五倍子與沒食子提取物對人工脫礦釉質再礦化的研究

陳 鯤，阮金云，易多宗，楊發成，藍 海

（大理學院藥學與化學學院，云南大理 671000）

齲齒是一種細菌性疾病，它能導致牙齒硬組織進行性病損，表現為無機質脫礦和有機質分解是人類最常見的世界性疾病之一。世界衛生組織將它列為危害人類健康的第三大高發疾病，它的發病率僅次于心血管病和腫瘤。它能使牙齒缺損、疼痛、影響進食、睡眠及工作。目前，治療齲齒的主要方法是填充法，或在形成初期齲時用氨硝酸銀處理病變部位。

在人們回歸自然的呼聲日益高漲的今天，天然藥物的研究已成為焦點，根據天然藥物具有地域性的特點，不同國家也在探索研究屬于自己的特色藥物。天然藥物五倍子、沒食子均有防齲功效〔1-2〕。但兩種藥物的防齲對比研究尚未見報導。五倍子又名百蟲倉、百藥煎、棓子，我國主要產于四川、湖南、陜西等地，是由五倍子蚜蟲寄生在漆樹科鹽膚木屬植物上形成的蟲癭。五倍子主要含有五倍子鞣質，其具有藥理活性的主要成分為五倍子鞣質及水解產生或藥原含有的沒食子酸〔3〕。沒食子來源于沒食子蜂科昆蟲沒食子蜂的幼蟲，寄生于殼斗科植物沒食子樹幼枝上所產生的蟲癭。干燥蟲癭略呈球形，有短柄；直徑1～2.5 cm，外表灰色或灰褐色，有疣狀突起。主產地為希臘、土耳其、伊朗等。主要含有的藥理活性成分為沒食子酸。另外，侯惠嬋，梁前等的研究表明：不同產地的五倍子、沒食子中沒食子酸的含量相差較大〔4〕。

本實驗中通過對樣品處理再礦化后的釉質進行顯微硬度測定，對比五倍子、沒食子提取物的再礦化效果，為防齲藥物的開發利用提供理論依據。

1 材料和方法

1.1 儀器與藥品 AE200型電子天平（波特樂-托利多儀器有限公司）；303-A-I型電熱恒溫培養箱（蕭山永發電器有限公司，湖南實驗儀器廠）；pHS-25C數字酸度計（上海鵬順科學儀器有限公司）；E-201-C型復合電極（上海精密科學儀器有限公司）；旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）；SHI-D（Ⅲ）循環水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司）；80-2臺式低速離心機（上海醫療器械集團有限公司手術器械廠）；SY5200DH超聲波清洗儀（上海聲源超聲波儀器設備有限公司）；ZQX-1全自動金相鑲嵌機（上海緯維電子科技有限公司）；402MVD型自動轉塔數顯顯微硬度儀（依工測試測量儀器上海有限公司）。 KCl、CH3CH2COOH、NaCl、CaCl2、NaH2PO4、Na2S、尿素（以上藥品均為分析純）。

脫礦液：0.15 mol/L KCl用CH3CH2COOH調至pH=4.00；人工唾液：KCl 0.4083 g，NaCl 0.4097 g，CaCl20.8016 g，NaH2PO40.7764 g，Na2S 0.0052 g，尿素1.0510 g用蒸餾水溶解，加水至1000 mL，用KOH調至pH=6.00。

1.2 脫礦標本制備 市場購買新鮮拔出的牛切牙，去除牙根部軟組織，用無氟石英砂紙打磨去除釉質表面色素及菌斑。超聲清洗干凈，干燥，置于生理鹽水中-4℃保存備用。將牙齒用蒸餾水洗凈，晾干，浸泡于100 mL脫礦液中，在37℃條件下放置10 d，每5 d更換一次脫礦液。脫礦后的牙齒用無氟石英砂紙在牙釉質打磨出一光滑平面，用ZXQ-1全自動金相鑲嵌機將其鑲嵌在鑲嵌粉中。

將鑲嵌好的脫礦標本用402MVD型自動轉塔數顯顯微硬度儀在正壓力為200 g的條件下測定硬度，每個標本測定3次，取平均值在313 kg/mm2左右的24顆牛切牙標本作為實驗樣本。

1.3 再礦化液的制備 五倍子、沒食子購于大理市藥材市場，經大理學院生藥學教研室楊月娥高級實驗師鑒定為正品。將五倍子、沒食子洗凈置于80℃條件下干燥至恒重，粉碎成粉末，分別準確稱取16 g，用200 mL乙醇超聲提取2 h，提取液蒸發濃縮成浸膏，用去離子水溶解，配制成80 mg/mL的五倍子再礦化液和80 mg/mL沒食子再礦化液。

1.4 再礦化 將上述所選24顆脫礦牙釉質標本隨機分為3組，每組8顆。 經配對t檢驗分析，P＞0.05，差異無統計學意義。其中，A組用80 mg/mL的五倍子提取液進行再礦化處理，每顆牛切牙標本用棉簽蘸取80 mg/mL五倍子提取液涂抹于牙釉質1 min，再用人工唾液涂抹1 min，每天4次（ 每隔3 h處理1次）；B、C兩組分別用沒食子提取液、去離子水處理，方法同上。再礦化處理10 d后，用402 MVD型自動轉塔數顯顯微硬度儀在正壓力為200 g的條件下測定各組牛切牙標本釉質表面硬度，每個標本測定3次，取平均值。

