液體維生素在異育銀鯽飼料中應(yīng)用效果研究

吳東峰 宋 霖 王永玲 孔 麗 蔡春芳

（蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，江蘇蘇州 215123）

為了保障養(yǎng)殖動(dòng)物正常生長(zhǎng)和健康，需要向飼料中添加足量的維生素。但維生素是一種對(duì)其物理和化學(xué)環(huán)境相當(dāng)敏感的生物學(xué)活性物質(zhì)，其穩(wěn)定性受飼料加工和儲(chǔ)存過(guò)程中許多因子的影響，包括溫度、壓力、濕度、摩擦、氧化還原、光照等[1]。制粒過(guò)程中溫度和壓力越高，干燥時(shí)間越長(zhǎng)，則損失的維生素越多。制粒或膨化后噴涂技術(shù)，能夠避免或減少這些不利影響。后噴涂用的液體維生素在畜禽飼料中已有應(yīng)用[2-3]，但在水產(chǎn)飼料中應(yīng)用效果的研究報(bào)道還較少，為此，本文以異育銀鯽為對(duì)象對(duì)此進(jìn)行初步研究。

1 材料和方法

1.1 飼料

試驗(yàn)飼料以進(jìn)口魚粉、豆粕、菜粕、棉粕為蛋白源，以魚油和豆油為脂肪源，以面粉為糖源配制而成，配方見(jiàn)表1。其中，對(duì)照組飼料添加1‰固體維生素預(yù)混料，試驗(yàn)組分別添加0.8‰和0.5‰的納米級(jí)液體維生素預(yù)混料（納維素）。固體維生素和液體維生素配方相同，均由上海三智生物技術(shù)有限公司提供。對(duì)照組向飼料中添加多維后再制粒，并用95℃蒸汽熟化5 min。試驗(yàn)組制粒后用95℃蒸汽熟化5 min，再噴涂納維素。

1.2 試驗(yàn)魚

異育銀鯽購(gòu)自蘇州市吳江養(yǎng)殖場(chǎng)，為當(dāng)年池塘養(yǎng)殖魚種。經(jīng)一周馴養(yǎng)適應(yīng)環(huán)境后，選取300尾大小均勻、體格健壯的魚種隨機(jī)分配到15個(gè)100 cm×50 cm×50 cm的PVC水族箱中，每箱20尾。鯽魚平均初重為(24.3±1.0)g。各試驗(yàn)組按完全隨機(jī)化配置法分布以避免地理位置的差異造成的試驗(yàn)誤差。

表1 試驗(yàn)飼料配方及納維素在飼料中的添加量(%)

1.3 飼養(yǎng)管理

每種飼料投喂5箱鯽魚，視魚的攝食情況調(diào)整投喂量，投喂時(shí)間分別為8:30、12:30、17:00。所有水族箱在同一半開(kāi)放式循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中，自然光周期，以充分曝氣的自來(lái)水為水源，每天換水量為總水量的1/3。養(yǎng)殖水經(jīng)過(guò)濾、沉淀后流回蓄水池，經(jīng)過(guò)增氧、控溫后由水泵抽回各水族箱。養(yǎng)殖期間水質(zhì)條件為：水溫(25±2)℃，DO＞4.5 mg/l,pH 值 7.5±0.2,NH4+-N(0.25±0.05)mg/l,NO2-N(0.04±0.01)mg/l，硫化物＜0.05 mg/l，各項(xiàng)指標(biāo)均符合養(yǎng)殖水體要求。共飼養(yǎng)60 d。

1.4 采樣與分析方法

1.4.1 樣品采集與制備

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，停止喂食24 h，收集試驗(yàn)魚，使用MS-222將魚麻醉，稱重。

血清制備：尾靜脈抽血，自然凝固后，以3 000 r/min冷凍離心20 min除去血細(xì)胞，取上清液即為血清。

黏液制備：用濾紙將魚體表面的水分吸干，用解剖刀從魚體背部一側(cè)刮取黏液，稱重，加5倍體積0.02 mol/l、pH值7.4的磷酸緩沖液，于玻璃勻漿器中勻漿，以10 000 r/min冷凍離心20 min，棄沉淀，取上清液即為粗酶液。

肝組織酶液制備：迅速取肝胰臟，稱重，液氮冷凍后-20℃保存。分析前加5倍體積生理鹽水，用FSH-2型可調(diào)高速勻漿器在冰浴中勻漿，隨后在4℃下以10 000 r/min離心20 min,棄沉淀,取上清液即為粗酶液。

1.4.2 血清生化指標(biāo)測(cè)定

使用全自動(dòng)血清生化分析儀(CHEMIX-800 Sysmex TRANSASIA)測(cè)定丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(CHO)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)以及血糖(Glu)等指標(biāo)。

1.4.3 SOD活力測(cè)定

參照謝衛(wèi)華（1988）的方法稍作改進(jìn)，將4.5 ml 50 mmol/l、pH值8.2的Tris-HCl緩沖液(50 ml 0.1 mol/l Tris溶液與22.9 ml、0.1 mol/l鹽酸混勻后，加水稀釋至100 ml)于25℃保溫20 min，然后加入預(yù)熱的45 mmol/l鄰苯三酚10 μl（對(duì)照管用10 mmol/l HCl代替），迅速搖勻，倒入光徑1 cm的比色杯中，325 nm下，每隔30 s測(cè)A值一次。要求自氧化率控制在0.070/min左右。

