吉西他濱致輕度胰腺癌相關(guān)惡病質(zhì)模型的建立

吳建華，賈 林，江舒曼

（廣州醫(yī)學(xué)院附屬?gòu)V州市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科 510180）

晚期胰腺癌，尤其是化學(xué)治療患者多伴有食欲缺乏和體質(zhì)量減輕等癥狀，甚至出現(xiàn)腫瘤相關(guān)惡病質(zhì)（cancer－related cachexia），為嚴(yán)重影響患者預(yù)后和生存質(zhì)量的重要因素［1］。Evans等［2］根據(jù)癌癥患者體質(zhì)量下降程度將惡病質(zhì)分為輕度（＞5%）、中度（＞10%）和重度（＞15%），但迄今未見(jiàn)胰腺癌相關(guān)惡病質(zhì)模型的研究報(bào)道。在大劑量吉西他濱（gemcitabine，100mg／kg）化療致重度胰腺癌惡病質(zhì)模型和實(shí)驗(yàn)治療的前期研究基礎(chǔ)上［3］，本文通過(guò)分析不同劑量吉西他濱化療對(duì)胰腺癌模型體質(zhì)量、營(yíng)養(yǎng)狀況和進(jìn)食量的影響及其時(shí)－效關(guān)系，旨在建立輕度胰腺癌相關(guān)惡病質(zhì)模型的制備方法，為惡病質(zhì)的早期干預(yù)奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 24只4～6周齡SPF級(jí)BALB／C裸小鼠，18～21g，由中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供和飼養(yǎng)。吉西他濱購(gòu)自美國(guó)禮來(lái)公司，高轉(zhuǎn)移人胰腺癌細(xì)胞株SW1990由中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院張世能教授惠贈(zèng)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 模型制備及分組 SW1990細(xì)胞懸液0.2mL接種于裸鼠右側(cè)近前腋的背部皮下做供體瘤，裸鼠在接種胰腺癌細(xì)胞后，經(jīng)過(guò)約1周潛伏期，可見(jiàn)接種部位皮下出現(xiàn)淡紅色結(jié)節(jié)，并逐漸長(zhǎng)大，呈圓形或橢圓形。每隔3d用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤大小，待長(zhǎng)至近1cm3的實(shí)體瘤后，取出并剪成1mm3的均勻組織塊，轉(zhuǎn)種于24只裸鼠右側(cè)頸背部皮下，建立胰腺癌皮下移植瘤模型［4］，并隨機(jī)分為對(duì)照組（G0組）、吉西他濱3次組（G3組，吉西他濱50mg／kg，腹腔內(nèi)給藥，術(shù)后第1、4、7天）、吉西他濱4次組（G4組，吉西他濱50mg／kg，腹腔內(nèi)給藥，術(shù)后第1、4、7、10天），每組8只，術(shù)后第25天處死裸鼠。

1.2.2 觀察指標(biāo) （1）記錄實(shí)驗(yàn)前及建模后每周1次的日均進(jìn)食量；（2）測(cè)量實(shí)驗(yàn)前及建模后每隔3d的體質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死動(dòng)物，稱去瘤后小鼠體質(zhì)量；（3）每隔3d用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的最大長(zhǎng)徑A和最小短徑B，按公式V＝0.5×A×B2計(jì)算腫瘤體積，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)取出移植瘤，稱瘤質(zhì)量；（4）每隔3d用游標(biāo)卡尺測(cè)量動(dòng)物的腹部皮褶厚度，皮下脂肪＝皮褶厚度×0.5；（5）每隔3d用游標(biāo)卡尺測(cè)量前臂直徑d，按公式C＝d×3.14計(jì)算前臂周徑。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析及組間兩兩比較的SNK檢驗(yàn)，計(jì)量資料數(shù)據(jù)均采用±s表示。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同劑量吉西他濱對(duì)胰腺癌移植瘤體積和瘤質(zhì)量的影響及時(shí)－效關(guān)系 隨實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)，對(duì)照組腫瘤體積迅速增大，化療組的移植瘤體積增長(zhǎng)緩慢。在實(shí)驗(yàn)的第5天，化療組腫瘤體積顯著小于對(duì)照組（P＜0.05），這種抑制作用一直持續(xù)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。從第13天開(kāi)始，G4組腫瘤體積小于G3組腫瘤體積，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死動(dòng)物，G0組的瘤質(zhì)量［（1.31±0.12）g］顯著高于G3組的（0.38±0.12）g和 G4組（0.33±0.09）g（P＜0.05）；G3組和G4組的瘤質(zhì)量則差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。G3組與G4組的抑瘤率分別為47.3%、51.0%，二者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 不同劑量吉西他濱對(duì)胰腺癌模型鼠重的影響及時(shí)－效關(guān)系 從實(shí)驗(yàn)第5天開(kāi)始，化療組體質(zhì)量明顯低于對(duì)照組（P＜0.05），第9天時(shí)，G3組與G4組平均體質(zhì)量分別下降7.9%、8.1%；第13天時(shí)，G3組平均體質(zhì)量下降9.7%，較G4次組14.1%下降少。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，G3組體質(zhì)量略高于G4組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 不同劑量吉西他濱對(duì)胰腺癌模型體重及營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)的影響及時(shí)－效關(guān)系（±s，n＝8）