1.5 統計學分析 對各組數據進行兩獨立樣本t檢驗分析。

2 結果

經五倍子乙醇提取物（A組）、沒食子乙醇提取物（B組）處理后，兩組再礦化后標本牙釉質表層顯微硬度平均值均明顯高于再礦化前（P＜0.01）；去離子水對照組（C組）牙釉質表層顯微硬度平均值與再礦化前相比差異無統計學意義（P＞0.05）。這一結果表明五倍子乙醇提取物、沒食子乙醇提取物都有促進脫礦牛切牙再礦化的作用，見表1。

表1 各組再礦化前后釉質表面顯微硬度平均值（ ±s，kg/mm2）

表1 各組再礦化前后釉質表面顯微硬度平均值（ ±s，kg/mm2）

注：與脫礦后比較，*P＜0.01；**P＞0.05

測定次數 C組脫礦后 3312.3±1.7再礦化后3313.0±1.8**A組B組313.8±1.2345.35±1.2*312.8±1.9330.6±0.6*

再礦化后，A、B兩組間釉質表層顯微硬度平均值比較，差異具有統計學意義（ P＜0.01），A、B兩組釉質表層顯微硬度平均值與C組比較，差異具有統計學意義（ P＜0.01）。 并且，A組平均值明顯高于B組，說明五倍子乙醇提取物的再礦化能力強于沒食子乙醇提取物。

3 討論

齲病的治愈過程比較繁瑣并且齲齒的發生嚴重危害人體健康，人們也一直致力于防齲的研究。天然藥物五倍子中含有鞣酸成分，又稱單寧酸或沒食子鞣酸，分子式為C76H52O46。體外實驗證實，五倍子有提高釉質抗酸性的作用，對齲齒的形成有明顯的抑制作用〔5-8〕，另外還含有沒食子酸、樹脂、蠟質、淀粉等。沒食子中的沒食子酸同樣具有防齲功效。趙今等的研究表明沒食子鞣質會影響牙齒菌斑形態，對牙齒結構有保護作用〔9〕。

五倍子和沒食子中都含有防齲有效活性成分鞣酸，1979年，Tanizaki等針對鞣酸能與蛋白質反應，具有抑制膠原蛋白分解的特性，用于牙本質研究，發現鞣酸抑制了牙本質的膠原蛋白分解，具有阻礙齲化過程的作用〔10-11〕。

另外，五倍子、沒食子中的金屬離子和生物堿生成難溶型復合物，該復合物難溶于脫礦液中，可抑制牛切牙中鈣的溶出和有機質的崩解〔12〕，起到了阻礙齲化進程的作用。

由于本實驗中并未測定五倍子、沒食子中鞣質及其它成分（金屬離子，生物堿等）的精確含量，牛切牙再礦化處理時，涂抹的藥物不能達到絕對均勻等因素，對實驗結果有一定影響，但其良好的防齲效果已得到證實。至于五倍子、沒食子影響牙釉質硬度值改變的具體作用物質還有待進一步研究確定。

〔1〕李艷君，唐榮銀，呂昕，等.五倍子提取液對牙本質齲損時膠原蛋白分解的影響〔J〕.牙體牙髓牙周病學雜志，2002，12（ 5） ：252-254.

〔2〕李新尚，趙今.天然藥物沒食子對牙釉質礦化作用的體外實驗研究〔D〕.新疆醫科大學：口腔臨床醫學，2011，25（ 10）：15-17.

〔3〕李秀萍，李春遠，渠桂榮，等.五倍子的研究概況〔J〕.中醫藥學報，2002，30（ 3）：73-74.

〔4〕侯惠嬋，梁前，盧迅聰.五倍子、沒食子中沒食子酸的含量測定〔J〕.中國藥品標準，2005，6（ 3）：38-39.

〔5〕汪大照，余志芬，張向宇.五倍子提取物對牙釉質脫礦和再礦化作用的影響〔J〕.江蘇中醫藥，2011，43（ 4）：85-87.

〔6〕王蕓，唐榮銀.五倍子水提物處理早期人工釉質齲后的表面結構的掃描電鏡觀察〔J〕.牙髓牙周病學雜志，2005，15（ 3）：133-135.

〔7〕王蕓，唐榮銀.再礦化藥物的研究進展〔J〕.牙體牙周病學雜志，2005，15（ 9）：523-524.

〔8〕黃正蔚，周學東，李繼遙，等.中藥五倍子對口腔致齲菌影響的體外實驗研究〔J〕.華西藥學雜志，2002，17（ 2）：104-106.

〔9〕趙今，哈木拉提·吾甫爾，林靜，等.沒食子鞣質及其有效提取物對牙菌斑生物膜形態結構和活性的作用〔J〕.科技導報，2009，27（ 7）：24-28.

〔10〕Tanizaki K，Inoue K.Effect of tannin fluoride preparation on the reduction of secondary caries〔J〕.J Osaka Univ Dent Sch， 1979（ 19）： 129-146.

〔11〕Matsumura Chari T，Kanamoto K.The tracement of deep caries lesions by indirect pulp capping with use of polycarboxylate cement combined with tannin-fluoride prepaiation〔J〕.Okayama Unir J Dent， 1989（ 8） ：5-7.

〔12〕李彩，周學東.五倍子在齲病防治中的研究進展〔J〕.華西醫學，2006，21（ 2）：427-428.