熒光定量聚合酶鏈反應檢測尿中乙肝病毒DNA的意義

王彥華，金淑華

（赤峰市傳染病防治醫院 檢驗科，內蒙古 赤峰 024000）

熒光定量聚合酶鏈反應檢測尿中乙肝病毒DNA的意義

王彥華，金淑華

（赤峰市傳染病防治醫院 檢驗科，內蒙古 赤峰 024000）

目的：研究乙肝攜帶者尿液HBVDNA含量及傳染性.方法：用熒光定量聚合酶鏈反應（FQ-PCR）檢測50例患者血清乙肝病毒DNA含量大于104拷貝/ml患者尿液中乙肝病毒DNA含量比較.結果：尿中HBV-DNA含量與血清中HBV-DNA含量存在正相關關系（r=0.797,p<0.01）.結論：血清中HBV-DNA含量拷貝數越大，尿液中HBV-DNA含量拷貝數也越大，HBV-DNA拷貝數高的患者注意尿液的傳染性.

HBV-DNA；尿液；熒光定量聚合酶鏈反應

乙型病毒性肝炎是我國最常見的傳染性疾病，已經成為嚴重的國際社會衛生問題，HBV-DNA位于HBV核心部位，是HBV感染最直接、最特異、最靈敏的指標，它的存在表示病毒復制活躍，傳染性強.臨床醫生常用血清中HBV-DNA拷貝數高低反應病毒的復制情況和傳染性.但進行檢測尿中HBVDNA含量及傳染性研究卻很少.

1 對象與方法

1.1 對象

50例尿液標本來自2011年3月至2011年4月在我院住院的患者，其血清乙肝病毒DNA含量大于104拷貝/ml，取中段晨尿3-5mL，標本不加防腐劑，及時送檢.

1.2 儀器與試劑

熒光定量PCR儀（Line-Gene熒光PCR檢測儀）,試劑購自深圳凱杰生物工程有限公司.

1.3 方法

取待側尿液100uL加入100uLDNA提取液1，震蕩混勻，13000rpm離心10分鐘，吸取上清液，再加入25uLDNA提取液2，震蕩混勻至沉淀完全溶解，100℃干浴10分鐘，13000rpm離心10分鐘，上清液待用.陰性、陽性、臨界對照同標本處理.標準品濃度采用 5×104、5×105、5×106、5×107拷貝/mL.取上述標準品及上清液2uL加入到PCR反應管中，按以下條件進行擴增，37℃5min,94℃1min后，95℃5sec,60℃30sec,40個循環，反應體系為40uL，熒光信號收集設在60℃.

2 結果

將血清與尿液HBV-DNA;進行對數處理，計算平均值和標準差（見表1）

表1 血清與尿液HBV-DNA計算平均值和標準差

3 討論

尿液屬人體排泄物，對外環境污染較為廣泛.近年，國內外學者相繼報道在血清乙肝表面抗原陽性患者的尿液中檢查到乙肝表面抗原陽性[1-2]，提示通過乙型肝炎表面抗原陽性尿液可污染環境，要證實尿液傳染性并評價其流行病學意義，尚需直接從尿液中查到乙肝病毒復制所依賴的HBV-DNA.

HBV-DNA作為乙型肝炎病毒感染的分子生物學標志，可以直接反映體內病毒的復制狀況，是HBV存在的最可靠的證據.近年來發展FQ-PCR,是目前可用于臨床定量檢測HBV-DNA最理想的方法[3].從我們的結果可以看出，尿中HBV-DNA含量與血清中HBV-DNA含量存在正相關關系且血清標本中乙肝病毒含量越高其尿液中乙肝病毒含量也越高，尤其血清中HBV-DNA含量拷貝數超過105時.

尿液的形成是血液經腎小球濾過，腎小管集合管重吸收及其分泌和排泄而產生，血液中某些成分如小分子物質可以通過腎小管進入尿液，而乙肝病毒正是小分子物質，可隨尿液排泄[4].所以，通過對尿液中HBV-DNA的定量檢測，可以了解到乙肝病毒不僅存在血液中，還可以存在尿液中.早期研究認為，乙型肝炎主要經輸血、注射、針刺和母嬰途徑傳播.但近年來通過流行病學調查及實驗研究表明，有大量的人群并無輸血、注射、針刺和母嬰途徑感染的歷史，仍然可以感染上乙型肝炎.今天我們對乙型肝炎病毒傳播途徑的認識，應該發生改變.特別是尿液HBV-DNA陽性的患者，無疑具有環境污染的感染性和廣闊范圍的傳染性.所以應該對尿液傳播引起足夠重視.

以上研究表明:HBV-DNA陽性的尿液具有傳染性，是構成對社會人群潛在的危險因素，在病毒性乙型肝炎接觸傳播中具有十分重要的流行病學意義.尿液的傳播可能是目前乙型肝炎繼血液、母嬰傳播之外又一重要的傳播途徑.

〔1〕蔡來舟.98份尿中HBsAg檢測情況的報告.中華流行病學雜志，1986，（7）4:208.

〔2〕彭有源.尿中HBsAg檢出及流行病學意義的初步研究.中國公共衛生，1987，6（2）:90.

〔3〕鄭輝.熒光定量聚合酶鏈反應測定乙型肝炎患者血清HBV-DNA血清標志物及其意義[J].廣東醫學，2000,21（2）：1512-1521.

〔4〕高雅敏.乙肝病毒攜帶者78例尿5項指標檢測結果分析[J].職業與健康，2005,21（4）：525.

R512.6+2

A

1673-260X（2012）01-0061-01