢測意義及評價［J］.中國航天醫藥雜志，2003，5(5):25-26.

［4］ 朱辟疆，韋先進，江麗萍，等.慢性腎小球疾病血清 TNF-α、IL-1β、IGF-Ⅱ及 LN 的改變［J］.浙江中西醫結合雜志，2001，11(7):404-406.

［5］ 胡懷東，王玉君，龐久高.2型糖尿病患者尿型膠原與糖尿病腎病關系的研究.重慶醫科大學學報，2001，26(1):23-28.

［6］ 李 夢，李風婷，耿建國.消渴康對 DM大鼠早期腎損害及TGF-β1表達的影響.中醫學報，2010，25(6):1117-1118.1121.