樣品酶活性測(cè)定方法與測(cè)定鄰苯三酚自氧化速率相同，在加入鄰苯三酚前加入待測(cè)SOD樣液。按下列公式計(jì)算酶活性：

1.4.4 樣品體積肝組織總抗氧化活力（T-AOC）測(cè)定

采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，所有統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS17.0軟件，用Duncan's多重比較法分析試驗(yàn)結(jié)果的差異顯著性，顯著水平為0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同來(lái)源維生素對(duì)異育銀鯽生長(zhǎng)性能的影響（見(jiàn)圖1）

在60 d的飼養(yǎng)期內(nèi)，異育銀鯽生長(zhǎng)和攝食正常。對(duì)照組增重率為94.5%，飼料系數(shù)為1.82，0.8‰和0.5‰納維素組增重率有所提高。增重率和飼料系數(shù)，各組之間差異不顯著。

2.2 不同來(lái)源維生素對(duì)異育銀鯽血清生化指標(biāo)的影響（見(jiàn)表2）

表2 固體維生素和納維素對(duì)異育銀鯽血清生化指標(biāo)的影響

血清生化指標(biāo)顯示 ALT、AST、CHO、HDL-C 以及Glu差異不顯著(P＞0.05)，但TG存在差異，0.8‰納維素組顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），0.5‰納維素組與對(duì)照組相比差異不顯著(P＞0.05)。

2.3 不同來(lái)源維生素對(duì)異育銀鯽抗氧化性能指標(biāo)的影響（見(jiàn)表 3）

表3 固體維生素和納維素對(duì)異育銀鯽血清、黏液和肝SOD活力以及肝T-AOC的影響

血清和肝組織中SOD活力均是0.8‰納維素組顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，黏液SOD活力各組間差異不顯著。肝組織中T-AOC活力0.8‰納維素組顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。0.5‰納維素組與對(duì)照組相比差異不顯著(P＞0.05)。

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)，使用0.8‰的納維素可以顯著提高血液和肝胰臟中抗氧化酶活性，降低血清TG水平。而使用0.5‰的納維素組異育銀鯽的生長(zhǎng)、抗氧化活力、血清指標(biāo)都與對(duì)照組相比差異不顯著。

水產(chǎn)飼料加工過(guò)程中，為了改善飼料適口性和糖類可利用性，越來(lái)越傾向于采用擠壓工藝。但這也導(dǎo)致一些敏感性養(yǎng)分，如維生素[4]受制粒機(jī)、膨化機(jī)、膨脹器等熱加工設(shè)備的大量破壞，反而增加了這些成分的補(bǔ)償添加量，從而增加飼料成本。因此，液體維生素的后噴涂技術(shù)得到了大量關(guān)注。翟洪玲等[5]報(bào)道，后噴涂技術(shù)可以顯著提高維生素的活性保存率，亦可獲得較好的顆粒間均勻性。液體維生素的優(yōu)點(diǎn)主要表現(xiàn)在可以避免應(yīng)用過(guò)程中的粉塵損失，有利于在飼料中的均勻分布，可以有效避免因高溫造成的損失。這可以解釋本研究中0.5‰納維素組與對(duì)照組相比差異不顯著的現(xiàn)象。

維生素A、C、E等具有抗氧化性質(zhì)，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，0.8‰納維素組抗氧化能力顯著高于對(duì)照組，應(yīng)該與這些維生素的存在有關(guān)。此外，液體維生素因其顆粒小，比表面積大，擴(kuò)散迅速，因而更有利于動(dòng)物的吸收利用。這可能也是0.8‰納維素組抗氧化力顯著高于對(duì)照組的一個(gè)重要原因。從本試驗(yàn)結(jié)果看，0.8‰納維素組效果優(yōu)于1‰固體維生素組。

液體維生素后噴涂技術(shù)雖然避免了維生素在加工過(guò)程的破壞，但由于這些維生素直接噴灑于飼料顆粒表面，直接接觸外界環(huán)境，因而受光照、濕度等環(huán)境因子的影響比較大，其損失速度有待于進(jìn)一步研究。對(duì)于水產(chǎn)動(dòng)物來(lái)說(shuō)，飼料需投入水中，其溶失也會(huì)影響維生素的利用效率。本試驗(yàn)中由于鯽魚是比較容易馴飼的魚類，飼料顆粒入水即被食用，因而影響可能較少。但對(duì)于抱食的水產(chǎn)動(dòng)物以及攝食速度比較慢的水產(chǎn)動(dòng)物，其溶失率也需要研究確認(rèn)。

[1]葛建東,楊凌.飼料工藝對(duì)預(yù)混料中維生素的影響[J].飼料研究,1998(1):15-17.

[2]張紅崗，韓一超，武守艷，等.納米級(jí)液體型維生素E-硒合劑對(duì)羊硒缺乏的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控研究[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘,2011,27（2）：139-141.

[3]張雅琴，翟長(zhǎng)富.雞用液體維生素飼喂試驗(yàn)[J].飼料與畜牧：新飼料，1989(4):34-35.

[4]Coelho M.Vitamin Stability in Premixes and Feeds A Practical Approach in Ruminant Diets[J].Proceedings 13th Annual Florida Ruminant Nutrition Symposium,2002:127-145.

[5]翟洪玲,王紅英，薛松堂,等.對(duì)顆粒飼料真空后噴涂液體維生素的試驗(yàn)研究[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)，2005，21（12）：89-92.