人鼻咽癌細胞株中表皮生長因子受體蛋白表達與西妥昔單抗抑制率的相關性研究

劉靜 王斌斌 劉斐葉 左強

（南方醫科大學南方醫院腫瘤中心，廣東 廣州 510515）

表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）基因定位于染色體7p12[1]。EGFR在人類部分腫瘤中呈高表達，其介導的信號傳導與腫瘤發生、發展及預后密切相關。鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）中EGFR高表達，并且這種高表達與不良預后相關[2]。西妥昔單抗（cetuximab）是一種人／鼠嵌合型IgG單克隆抗體，可與細胞表面EGFR特異性結合，競爭性阻斷表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）和其他配體如轉化生長因子－α（transforming growth factor-α，TGF-α）的結合，從而阻斷EGFR依賴的腫瘤細胞增殖、轉移、侵襲以及血管生成等生物學效應。本研究應用蛋白質印跡法檢測人NPC細胞株CNE-1、CNE-2、HONE-1、C-666、SUNE-1、5-8F 以 及HNE-17種細胞株中EGFR蛋白表達水平，用MTT法檢測西妥昔單抗對細胞株的抑制率，并探討兩者的相關性，了解檢測EGFR蛋白表達水平是否能夠判斷西妥昔單抗治療NPC的療效。

1 資料與方法

1.1 研究材料 西妥昔單抗由德國Merck公司提供，β-actin一抗與EGFR一抗購自武漢Boster公司，人NPC細胞株CNE-1、CNE-2、HONE-1、C-666、SUNE-1、5-8F以及 HNE-1由廣州博川生物科技有限公司提供。采用RPMI 1640培養液。

1.2 蛋白質印跡法檢測EGFR蛋白表達水平 按常規方法進行。

1.3 MTT法檢測細胞抑制率 按常規方法進行。用Bio-Tek酶標儀分析490 nm處OD值。細胞抑制率＝（加藥組OD值－空白對照組OD值）／（正常對照組OD值－空白對照組OD值）×100%

1.4 統計學處理 用SPSS 13.0統計軟件進行統計學分析。采用方差分析和雙變量相關分析，檢驗水準α＝0.05。

2 結 果

2.1 不同NPC細胞株中EGFR蛋白的表達差異不同NPC細胞株的EGFR表達水平有顯著差異（F＝1748.784，P＜0.001），其中以5-8F細胞株中EGFR表達水平最高，顯著高于其他6種細胞株（P＜0.001）；其次為SUNE-1，見圖1～2。

圖1 不同NPC細胞株EGFR蛋白表達

圖2 不同NPC細胞株EGFR蛋白表達水平

2.2 西妥昔單抗對不同NPC細胞的抑制率 1500 μg／mL濃度時，西妥昔單抗對不同NPC細胞株的抑制率差異有統計學意義（F＝5.942，P＝0.003），其中以對5-8F細胞株的抑制率最高，對 HONE-1抑制率最低；1800μg／mL濃度時，西妥昔單抗對不同NPC細胞的抑制率無顯著差異（F＝2.565，P＝0.069），其中以對CNE-1細胞抑制率最高。西妥昔單抗高濃度組中NPC細胞的抑制率雖均高于低濃度組，但兩組之間無顯著差異（P＞0.05）。見表1、圖3。

表1 西妥昔單抗不同濃度時對不同NPC細胞株的抑制率（）

表1 西妥昔單抗不同濃度時對不同NPC細胞株的抑制率（）

細胞株類型 西妥昔單抗（1500μg／mL） 西妥昔單抗（1800μg／mL） F值 P值288 CNE-2 43.90±15.06 56.16±20.16 0.356 0.583 HNE-1 41.45±5.13 68.33±3.39 1.132 0.3475-8F 47.88±3.57 51.56±4.84 0.132 0.735 HONE-1 15.27±7.31 66.81±2.80 1.490 0.289 C666 43.67±2.23 55.48±2.94 0.587 0.486 SUNE-1 45.01±1.52 64.96±1.62 0.023 0.888 F 值 5.942 2.565 P值 0.003 0.CNE-1 40.71±10.16 72.39±6.15 1.498 0.069

圖3 西妥昔單抗不同濃度時對不同NPC細胞株的抑制率

2.3 EGFR表達水平與細胞抑制率相關性研究1500μg／mL濃度時，西妥昔單抗的細胞抑制率與EGFR蛋白表達水平呈顯著正相關（r＝0.444，P＝0.044）；1800μg／mL濃度時西妥昔單抗的細胞抑制率與EGFR蛋白表達水平則呈顯著負相關（r＝-0.468，P＝0.032）。

3 討 論

西妥昔單抗治療EGFR高表達的轉移性結直腸癌、局部晚期及復發／轉移頭頸部鱗癌（SCCHN），療效好[3－4]。最近，研究者們認為，表達野生型 K-ras基因的結直腸癌患者采用西妥昔單抗和化療聯合治療療效較好，而K-ras基因為突變型的患者在化療基礎上應用西妥昔單抗并無額外益處。

NPC是我國最常見的頭頸部惡性腫瘤，好發于中國南方各省及東南亞地區，其病因包括EB病毒、遺傳易感性、多種癌基因和抑癌基因的相互作用以及環境和飲食因素[5－6]。NPC的 EGFR 表達率為90%～100%。Ma等[7]報告，EGFR表達與未分化NPC患者的不良預后相關，提示EGFR表達可作為判斷NPC患者預后的一個指標。K-ras癌基因被認為是細胞惡變過程中起引發作用的基因，在NPC發生和發展中K-ras基因過表達起重要作用，而非基因突變[8]。故無法通過檢測K-ras基因狀態來決定是否應用西妥昔單抗。目前研究尚未證實EGFR基因或蛋白檢測可預測EGFR抑制劑的療效。

本研究顯示，不同NPC細胞株均存在EGFR蛋白表達，其中以5-8F最高，CNE-1最低；西妥昔單抗對不同NPC細胞株生長均有一定程度抑制作用，其中1500μg／mL濃度對5-8F抑制率最高；1800 μg／mL濃度對CNE-1抑制率最高，而對5-8F抑制率最低。通過對EGFR蛋白表達水平與細胞抑制率之間的相關性研究發現，當西妥昔單抗濃度為1500μg／mL時，兩者之間呈顯著正相關（r＝0.444，P＝0.044），但當濃度增加至1800μg／mL，兩者之間呈顯著負相關（r＝-0.468，P＝0.032）。這一結果提示，NPC細胞中EGFR蛋白表達水平與西妥昔單抗細胞抑制率之間并無相關性，在NPC治療選擇過程中，EGFR蛋白表達水平并不能作為預測西妥昔單抗療效的指標。

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