安徽產丹參高效液相色譜指紋圖譜的研究

張 穎，劉學醫，周 宙，趙寶林

安徽產丹參高效液相色譜指紋圖譜的研究

張 穎，劉學醫，周 宙，趙寶林

摘 要：本研究的目的是建立高效液相色譜法安徽產丹參藥材的指紋圖譜。所彩的方法采用HPLC法測定，以甲醇5%冰乙酸水溶液為流動相，混合梯度洗脫，檢測波長為281nm，柱溫25℃，流速0.8ml/min。摸索并建立了安徽丹參HPLC的指紋圖譜，圖譜中各成分峰峰型良好，分離較完全，各產地丹參藥材在該方法下易于對比和分析。本方法穩定可靠，對于丹參的色譜分析具有一定積極意義，可以作為控制丹參內在質量的方法之一，為安徽藥用丹參的質量評價提供一定依據。

關鍵詞：丹參；HPLC；指紋圖譜

張穎，劉學醫/安徽中醫藥高等專科學校講師（安徽蕪湖241000）；周宙/安徽中醫藥高等專科學校助教（安徽蕪湖241000）；趙寶林/安徽中醫藥高等專科學校副教授（安徽蕪湖241000）。

丹參為唇形科鼠尾草屬植物丹參SalviamiltiorrhizaBge的干燥根及根莖，主治瘀血所致的各種疼痛、徵瘕積聚、瘡瘍癰腫以及心悸失眠等癥，丹參主要含脂溶性二萜醌類(丹參酮I、丹參酮Ⅱ和隱丹參酮等)和水溶性酚酸類(丹參素、原兒茶酸、丹酚酸A、B等)等成分，其他還含有原兒茶醛、黃芩苷和谷氨酸等成分[1]。指紋圖譜經過數年的發展，已成為國際公認的控制中藥或天然藥物質量的有效手段。安徽自古盛產優質丹參，是重要丹參的生產基地之一。本實驗對安徽不同產地丹參藥材進行了HPLC分析測試，摸索并建立了丹參指紋圖譜的共有模式，該方法可作為控制丹參內在質量的方法之一，對于全面評價丹參藥材質量具有一定的積極意義。

一、材料與方法

（一）儀器和材料

1.儀器與試劑。美國waters E600高效液相色譜儀；waters 2489 UV/Visble Detector；浙江大學N2000色譜工作站；美國waters Symmetry C18色譜柱。上海上平儀器公司分析天平。甲醇、冰乙酸為色譜純，南京化學試劑廠生產，水為娃哈哈純凈水。對照品丹參素鈉（批號110855-200809）、丹酚酸B(批號111562—200807)、丹參酮ⅡA（批號110766-200619）、隱丹參酮(批號0852-9903)、丹參酮I(批號0867-2000003)、二氫丹參酮（批號0868-200002）由中國藥品生物制品檢定所提供。

2.樣品。供試品丹參由安徽中醫藥高等專科學校中藥教研室趙寶林副教授鑒定。

（二） 方法[2]

1.HPLC色譜條件。waters symmetry C18 5μm 4.6 mm×150mm色譜柱。檢測波長為281nm，柱溫25℃，流速0.8ml/min。流動相為甲醇和5%冰乙酸水溶液混合梯度洗脫，梯度洗脫條件如表1所示。

2.對照品溶液制備。精密稱取各對照品，用甲醇配制成丹參素鈉溶液100μg/ml、丹參酮I溶液106μg/ml、隱丹參酮溶液106μg/ml、二氫丹參酮溶液 110μg/ml、丹酚酸 B溶液97μg/ml、丹參酮ⅡA溶液99μg/ml。

3.樣品溶液制備。取干燥樣品0.5g，粉碎后置于100ml圓底燒瓶中，加入50ml甲醇溶液，精密稱取其質量后于沸水浴上加熱回流提取1h，冷卻放至室溫，依之前稱取的質量補足所失甲醇，用0.45μm微孔濾膜過濾即得待測溶液。

4.測定方法。取各供試品溶液20μL，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖并計算。

5.方法學考察。

（1）對照試驗。分別吸取丹參素鈉、丹酚酸B、丹參酮ⅡA、隱丹參酮、丹參酮I、二氫丹參酮對照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。

（2）穩定性和精密度試驗。取同一份供試品溶液，分別在0.5h、2h、5h、12h、24h后進行分析測試，考察色譜峰保留時間的一致性，各主要色譜峰保留時間的RSD均小于5%；取同一份供試品溶液，連續進樣5次，考察色譜峰保留時間的一致性，各色譜峰保留時間的RSD均小于5%。

二、指紋圖譜及各項技術參數

測試丹參藥材所得指紋圖譜見圖1。分析比對8個產地藥材供試品溶液HPLC指紋圖譜，可確定其中14個峰是所有供試品所共有的，因此確定這14個峰為共有指紋峰，其中峰14為丹參酮ⅡA，設定其為基礎峰。8個產地藥材供試溶液的共有峰相對保留時間和相對面積見表2和表3。

表1 HPLC梯度洗脫條件

圖1 丹參指紋圖譜

表2 共有指紋峰的相對保留時間

表3 共有指紋峰的相對峰面積

三、討論

1.經過多次實驗對比，確定采用甲醇作為提取溶劑，水浴加熱回流提取1小時，提取范圍廣，可兼顧水溶性成分和脂溶性成分，提取效率高；建立了丹參藥材的指紋圖譜方法，所得圖譜峰數多且分離度好；采用加入少量乙酸的乙醇水系統梯度洗脫，有效的降低了丹參中酚酸所帶來的拖尾現象，經過摸索，確定了洗脫時間和條件，分離效果較好，所得圖譜峰型良好，分離度高，易于比較和分析；掃描波長選擇為281nm，所得圖譜信息量豐富且峰位分布合理。

2.建立的指紋圖譜方法實用性強，重現性好，可作為丹參指紋圖譜的成熟條件加以應用；使用指紋圖譜相似度軟件進行計算，結果表明所測試丹參藥材之間相似度大于98%，與圖譜觀察判斷一致，說明建立的指紋圖譜具有特征性，可為丹參藥材的質量控制提供可靠依據，

3.本實驗有待進一步測定更多省份和批次的丹參藥材進行研究驗證，使應用HPLC指紋圖譜檢定和判斷丹參藥材質量的方法更加完善和科學。

[1]趙寶林，劉學醫，劉宏等.安徽藥用丹參資源調查研究[J].現代中藥研究與實踐，2010，24（5）：31-32

[2]鄭曉珂，董三麗，馮衛生等.河南產丹參高效液相色譜指紋圖譜的研究[J].中國現代應用藥學雜志，2006，23（1）：57-60

中圖分類號：Q948

B

1671-6531（2012）10-0037-02

安徽省高校青年教師資助計劃項目 （編號：2008jq1171）；安徽高校省級自然科學研究項目 （編號：KJ2008B078）

：何 巖