正交試驗法優(yōu)選健肝顆粒提取工藝

于海斌，鄭海云*，龔衛(wèi)紅

（1.中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)藥科技合作中心，北京 100700；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院制藥系，北京 100102）

正交試驗法優(yōu)選健肝顆粒提取工藝

于海斌1，鄭海云1*，龔衛(wèi)紅2

（1.中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)藥科技合作中心，北京 100700；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院制藥系，北京 100102）

目的：通過正交試驗，優(yōu)選處方的最佳提取工藝。方法：采用水提取方式，以水為溶劑進(jìn)行提取，選擇加水倍數(shù)、提取時間、提取次數(shù)3個因素，每個因素設(shè)計3個水平，按照正交試驗L9（34）表進(jìn)行試驗。以總黃酮作為指標(biāo)，綜合考慮，選定最優(yōu)提取工藝。結(jié)果：提取的最佳工藝條件為加8倍量水，提取3次，每次2 h。結(jié)論：優(yōu)選得到的提取工藝簡單、穩(wěn)定、可行。

正交試驗；總黃酮；健肝顆粒

健肝顆粒含有葛根、枳椇子、積雪草、綠茶，主要針對酒精性肝損傷人群所設(shè)。方中葛根開胃下食，利尿解酒毒；枳椇子除煩渴，消濕熱，解酒毒，利小便；積雪草清熱利濕，解毒消腫［1］。綠茶有幫助消化，去油膩，解酒的作用。諸品合用，共奏健脾、利濕、解酒毒之效。綠茶不提取。葛根、枳椇子、積雪草均含有黃酮類物質(zhì)，且具有良好的水溶性。研究發(fā)現(xiàn)，葛根、枳椇子、積雪草健肝保肝作用的主要有效成分為總黃酮。為了保證制劑質(zhì)量，以總黃酮含量為指標(biāo)，用正交設(shè)計法研究葛根、枳椇子、積雪草的最佳提取工藝，分析加水倍數(shù)、提取時間、提取次數(shù)對總黃酮的含量的影響，優(yōu)選出最佳提取條件。

1 儀器和材料

1.1 儀器

UV-2800H型紫外可見分光光度計［尤尼柯（上海）儀器有限公司］，BP-211D型十萬分之一分析天平（德國Sartorius公司），KQ5200DA型超聲波清洗機(jī)（張家港市海納超聲電氣有限公司）。

1.2 材料

所有飲片均購于北京本草方源藥業(yè)有限公司。蘆丁（中國食品藥品檢定研究院，批號：100080-200707）；所用試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 樣品的制備

按處方投料，加規(guī)定量的水，煎煮規(guī)定的時間和次數(shù)，濾過，濾液濃縮至稠膏，放入真空干燥箱，干燥得干膏作為樣品，進(jìn)行測定。

2.2 總黃酮含量的測定方法［2］

本文所用的總黃酮測定方法按照衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司編印的 《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》2003年版中保健食品中總黃酮的測定方法進(jìn)行。

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱取蘆丁對照品4.9 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品溶液，濃度49μg·mL-1。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取蘆丁對照品溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL分別置于10 mL比色管中，加甲醇至刻度，搖勻，以甲醇為空白，照紫外-可見分光光度法（《中國藥典》2010年版一部附錄V A），在360 nm波長處測定吸光度，計算。求得回歸方程Y＝0.031X+0.009 9，r＝0.999 4，用于計算試樣中總黃酮的含量。

2.2.3 供試品溶液的制備及測定 取試樣約0.8 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加乙醇至刻度，超聲處理（功率200W，頻率40 kHZ）20 min，放冷，補(bǔ)足乙醇至刻度，精密吸取上清液1.0 mL，置蒸發(fā)皿中，加1 g聚酰胺粉吸附15 min，于水浴上揮去乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱。先用甲苯20 mL洗脫，甲苯液棄去，然后用甲醇洗脫黃酮，定容至25 mL。照紫外-可見分光光度法（《中國藥典》2010年版一部附錄VA），在360 nm波長處測定吸光度。計算試樣中總黃酮含量。

2.2.4 精密度試驗 取供試品溶液適量，按2.2.3項下方法重復(fù)進(jìn)行5次，結(jié)果RSD＝0.43%，表明本方法精密度良好。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液適量，按2.2.3項下方法，分別在0，2，4，6，8 h測定吸光度。結(jié)果RSD＝1.21%，表明供試品在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.6 重復(fù)性試驗 取供試品，按2.2.3項下方法制備供試品溶液并測定吸光度，重復(fù)5次，結(jié)果RSD＝0.96%，表明方法重復(fù)性良好。

2.2.7 加樣回收率試驗 取供試品0.4 g，精密稱定，分別精密加入蘆丁對照品溶液適量，按2.2.3項下方法制備供試品溶液和測定吸光度，結(jié)果見表1。

表1 健肝顆粒中蘆丁加樣回收試驗

2.3 正交試驗設(shè)計

選用L9（34）正交試驗，結(jié)合影響飲片提取效率的主要因素，考察加水量、提取時間、提取次數(shù)對總黃酮含量的影響，同時考慮生產(chǎn)實際，選取3個水平，因素水平見表2，正交試驗結(jié)果見表3，方差分析見表4。

