食管鱗狀細胞癌組織中EGFR、GST－π和癌基因C－erbB－2的表達及其意義

強 勇，徐艷輝，李忠東，錢建軍，景 華

（南京軍區南京總醫院心胸外科，南京210002）

食管鱗狀細胞癌組織中EGFR、GST－π和癌基因C－erbB－2的表達及其意義

強 勇，徐艷輝，李忠東，錢建軍，景 華

（南京軍區南京總醫院心胸外科，南京210002）

目的本研究觀察EGFR、GST－π和C－erbB－2在216例食管鱗癌中的表達及其意義。方法收集手術食管鱗癌標本，應用EnVision法免疫組化檢測EGFR、GST－π和C－erbB－2。并分別比較高分化與中、低分化組，局部浸潤較淺與較深組，有與無淋巴結轉移組，臨床分期較早與較晚組3種基因的表達，探討3者與食管鱗癌臨床因素間的關系。結果EGFR的表達與食管鱗癌分化程度（P＝0.036）、局部浸潤（P＝0.022）、淋巴結轉移情況（P＝0.037）、臨床分期（P＝0.021）有相關性，GST－π和C－erbB－2的表達與局部浸潤（P＝0.019、0.006）、淋巴結轉移情況（P＝0.028、0.039）、臨床分期（P＝0.012、0.027）緊密相關，與分化程度（P＝0.162、0.722）不相關。結論EGFR、GST－π和C－erbB－2聯合檢測對判斷食管鱗癌生物學行為、預后及指導治療有重要意義。

腫瘤，鱗狀細胞；食管；EGFR；GST－π；C－erbB－2；免疫組織化學

食管癌是我國五大癌癥之一，發病率和病死率一直居高不下。其治療面臨早期診斷困難、易出現局部浸潤、淋巴結轉移、耐藥性等問題。以往研究證實EGFR、GST－π和C－erbB－2與上皮來源腫瘤的局部浸潤、淋巴結轉移、耐藥性等問題密切相關［1－5］。本研究應用EnVision免疫組化法檢測食管鱗狀細胞癌組織中EGFR、GST－π和C－erbB－2的表達情況，觀察它們與食管鱗癌臨床因素的關系，以期為食管癌早期診斷、判斷其生物學行為以及預后提供重要參考依據，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 本研究收集病例，為本科2010年11月至2011年4月收治，術后病理學檢查證實為食管鱗狀細胞癌，排除術前行放療、化療及免疫治療，共216例，其中，男151例，女65例；年齡42～79歲，中位年齡58歲。有淋巴結轉移者68例，無淋巴結轉移148例。按組織學分化程度：高分化者61例，中低分化者155例。按國際抗癌聯合會（international union against cancer，UICC）2009年標準臨床病理分期：0期12例，Ⅰ期56例，Ⅱ期70例，Ⅲ期67例，Ⅳ期11例。標本組織經4%甲醛溶液固定，常規石蠟包埋4μm厚連續切片，分別進行蘇木精－伊紅（H－E）染色、光鏡觀察，并運用EnVision免疫組化法染色，檢測 EGFR、GST－π和C－erbB－2的表達。所有染色結果均由兩位資深病理科醫生閱讀診斷核實。

1.2 試劑與方法 鼠抗人單克隆抗體 EGFR、GST－π、C－erbB－2分別購自Dakoky公司、novocastra公司、NeoMaikers公司，克隆號分別為：E30、LW29、Cocktail；Envision免疫組化檢測試劑盒購自福州邁新生物技術有限公司，DAB顯色試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。免疫組織化學法采用En－Vision二步法，抗原修復采用EDTA緩沖液（pH 8.0）高溫高壓熱修復，染色程序按Envision試劑盒說明書進行，采用3，3′－二氨基聯苯胺（DAB）－H2O2顯色。

1.3 結果判斷 EGFR陽性信號定位于細胞膜，GST－π陽性信號定位于細胞質。C－erbB－2陽性信號定位于細胞膜，均為黃色或棕黃色顆粒作為陽性細胞。每張切片隨機選擇10個高倍視野（×200），按陽性細胞百分比分為4個等級，即不著色為陰性（－），＜25%為弱陽性（＋），25%～50%為中度陽性（＋＋），＞50%為強陽性（＋＋＋）。本文所指陽性包括弱陽性、中度陽性和強陽性。

1.4 統計學處理 研究結果應用SPSS17.0軟件進行統計分析。率的比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 EGFR、GST－π和 C－erbB－2在食管鱗癌中的表達 EG－FR、GST－π和C－erbB－2在食管鱗狀細胞癌中的表達情況見表1、封2圖1。

