獸用緩釋乳酸環丙沙星注射液的體外抑菌試驗

黃迪海，劉 霞，張再輝，徐秀榮，張 華，楊 波，曹利丹，秦卓明，3

(1．山東省健牧生物藥業有限公司，濟南 250100;2．濟南市動物生物藥品工程技術研究中心，濟南 250100;3．山東省農業科學院家禽研究所，濟南 250100)

乳酸環丙沙星(Ciprofloxacin Lactate)為喹諾酮類抗菌藥，具有高效、廣譜的抗菌活性，對大腸桿菌、沙門氏菌、克雷伯氏桿菌、巴氏桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、金黃色葡萄球菌、支原體和衣原體等均有良好作用［1－3］，且對大多數菌株的 MIC均低于1μg/mL，對敏感菌具有明顯的抗菌后效應(PAE)［4］。乳酸環丙沙星注射液在畜牧養殖中用于治療畜禽細菌性疾病和支原體感染［5］，但存在藥物有效濃度維持時間短、使用次數多等問題。為克服此難題，我們利用骨架緩釋技術成功研發出緩釋乳酸環丙沙星注射液，在實驗室獲得了較好的試驗效果。現將該產品對16株畜禽常見致病菌的體外抑菌試驗結果報告如下:

1 材料

1．1 試驗藥品 緩釋乳酸環丙沙星注射液(簡稱緩釋環丙沙星)中試產品，規格為10 mL:0．4 g，批號分別為20111101、20111102和20111103;乳酸環丙沙星注射液(簡稱環丙沙星)，規格為10 mL:0．2 g，批 號 分 別 為 20111101、20111102 和20111103;恩諾沙星注射液(簡稱恩諾沙星)，規格為10 mL:0．25 g，批號分別為 20111101、20111102和20111103。以上產品均由山東省健牧生物藥業有限公司生產。

1．2 試驗菌株 金黃色葡萄球菌等16株菌株(包括標準菌株及流行菌株)。其中，大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌、綠膿桿菌由山東省農業科學院家禽研究所提供，豬胸膜肺炎放線桿菌、雞鼻氣管鳥桿菌由山東農業大學提供，金黃色葡萄球菌由山東省農業科學院畜牧獸醫研究所提供。

1．3 試驗菌液 標準菌株活化后，接種于Mueller－Hinton(MH)肉湯，與37℃下培養6～12 h，再用MH肉湯稀釋至2×105CFU/mL的濃度，備用。

1．4 培養基 Mueller－Hinton(MH)肉湯培養基。

2 方法

2．1 試驗藥物原液 取上述1．1所述各批次三種試驗藥品，分別稀釋至藥物濃度1280μg/mL，并用孔徑為0．22μm的細菌濾器過濾。

2．2 采用常量肉湯稀釋法 將三種藥物9批原液分別用MH培養基稀釋成11個濃度(128、64、32、16、8、4、2、1、0．5、0．25、0．125 μg/mL)，各組均設不加藥物的空白對照。