表1 不同劑量吉西他濱對(duì)胰腺癌模型體重及營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)的影響及時(shí)－效關(guān)系（±s，n＝8）

a：P＜0.05，與G0組比較。

（d） 組別 體質(zhì)量（g）時(shí)間 瘤體積（mm3）皮下脂肪（mm）臂圍（mm）0 G0 20.72±0.96 0 0.071±0.016 1.77±0.09 G3 20.53±1.08 0 0.070±0.012 1.73±0.11 G4 20.58±1.05 0 0.073±0.013 1.81±0.12 5 G0 20.54±0.97 91.71±16.37 0.070±0.010 1.74±0.11 G3 19.51±0.93a49.28±18.90a0.068±0.012 1.57±0.13a G4 19.49±0.98a53.32±14.75a0.067±0.012 1.61±0.11a 9 G0 20.03±0.91 195.41±14.89 0.068±0.012 1.71±0.12 G3 18.91±0.80a89.94±24.82a0.055±0.012a1.53±0.12a G4 18.92±0.97a92.43±20.19a0.053±0.011a1.55±0.11a 13G0 19.88±0.95 297.87±16.24 0.066±0.012 1.68±0.13 G3 18.53±0.90a109.03±25.65a0.050±0.010a1.51±0.12a G4 17.68±0.96a96.76±22.59a0.044±0.014a1.48±0.13a 17G0 19.25±1.01 529.84±17.63 0.056±0.011 1.60±0.13 G3 17.49±1.00a184.42±22.86a0.041±0.012a1.44±0.10a G4 16.83±0.96a164.66±16.85a0.038±0.015a1.35±0.11a 21G0 18.33±0.90 782.51±17.26 0.036±0.008 1.52±0.12 G3 16.35±0.98a298.51±17.40a0.032±0.005a1.36±0.13a G4 15.81±0.92a282.25±17.10a0.032±0.007a1.26±0.10a 25G0 17.18±1.01 1055.49±25.22 0.033±0.008 1.38±0.11 G3 15.11±1.02a420.62±15.43a0.029±0.004a1.20±0.12a G4 14.90±0.97a400.12±19.39a0.027±0.005a1.14±0.10a

2.3 不同劑量吉西他濱對(duì)胰腺癌模型臂圍和皮下脂肪的影響及時(shí)－效關(guān)系 在實(shí)驗(yàn)第5天，化療組與對(duì)照組臂圍之間出現(xiàn)明顯差異（P＜0.05），這種差異隨著時(shí)間延長(zhǎng)越來(lái)越明顯。從實(shí)驗(yàn)第13天到實(shí)驗(yàn)結(jié)束，G4組平均臂圍小于G3組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)各組動(dòng)物皮下脂肪之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，各組動(dòng)物的皮下脂肪都有減少。在第9天到第17天，化療組的平均皮下脂肪顯著少于對(duì)照組（P＜0.05），G3組平均皮下脂肪較G4組多，但二者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

2.4 不同劑量吉西他濱對(duì)胰腺癌模型日均進(jìn)食量的影響及時(shí)－效關(guān)系 吉西他濱化療1周后，裸鼠進(jìn)食量出現(xiàn)明顯下降，化療組的進(jìn)食量與對(duì)照組比較顯著降低（P＜0.05）。在第14天時(shí)，G4組進(jìn)食量顯著低于G3組（P＜0.05），見(jiàn)表2。但在實(shí)驗(yàn)后期兩組之間進(jìn)食量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表2 不同劑量吉西他濱對(duì)胰腺癌模型進(jìn)食量的影響及時(shí)－效關(guān)系（±s，g，n＝8）

