利用LC/MS/MS方法檢測人參蘆頭中人參皂苷Rg1和Re的含量*

吳睿凡，趙松巖，劉運嘉，吳曉霞，彭 娟，閆 寒，聶穎蘭，郭 娜 ，范 斌△

(1.新疆醫科大學，烏魯木齊 830011;2.沈陽藥科大學，沈陽 110016;3.沈陽市藥品不良反應和醫療器械不良事件監測中心，沈陽 110013;4.中國中醫科學院醫學實驗中心，北京 100700)

人參為五加科植物，人參 Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根和根莖，性甘微苦、微溫，歸脾、肺、心、腎經，有大補元氣、復脈固脫、補脾益肺、生津養血、安神益智之功效。臨床多用于體虛欲脫、肢冷脈微、脾虛食少、氣血虧虛、久病虛贏等病證的治療［1］。人參中的人參皂苷為重要的活性成分，現代對人參皂苷的含量測定有許多方法，主要采用高效液相色譜法、高效液相色譜 －蒸發光散射檢測等［2～5］，但人參皂苷 Rg1和 Re較難完全分離。其次，目前對于人參蘆頭成分含量的研究較少。本文建立的檢測人參蘆頭中人參皂苷Rg1和Re含量的LC/MS/MS方法，在2 min內2種皂苷全部出峰，方法快速靈敏。

1 材料

1.1 藥物及試劑

Re、Rg1均購于中國藥品生物制品檢定所，人參產地吉林(批號0090410)，由中國中醫科學院中藥研究所何希榮主任醫師鑒定為五加科植物人參Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根。正丁醇(分析純)、乙腈(色譜純)、甲酸(色譜純)均購于北京迪科馬科技有限公司。

1.2 儀器

Agilent 6410 QQQLC-MS分析系統(美國Agilent RRLC液相色譜儀;Agilent 6410 QQQ三重四級桿質譜檢測器;Masshunter工作站)，賽多利斯arium61316/611VF超純水處理器、賽多利斯 BT25S分析天平和多功能提取罐。

2 人參蘆頭中人參皂苷Rg1和Re的測定方法學考察及含量測定

2.1 色譜條件

液相條件:Agilent ZORBAX C18 SB(2.1×50mm 1.8-Micron);流動相:A:水(0.05%FA)，B:乙腈;A∶B=70∶30(V/V)，梯度洗脫:0min～2 min，B:60%;2min～3 min，B:100%，流速為 0.35 mL·min－1;柱溫:40 ℃ 。

質譜條件:正離子模式，MRM，Re m/z 969.6→789.5，Rg1m/z 823.5→643.5。利用以上色譜條件分析得到 Re和 Rg1的混合對照品的總離子流圖(TIC)(圖1)和各自的提取離子流圖(EIC)(圖2)及各成分在人參蘆頭中的TIC圖(圖3)。

2.2 供試品溶液的制備

圖1 人參Re和Rg1對照品的TIC和EIC圖

圖2 人參蘆頭樣品中Re和Rg1的TIC和EIC圖

取本品粉末0.1 g過40目篩精密稱定，精密加入水飽和的正丁醇5ml密塞，放置過夜，超聲(功率250W，頻率50kHz)處理30min，2次合并濾液，精密量取濾液0.5ml，氮氣吹干，殘渣加甲醇1ml超聲溶解，0.22um微孔濾膜，即得。

2.3 線性關系

精密稱取Re和Rg1對照品，Re的濃度依次為1.5、3.0、6.0、12.0、24、48ng/mL;Rg1的濃度分別為3.5、7.0、14、28、56、112ng/mL，按 2.1 的色譜條件進樣分析。以峰面積Y對濃度X進行回歸處理得到Re和Rg1的回歸方程分別為 Y=55.2216X－50.6413(r=0.9996)和Y=91.3617X+17.8616(r=0.9992)，說明 Re和 Rg1分別在1.5～48 ng/mL和3.5～112 ng/mL范圍內線性關系良好。

2.4 精密度

按2.3制得的對照品溶液連續進樣6次，記錄各組分的峰面積，計算6次的標準偏差(RSD)，得到人參皂苷Re和人參皂苷Rg1峰面積的RSD分別為4.1%和3.9%。

2.5 方法的重復性

按2.2平行制備6份樣品，按2.1的色譜條件進樣分析，記錄人參皂苷Re和人參皂苷Rg1的峰面積，計算6份平行樣品間的相對標準偏差(RSD)分別為4.9%和4.2%，表明方法重復性良好。

2.6 加樣回收率

取上述已測知含量的樣品粉末6分，各約0.1 g精密稱定，精密加入混合對照品溶液，按2.2項制備樣品，2.1項的液質條件進樣分析。計算加樣回收率，公式為加樣回收率 =(加樣后測定值 －原樣測定值)/加樣量 ×100%，并求得標準偏差。求得回收率平均值(n=6)分別為95.8%、96.7%，RSD分別為4.9%和4.2%。

2.7 樣品穩定性

將制備好的供試品溶液于 0、2、4、6、8、10、12、24 h進樣分析，考察供試品溶液的穩定性，考察表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.8 含量測定

按2.2項下制備樣品，測得人參蘆頭中人參皂苷Re和人參皂苷Rg1的含量分別為0.68 mg/g和0.70 mg/g。

3 討論

本方法利用LC-MS/MS方法對人參蘆頭中人參皂苷Re和人參皂苷Rg1進行了含量測定，比傳統方法快速、準確且靈敏。

［1］國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典一部.［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:8.

［2］徐暉，曾元兒.薄層掃描法測定人參及其制劑中人參皂苷Rg1的含量［J］.中藥新藥與臨床藥理，1998，9(2):106-107.

［3］潘堅揚，程翼宇，王毅，等.9種人參皂苷同時測定方法及在人參質量鑒別中的應用［J］.分析化學，2005，33(11):1565-1568.

［4］徐靜，賈力，趙余慶.人參的化學成分與人參產品的質量評價［J］.藥物評價研究，2011，34(03)199-203.

［5］常建濤，富瑤瑤，吳迪，等.敦化人參各部位皂苷組分的比較［J］.大連工業大學學報，2011，30(1):43-45.