2.2 EGFR、GST－π和 C－erbB－2表達與臨床因素間的關系局部浸潤較深者，淋巴結轉移陽性者，臨床分期較晚者，EGFR、GST－π和 C－erbB－2的陽性表達率均更高；分化程度較低者，EGFR的陽性表達率更高。即 EGFR、GST－π和 C－erbB－2的陽性表達率與局部浸潤、淋巴結轉移、臨床分期呈正相關，而與患者性別、年齡、腫瘤直徑比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表1 EGFR、GST－π和C－erbB－2在食管鱗癌中的表達（%）

表2 食管鱗癌中EGFR的表達與臨床因素間的關系（n）

2.3 EGFR、GST－π和 C－erbB－2基因表達情況與預后相關因素間的關系 眾多研究顯示［6－7］，局部浸潤程度、腫瘤分期及淋巴結轉移情況與食管鱗癌預后緊密相關，是判斷其預后的主要因素。EGFR、GST－π和C－erbB－2基因在食管鱗狀細胞癌中，2個或2個以上基因陽性表達者113例（52.3%），無基因或1種基因陽性表達者103例（47.7%），基因陽性表達情況與食管鱗癌預后相關因素的關系見表3。

表3 3種基因表達情況與預后相關因素間的關系［n（%）］

3 討 論

表皮生長因子受體（EGFR）是腫瘤細胞增殖、分化和抗凋亡過程中的重要調節因子，其高表達可以促進腫瘤細胞增殖、黏附、侵襲和轉移，誘導腫瘤新生血管形成［1］。這一結論得到本研究結果驗證，即EGFR高表達與食管鱗癌分化程度、局部浸潤、淋巴結轉移情況、臨床分期有密切的關系。關于EGFR及針對EGFR的靶向藥物的研究，已成為近年來抗腫瘤治療的主要熱點［4，8］。

GST－π，即胎盤型谷胱甘肽硫轉移酶，具有結合、解毒等功能［9－10］，Kodate等在1986年首次證明在人結腸癌中 GST－π高表達，以后相繼在多種腫瘤中發現GST－π陽性表達或含量顯著增高［11］。這與本研究結果基本一致，即在食管鱗癌中GST－π陽性表達率高達80.1%。本研究還顯示，GST－π的表達與食管鱗狀細胞癌局部浸潤深度、淋巴結轉移情況、臨床分期密切相關。大量研究表明，GST－π與腫瘤預后和耐藥關系密切，是腫瘤細胞產生耐藥的一種標志，已成為癌癥化療方案選擇的重要參考［2－3，12－13］。

C－erbB－2基因，又稱 HER－2基因，位于17號染色體長臂上（17q21），cDNA的長度為4.5kb，編碼的C－erbB－2蛋白是一種相對分子質量為185×103的跨膜糖蛋白，其胞內區的羧基端含有多個酪氨酸，可以通過磷酸化而被激活，再與含有SH2結構域的蛋白結合。將胞外信號傳到核內，最終在核內調節轉錄，從而發揮對細胞功能的調節作用。C－erbB－2的表達與食管癌預后關系的報道尚不多。已有不少學者正致力于C－erbB－2腫瘤靶向治療的研究［14］。

本研究顯示，2個或2個以上基因陽性表達與主要預后相關因素，即局部浸潤、淋巴結轉移情況、臨床分期，均密切相關。提示聯合檢測EGFR、GST－π和C－erbB－2對判斷食管鱗癌生物學行為、預后及指導治療有重要意義。

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Expression of EGFR，GST－πand C－erbB－2 in esophageal squamous cell carcinoma and their clinical significance

Qiang Yong，Xu Yanhui，Li Zhongdong，Qian Jianjun，Jing Hua
（Department of Cardiothoracic Surgery，Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command，Nanjing，Jiangsu210002，China）

ObjectiveTo observe the expression of EGFR，GST－πand C－erbB－2in 216esophageal squamous cell carcinoma（ESCC）patients.MethodsWe collected surgical specimens of ESCC，and applied EnVision immunohistochemical method to detect the expression of EGFR，GST－πand C－erbB－2，compared well－differentiated group and poorly differentiated group，shallow local infiltration group and deep group，with and without lymph node metastasis group，earlier clinical stage group and later group，then researched the relationship between the three biochemical substances and clinical factors.ResultsThe data indicates that the expression of EGFR was closely related to differentiation degree（P＝0.036），the depth of local infiltration（P＝0.022），lymph node metastasis（P＝0.037）and the clinical stage（P＝0.021）；and the expression of GST－πand C－erbB－2were associated with depth of local infiltration（P＝0.019，0.006），lymph node metastasis（P＝0.028，0.039）and the clinical stage（P＝0.012，0.027），but not associated with the differentiation degree（P＝0.162，0.722）.ConclusionCombined detection of EGFR，GST－πand C－erbB－2can play an important role to predict the biological behaviour，prognosis and guide therapy.

neoplasms，squamous cell；esophagus；EGFR；GST－π；C－erbB－2；immunohistochemistry

10.3969／j.issn.1671－8348.2012.32.009

A

1671－8348（2012）32－3377－03

2012－02－20

2012－07－08）

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