反相高效液相色譜法測定復方水楊酸酊中水楊酸和苯甲酸含量

黃 潔，李鋒武，劉鵬鳴，范 菲，單 敏

(陜西省西安市食品藥品檢驗所，陜西 西安 710054)

復方水楊酸酊的主要成分為水楊酸和苯甲酸，臨床上主要用于手足癬、體癬、股癬及花斑癬等的治療。衛生部《中國醫院制劑規范(第二版)》(1995年)中采用中和法測定復方水楊酸酊的總酸量，但不能分別測定水楊酸和苯甲酸的含量，故不能有效控制制劑的質量。國家藥品標準[1]中其含量測定項下水楊酸采用紫外分光光度法，專屬性不強;苯甲酸采用容量分析法，操作煩瑣，且消耗樣品和試劑的量大。筆者參考文獻[2－3]，建立了可同時測定復方水楊酸酊中水楊酸和苯甲酸含量的高效液相色譜法，操作簡單，靈敏度高，重現性好，現報道如下。

1 儀器與試藥

Ultimate U－3000型高效液相色譜儀(美國戴安公司);TU－1901型紫外可見分光光度計(美國普析通用儀器有限公司)。水楊酸對照品(批號為100106－200303)，苯甲酸對照品(批號為100419－200301)，均由中國藥品生物制品檢定所提供;復方水楊酸酊(西安市中心醫院自制制劑，批號為20100406，20100412，20100413);乙腈(色譜純，Merck公司)，四氫呋喃(色譜純，Merck公司)，水為三蒸水(自制)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Phenomenex Luna C18柱(150 mm × 4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－四氫呋喃－冰醋酸－水(20∶5∶5∶70);流速:1.0 mL/min;檢測波長:231 nm;進樣量:10 μL。在上述色譜條件下，對照品及樣品中苯甲酸和水楊酸均能完全分離。色譜圖見圖1。

2.2 溶液配制

取處方中除水楊酸與苯甲酸之外的成分，即乙醇，作為陰性對照品溶液。精密稱取水楊酸、苯甲酸對照品適量，用乙醇溶解并稀釋制成分別含水楊酸、苯甲酸 51.6 μg/mL 和 100.1 μg/mL 的對照品貯備液。精密量取樣品5 mL，置100 mL容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取2 mL，置100 mL容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學考察

線性關系考察:分別精密吸取對照品貯備液2，4，6，8 mL，置10 mL容量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積(Y)為縱坐標、質量濃度(X)為橫坐標進行線性回歸。水楊酸和苯甲酸的線性回歸方程分別為 Y=17 686 564.922 5 X+19 117.430 0(r=0.999 6)和 Y=17920994.0060X+15388.5800(r=0.9999)。結果表明，水楊酸與苯甲酸質量濃度分別在 10.3～51.6μg/mL 和20.0～100.0μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:取同一對照品溶液，重復進樣5次。結果水楊酸與苯甲酸的 RSD分別為0.92%和0.60%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗:取同一批樣品5份，依法制備供試品溶液并測定含量。結果水楊酸與苯甲酸的 RSD分別為0.56%和0.95%(n=5)，表明方法重復性良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別配制后于 0，2，4，8，12 h進樣，依法測定。結果水楊酸和苯甲酸含量的 RSD分別為1.8%和1.1%(n=5)，表明供試品溶液至少在12 h內保持穩定。

加樣回收試驗:精密量取樣品5 mL，置100 mL容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置100 mL容量瓶中，分別精密加入混合對照品溶液(含水楊酸288.6 μg/mL、苯甲酸547.9 μg/mL)4.0，6.0，8.0 mL，加乙醇稀釋至刻度，搖勻。每個質量濃度分別配制3份溶液，按供試品溶液制備方法處理并測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果(n=9)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法分別制備供試品溶液，分別取對照品溶液和供試品溶液，進樣10 μL，按外標法計算含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果(n=3)

3 討論

配制水楊酸和苯甲酸的對照品溶液，分別于200～400 nm波長測定紫外吸收光譜，結果各待測物質最大吸收波長水楊酸為303，235，210 nm，苯甲酸為 272，228，202 nm。為了兼顧兩種組分的測定靈敏度，決定采用231 nm作為檢測波長。

試驗中曾采用甲醇－水(40∶60)、0.1 mol/L磷酸二氫鈉溶液(用磷酸調節 pH 至 5.0)－甲醇(60∶40)、0.4%三乙胺溶液(用磷酸調節pH至2.5)－甲醇(45∶55)作為流動相，得到的峰形不好且理論板數差。采用乙腈－四氫呋喃－冰醋酸－水(20∶5∶5∶70)作為流動相，得到的峰形好且理論板數高。

試驗過程中使用了美國Phenomenex C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)、大連依利特 YWGC18柱(150 mm × 4.6 mm，5 μm)、江蘇漢邦科技 Kromasil C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)，按擬訂方法進行含量測定，結果各組分之間的分離度均大于1.5，表明該方法耐用性良好。試驗中將該方法與原標準分析方法比較，結果近似。由于采用該方法可以同時測定水楊酸和苯甲酸的含量，操作簡便，結果準確可靠，故可以作為復方水楊酸酊中水楊酸和苯甲酸含量的測定方法。

[1]WS－10001－(HD－1472)－2003，國家食品藥品監督管理局標準·化學藥品地標升國標(第十五冊)[S].

[2]齊臘梅.HPLC同時測定復方苯甲酸酊中的苯甲酸和水楊酸[J].華西藥學雜志，2008，23(60):716 －717.

[3]楊錫祥，宗 橋，韓 路，等.復方苯甲酸酊含量測定方法的改進[J].安徽醫藥，2007，11(9):799 －800.