以總黃酮含量為考察指標(biāo)，各因素作用的主次為：C＞A＞B，方差分析結(jié)果表明：A（倍數(shù)）、B（提取時間）、C（提取次數(shù)）影響具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；在A因素中，A2＞ A3＞A1，選擇A2；在B因素中B3＞B2＞B1，故選擇B3；在C因素中，C3＞ C2＞ C1，故選擇 C3。最佳工藝為A2B3C3，即加8倍量水，提取3次，每次2 h。

表2 健肝顆粒提取工藝因素水平表

表3 健肝顆粒提取工藝正交試驗/mg·g-1

表4 健肝顆粒提取工藝方差分析表

2.4 驗證實驗

根據(jù)篩選得到最佳提取工藝A2B3C3提取3次，進(jìn)行驗證，結(jié)果總黃酮含量分別為2.815 7，2.894 0，2.884 9 mg·g-1。

3 討論

中草藥提取對于提高中藥制劑的內(nèi)在質(zhì)量和臨床療效最為重要，并且可以有效降低日服用量，便于制劑成型。在正交試驗中以提取物干膏中所含總黃酮的量為指標(biāo)優(yōu)選工藝，選擇可能影響提取的3個因素進(jìn)行優(yōu)化，確定了健肝顆粒的最佳提取工藝。本配方中，葛根、枳椇子、積雪草均主要含有黃酮類物質(zhì)，并具有良好的水溶性，故可以水進(jìn)行提取，提取后的稠膏與粉碎后的綠茶制備顆粒，工藝簡單可行，損耗低，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

［1］國家藥典委員會.中國藥典［S］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：267.

［2］衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范［S］.2003.

中藥產(chǎn)業(yè)年規(guī)模已達(dá)4 100億元出口23.32億美元

衛(wèi)生部副部長、國家中醫(yī)藥管理局局長王國強(qiáng)日前表示，隨著我國中醫(yī)藥事業(yè)快速發(fā)展，服務(wù)能力明顯增強(qiáng)，中藥產(chǎn)業(yè)規(guī)模明顯擴(kuò)大。目前，我國中藥產(chǎn)業(yè)年規(guī)模已達(dá)4 100億元以上，占國內(nèi)醫(yī)藥市場的3成，中藥出口已達(dá)23.32億美元，全國中藥生產(chǎn)企業(yè)已近1 500家。

在全民醫(yī)保制度建設(shè)方面，由于中醫(yī)藥價格相對低廉，國家通過提高基本醫(yī)保報銷比例，將102種中成藥和符合標(biāo)準(zhǔn)的中藥飲片納入了基本藥物目錄，鼓勵中醫(yī)藥服務(wù)的提供和利用，在更大程度上滿足基層群眾的用藥需求，使全民醫(yī)保的效用得到放大的同時，推動了中藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

目前，我國中藥產(chǎn)業(yè)規(guī)模和技術(shù)水平大幅度提高，全國中藥生產(chǎn)企業(yè)已近1 500家，中藥已從丸、散、膏、丹等傳統(tǒng)劑型，發(fā)展到現(xiàn)在的滴丸、片劑、膜劑、膠囊等40多種劑型，9 000余個品種，中藥產(chǎn)品種類、數(shù)量、生產(chǎn)工藝水平有了很大提高。

由于中藥材使用量急劇增加，許多地方將中藥材的種植和加工納入地區(qū)發(fā)展戰(zhàn)略，作為推動地方經(jīng)濟(jì)發(fā)展、促進(jìn)農(nóng)民增收和調(diào)整產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的重要途徑。

與此同時，中藥企業(yè)走向國際市場的步伐加快，中藥產(chǎn)品和服務(wù)貿(mào)易穩(wěn)步發(fā)展，顯示出巨大的市場發(fā)展?jié)摿ΑＤ壳爸嗅t(yī)藥已傳播到160多個國家和地區(qū)，成為我國服務(wù)貿(mào)易的重要組成部分。

（信息來源：經(jīng)濟(jì)日報）

To Select Extraction of Jiangan Granules by Orthogonal Test

YU Hai-bin1，ZHENG Hai-yun1，GONGWei-hong2
（1.Collaborating Center for TCM and Scientific Technology，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing100700，China；2.School of Chinese Materia Medica，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing100102，China）

Objective：To experiment the bestextraction optimization prescription.Methods：Selectwater as solvent extraction，multiple choicewith water，extraction time and number as three factors，each of the three levels of design，in accordance with the orthogonal L9（34）Table experiment，the composition of total flavonoids as a symbol selected the optimal extraction.Results：The optimum extraction conditions for 8 times the amount of water，2 h as the extraction time and extracted three times.Conclusion：The optimized extraction process is simple，stable and feasible.

Orthogonal extraction；Total flavonoids；Jiangan Granule

*［通訊作者］鄭海云，E-mail：jenny0113＠126.com