一種更年期腎陰虛證病證結合模型大鼠的探索

王 劍，徐志偉

(廣州中醫藥大學，廣州 510006)

腎陰虛證是更年期綜合征各證型中較重要的一個證型，中醫藥具有良好的臨床治療效果［1］。但目前尚無一種更年期腎陰虛病證結合大鼠模型，影響了其機理及療效的深入研究。本研究通過給予大鼠去卵巢誘發腎虛，結合灌服消耗陰液的藥物誘導陰虛病變，觀察該模型的病理生理改變。

1 材料與方法

1.1 材料

3月齡雌性大鼠，體重300g～320g。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組 大鼠按體重分為3組，分別為正常組、去卵巢模型組、陰虛模型組，每組6只。除正常組外其他各組予去卵巢手術，陰虛模型組同時灌服耗陰中藥復方。

1.2.2 去卵巢造模方法 雌性大鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉麻醉，切開皮膚和背肌約1.5cm～2cm，將卵巢下輸卵管(包括脂肪)用絲線結扎，摘除卵巢。術后連續3d做陰道涂片檢查，以涂片中未見到成熟脫落上皮細胞作為卵巢切除成功的指標，用于后續實驗。

1.2.3 陰虛證造模用藥 按照中醫學辛熱傷陰、利水傷陰、溫燥傷陰的認識，給予大鼠灌服耗陰中藥復方:熟附片 10g，干姜 10g，桂枝 10g，豬苓10g，澤瀉10g，草豆蔻10g，均以成人公斤體重10倍用藥量給藥，每日1次，共12周。

1.2.4 血液 E2、FSH、LH、COR、T3、T4檢測灌胃給藥12周后，大鼠瞬間斷頭取血靜置4h，離心分離血清，－20℃保存，用放免法檢測。

1.2.5 子宮指數 動物處死后完整分離子宮，用1/10000電子天平稱重。子宮指數=子宮濕重/體重。

1.2.6 大鼠垂體、腎上腺、子宮病理學檢查大鼠瞬間斷頭后，迅速在顱底垂體窩周圍用手術刀片割劃，取出垂體，摘除一側腎上腺取出大鼠子宮。常規石蠟切片、HE染色、光鏡觀察。

2 結果

2.1 各組大鼠體重、子宮重、子宮指數變化

表1 各組大鼠體重、子宮重量變化

表1顯示，雌性大鼠在切除卵巢后，體重較同期正常組明顯增加(P＜0.01)，而子宮重量、子宮系數明顯減輕(P＜0.01);陰虛模型組體重與去卵巢模型組相比體重無差異，但子宮重量明顯降低(P＜0.01)。

表2 各組大鼠 E2、FSH、LH變化值

表2顯示，與正常組比較，去卵巢組血清中 E2明顯降低(P＜0.01)，FSH有升高趨勢，但無統計學意義，LH明顯降低(P＜0.01);陰虛組 FSH、LH、E2均較去卵巢組明顯升高(P＜0.05)。

2.2 各組大鼠 COR、T3、T4變化

表3 各組大鼠 COR、T3、T4變化值

表3顯示，與正常組比較，去卵巢組血清中COR、T3明顯降低(P＜0.05);陰虛組血清中 COR明顯高于除正常組外其他各組(P＜0.05)，T3、T4亦呈升高趨勢，但無統計學意義。

2.3 各組大鼠子宮、垂體、腎上腺病理檢查

與正常組比較，去卵巢組大鼠子宮內膜及肌層均顯著變薄，內膜層明顯萎縮;內膜固有層內腺體數量明顯減少，腺體腔明顯減小且近于閉合，腺上皮亦明顯萎縮，間質細胞體積減小，間質相對緊密。陰虛組大鼠子宮內膜上皮、腺上皮、間質細胞均有萎縮病變，但與去卵巢組相比萎縮程度較輕。

腺垂體分嗜酸性細胞、嗜堿性細胞、嫌色細胞3種，其中嗜酸性細胞根據其顆粒大小及免疫組化的反應，分為生長激素細胞和催乳激素細胞;嗜堿性細胞分為促甲狀腺激素細胞、促性腺激素細胞、促腎上腺皮質激素細胞;嫌色細胞為貯備性細胞或分泌后細胞。與正常組相比，去卵巢組大鼠腺垂體所有腺細胞胞體明顯萎縮，毛細血管竇分布亦減少。陰虛組大鼠腺垂體無萎縮現象，存在彌漫性的內分泌細胞呈腫脹、肥大現象，但究竟是何種細胞，尚待進一步的免疫組化判定。

正常大鼠腎上腺，球狀帶、束狀帶、網狀帶組織結構清晰、無萎縮和增生現象，去卵巢組束狀帶較正常組明顯變薄，陰虛組球狀帶、束狀帶、網狀帶組織結構清晰，有增生現象。

3 討論

文獻報道，在雌性大鼠去卵巢3個月后出現骨質疏松［2，3］，本研究認為按照中醫學腎主骨的理論，出現骨質疏松時大鼠整體腎虛狀態明顯，在此基礎上加用灌服耗陰中藥復方造成陰虛內熱病變狀態，從而可復合成腎陰虛證動物模型。聯系各組大鼠內分泌激素檢測結果，與垂體、子宮、腎上腺病理檢測結果分析，大鼠在切除卵巢3個月后，血液中雌激素、卵泡刺激素、黃體生成素、皮質酮含量明顯下降，其子宮內膜、垂體出現明顯萎縮現象，腎上腺出現輕度萎縮，說明此時模型的下丘腦-垂體-卵巢軸功能低下，處于相當于人類的絕經后期階段。

在陰虛模型組，血液中雌激素和卵泡刺激素含量均明顯高于去卵巢模型組，其垂體中各內分泌細胞腫脹肥大最為明顯。本文推測陰虛模型大鼠垂體中各分泌細胞在病理形態異常上伴有功能代償性升高，分泌增多的卵泡刺激素促進脂肪、肝臟以及腦等組織中芳香化酶表達升高，使經腎上腺產生的雄激素轉化為雌二醇增多并作用于子宮，使子宮內膜萎縮程度較去卵巢模型組有所改善。陰虛模型組血液中皮質酮含量明顯高于去卵巢模型組，接近正常組，與以往陰虛內熱證臨床研究所發現的腎上腺皮質功能升高相似［4］。腎上腺皮質病理檢查發現，有輕微增生和垂體各分泌細胞肥大腫脹現象，提示在灌服耗陰中藥后，模型下丘腦-垂體-腎上腺皮質軸功能相對于單純去卵巢組明顯升高。綜合上述2個軸的功能變化，與中醫學中的“陰虛內熱”現象有類似之處。

［1］劉杰.益坤飲治療腎陰虛型更年期綜合征的臨床研究以及對血清5-HT影響的探討［D］.南京:南京中醫藥大學2010碩士論文.

［2］劉仕杰，莫新民，李勁平，等.淫羊霍苷對去卵巢骨質疏松癥雌鼠的療效及機理初步研究［J］.中國中醫基礎醫學雜志，2012，18(3)，271-272.

［3］鞠大宏，張春英，王安民，等.左歸丸對去卵巢所致大鼠骨質疏松癥的治療作用［J］.中國中醫基礎醫學雜志，2001，7(3):17-19.

［4］上海中醫學院生化教研組.陰虛火旺與腎上腺皮質、髓質激素關系的初步探討［J］.上海中醫藥雜志，1979，(5)，8-11.