表2 不同劑量吉西他濱對(duì)胰腺癌模型進(jìn)食量的影響及時(shí)－效關(guān)系（±s，g，n＝8）

a：P ＜0.05，與G0組比較；b：P ＜0.05，與G4組比較。

7d 14d 21d 25d G0 5.14±0.12 5.09±0.13 4.95±0.10 4.74±0.11 4組別 基礎(chǔ)值.45±0.18 G3 5.16±0.15 4.14±0.18a3.59±0.12ab 3.19±0.11a2.89±0.11a G4 5.14±0.18 4.13±0.13a3.38±0.14a3.02±0.15a2.67±0.15a

3 討 論

惡病質(zhì)在臨床上的表現(xiàn)多為食欲缺乏、體質(zhì)量減輕、脂肪和骨骼肌分解增加，其中食欲缺乏、體質(zhì)量減輕是最明顯癥狀［5－6］。腫瘤患者的惡病質(zhì)發(fā)生率和病死率分別為80%和20%［7］，與較低的生存質(zhì)量和較差的預(yù)后相關(guān)，并導(dǎo)致腫瘤治療抵抗［8－10］。改善惡病質(zhì)狀態(tài)可以提高晚期腫瘤患者的生活質(zhì)量，增強(qiáng)腫瘤患者對(duì)化療的耐受能力，在腫瘤治療的整個(gè)過(guò)程中是不可忽視的，早期干預(yù)和改善惡病質(zhì)狀態(tài)也因此成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者的重要課題［11－13］。

周偉等［14］通過(guò)觀察實(shí)驗(yàn)過(guò)程中荷瘤鼠體質(zhì)量和血清生化指標(biāo)的改變，成功建立結(jié)腸癌相關(guān)性惡病質(zhì)動(dòng)物模型；國(guó)外學(xué)者Da等［15］和Xu等［16］在建立癌癥惡病質(zhì)動(dòng)物模型后對(duì)惡病質(zhì)進(jìn)行了治療學(xué)研究。在建立惡病質(zhì)模型時(shí)，這些學(xué)者的共同點(diǎn)是在實(shí)驗(yàn)中測(cè)量動(dòng)物的體質(zhì)量與相關(guān)營(yíng)養(yǎng)學(xué)指標(biāo)來(lái)判定是否出現(xiàn)惡病質(zhì)，但都未對(duì)惡病質(zhì)的輕重進(jìn)行分級(jí)，更未見(jiàn)吉西他濱致胰腺癌輕度惡病質(zhì)模型建立方法的報(bào)道。

吉西他濱是目前治療胰腺癌的一線藥物，但有些患者在接受治療過(guò)程中也產(chǎn)生了不同毒副作用，如疲倦乏力、惡心嘔吐、食欲下降、體質(zhì)量降低、營(yíng)養(yǎng)不良和血液系統(tǒng)毒性反應(yīng)等，這些不良反應(yīng)縮短了患者進(jìn)入惡病質(zhì)狀態(tài)時(shí)間。本研究借鑒國(guó)內(nèi)外學(xué)者建立惡病質(zhì)模型的方法，在予小劑量吉西他濱（50mg／kg）治療胰腺癌動(dòng)物模型時(shí)，測(cè)量動(dòng)物的體質(zhì)量及相關(guān)營(yíng)養(yǎng)學(xué)指標(biāo)，成功建立吉西他濱致胰腺癌惡病質(zhì)動(dòng)物模型，并且根據(jù)吉西他濱對(duì)動(dòng)物進(jìn)食量和相關(guān)營(yíng)養(yǎng)學(xué)指標(biāo)的時(shí)－效關(guān)系將惡病質(zhì)程度進(jìn)行了分級(jí)，在每隔2d用藥，用藥3次后，胰腺癌模型的體質(zhì)量下降小于10%，符合Evans等［2］的輕度惡病質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，而對(duì)照組動(dòng)物體質(zhì)量在實(shí)驗(yàn)第21天時(shí)，體質(zhì)量下降約10%，證明胰腺癌動(dòng)物模型在早期未進(jìn)入惡病質(zhì)狀態(tài)。本實(shí)驗(yàn)成功地建立了胰腺癌輕度惡病質(zhì)模型，為后續(xù)治療腫瘤相關(guān)惡病質(zhì)奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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