2．3 加入藥物的培養基 放入37℃恒溫培養箱中24 h，觀察無污染方可供試驗應用。

2．4 將含不同藥量的1 mL培養基加入已培養24 h各相應菌液1 mL，加入菌液后各管與空白對照管的透明度無明顯差異，各組均設不加藥物的細菌接種對照管。

2．5 試管在室溫條件下放置(20℃)2 h，移入37℃恒溫培養箱內，培養30 h，分別在24 h和30 h觀察、記錄試驗結果(觀察藥物管、空白管、接種管)。

3 結果

三種不同注射液體外24 h和30 h對16株菌株的抑菌效果詳見表1。

表1 緩釋乳酸環丙沙星注射液的體外抗菌活性實驗結果

結果顯示:緩釋環丙沙星和環丙沙星的MIC均小于恩諾沙星。緩釋環丙沙星、環丙沙星和恩諾沙星注射液的MIC范圍在24h的MIC范圍分別為0．125 ～0．5 μg/mL、0．167 ～0．5 μg/mL 和 0．25 ～4．0 μg/mL;在30h分別為 0．125 ～0．667 μg/mL、0．25 ～1．0 μg/mL 和 0．416 ～8．0 μg/mL。比較而言，緩釋環丙沙星在24h對金黃色葡萄球菌等12菌株的MIC均略小于環丙沙星，二者僅在大腸桿菌O78、雞白痢沙門氏菌C79－13、沙門氏菌和鴨巴氏桿菌4株菌株的MIC一致。而在30h時，二者僅在沙門氏菌的MIC一致，其余，緩釋環丙沙星的MIC均低于環丙沙星和恩諾沙星。通過上述抗菌活性比較證實:緩釋環丙沙星維持時間長，抑菌效果好。三者的抑菌是:緩釋乳酸環丙沙星注射液≥乳酸環丙沙星注射液≥恩諾沙星注射液。

4 討論

國內有利用環丙沙星注射液進行奶牛乳腺炎的治療報道［6］，但缺乏對緩釋乳酸環丙沙星注射液的研究。本文通過對緩釋環丙沙星體外抗菌活性的試驗證實，該藥對革蘭氏陽性菌和陰性菌均有較好的體外抑菌效果和較長的藥物維持時間，具有廣闊的臨床應用前景。乳酸環丙沙星對綠膿桿菌的抑菌效果(MIC=0．25μg/mL)明顯優于恩諾沙星(MIC=4．0μg/mL)，提示本品在防治畜禽及毛皮動物綠膿桿菌病可作為首選藥物使用。

試驗發現，藥物與菌液混合培養時，乳酸環丙沙星緩釋注射液抗菌活性明顯優于其普通注射液，并且30h的效果比24h更加明顯。原因主要是緩釋制劑的藥物分子緩慢釋放，藥效更加持久。

乳酸環丙沙星因其良好的療效［7－8］，其粉劑和普通注射液在我國畜禽養殖生產中廣為應用。但是，頻繁的用藥，較短的藥效期，加大了人們的工作量。為此，我們研制了緩釋乳酸環丙沙星注射液，目的是想通過延長藥物的有效血藥濃度維持時間，進而減少每日用藥次數，降低勞動強度，并降低藥物的毒副作用。試驗證實緩釋乳酸環丙沙星注射液比乳酸環丙沙星擁有用藥次數少、藥效維持期長等優點。該藥品的研制成功將有助于畜禽常見細菌性疾病的防治，并大大降低勞動強度。

［1］ 郭建華，李天真，苗 剛，等．乳酸環丙沙星等對金黃色葡萄球菌的體外抑菌試驗［J］．畜禽業，2011，6:59－60．

［2］ 馬建麗，王世嶺，周 亮，等．氟羅沙星葡萄糖注射液與乳酸環丙沙星注射液隨機對照治療細菌性感染69例［J］．解放軍藥學學報，2000，16(6):335－338．

［3］ 陳紹俊．乳酸環丙沙星與其它抗菌藥聯用體外抗菌效果［J］．當代畜牧，2009，2:50－51．

［4］ 中國農業出版社，中國獸藥典獸藥使用指南(化學藥品卷)2010年版［S］．

［5］ 中華人民共和國農業部，獸藥質量標準2003年版［S］．

［6］ 田文儒，劉大海，張雪清．乳酸環丙沙星治療奶牛乳房炎的效果觀察［J］．黑龍江畜牧獸醫，1995，10:28－30．

［7］ 金國星．復方乳酸環丙沙星治療仔豬黃白痢試驗［D］．杭州:浙江大學動物科學學院，2009．

［8］ 李孝文，董 偉，陳小軍，等．復方環丙沙星乳劑的研制及體外抑菌試驗［J］．中國獸醫雜志，2011，(10):79－80．