全自動血型儀與手工試管法檢測血型的比較研究

田艷俠

北京市仁和醫院檢驗科，北京 102600

血型鑒定錯誤會使患者在輸血治療時產生嚴重的輸血反應或溶血現象，危及患者生命[1]。因此準確的血型鑒定是臨床用血安全的保障[2]。應用傳統的手工試管法檢測血型，檢測過程易于出現人為差錯和受到其他因素的干擾，并且無法進行批量檢測，操作較為費時[3]，結果不易觀測保存，不能夠滿足臨床大量用血需求。全自動血型儀彌補了傳統手工試管法檢測血型的不足，其優勢尤為突出。現將我院2009年1月～2011年12月1 861例患者應用全自動血型儀與手工試管法血型檢測的結果進行比較，現報道如下：

1 材料與方法

1.1 血液樣本

選取我院大量失血、貧血或低蛋白血癥、重癥感染、凝血異常、有輸血需求的患者1 861例，年齡13～78歲，用75%的酒精消毒左手無名指指腹，待干，根據手指表皮的厚度用自動采血筆以足夠深度刺入，自然流出足量血液并進行測定。所有患者均取血液樣本5mL加入乙二胺四乙酸二鈉鹽（EDTA-Na2）進行抗凝處理。用血量大時批量檢測，用血量小時單獨檢測。

1.2 試劑

抗-A、抗-B定型血清(長春博德生物公司生產)；抗D血清（ALBA clone公司生產）；標準A血球、B血球（北京金豪制藥有限公司生產）；所有試劑均在有效期內使用。

1.3 儀器設備

強生Auto Vue Imnova全自動血型儀 （美國強生公司生產）；LDZ5-2 醫用離心機 （北京京立離心機有限公司生產），10、40 μL 微量加樣槍各一只。

1.4 手工試管法

正定型：使用前血液樣本加入生理鹽水稀釋，自行配制5%的ABO細胞懸液，取20 μL紅細胞懸濁液，加入50 μL抗-A、抗-B、抗D血清，3 000 r/min離心5min。反定型：標準A血球、B血球加入50 μL樣本血漿，3 000 r/min離心5min。顯微鏡下肉眼觀測，有凝集效果的為反應陽性，呈散在游離狀態為反應陰性，判讀患者血型。

1.5 儀器法

樣本制備，正定型：抗-A、抗-B、抗D血清50 μL中加入20 μL 5%的紅細胞懸液；反定型：標準A血球、B血球加入50 μL 樣本血漿；Rh（D）血型測定：加入 50 μL 抗 D 試劑和5%紅細胞懸液20 μL。待檢樣本用振蕩儀震蕩30 s，20℃下孵育10 min后1 000 r/min離心1 min，紅細胞懸浮后靜止1 min,在Auto Vue Imnova全自動血型儀中加入待檢血液樣本和試劑，批量檢測血型，全自動血型儀自動生成檢測結果。若結果可疑[正反不符或Rh（D）陰性]，血液樣本送血型室，用血型血清進行復查[4-5]。

1.6 統計學方法

應用統計學軟件SPSS 18.0 對數值數據進行秩和檢驗，以P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 全自動血型儀與手工試管法定型結果比較

兩種方法血液樣本定型結果基本一致，組間差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。所有血型檢測正反不符及可疑樣本送實驗室進行進一步檢測，血清學方法復檢檢測結果，發現手工試管法判讀錯誤26例 （A型錯誤10例+B型錯誤3例+O型錯誤10例+AB型錯誤3例），3例可疑樣本復檢后證實一次判讀正確 （29例可疑樣本中經過復檢證實一次判讀正確3例），儀器法判讀錯誤或無法判讀者僅為4例（A型錯誤2例+B型錯誤2例），由加樣操作錯誤引起的患者血型檢測正反不符者9例；患者自身有嚴重溶血者2例，嚴重脂血者3例，檢測結果均呈現出假陰性；由紅細胞亞型引起的正反不符者9例(A2 型6例、A2B型3例)，由紅細胞上抗原較弱或血清中抗體較弱引起的正反不符者3例；孵育后患者冷凝消失者5例；Rh（D）陰性儀器法判讀，一例結果為1+，經實驗室復查證實為弱D型。

表1 兩種方法血液樣本定型結果比較（份）

2.2 全自動血型儀與手工試管法檢測結果準確性比較

試管法與儀器法檢測血液樣本，其檢測結果判讀正確率比較差異無統計學意義（P＞0.05），兩種方法在血型鑒定方面均較為可靠，儀器法的誤定率則更低，僅為0.21%。見表2。

表2 兩種方法血液樣本檢測結果準確性比較

3 討論

血型系統主要是指由紅細胞表面抗原所決定的血液抗原類型，包括ABO血型系統、MN血型系統及Rh血型系統等。臨床上重要的血型檢測主要針對的是ABO及Rh血型系統，ABO血型系統的判讀依據是紅細胞表面血型抗原和血清中所含抗體常分為四個類型：A型血者是指紅細胞上有A抗原，血清中有抗B抗體；B型血者是指紅細胞上有B抗原，血清中有抗A抗體；而AB型血者是指紅細胞上有A、B抗原，血清中無抗A、抗B抗體；紅細胞上既無A抗原也無B抗原，只有H抗原，血清中有既有抗A抗體又有抗B抗體的者為O型血，并且ABO血型系統分別由其各自的亞型，如A1、A2、B1 等亞型。Rh（D）血型則依據的是紅細胞表面的D抗原，紅細胞上有D抗原，并且可與抗D血清發生凝集者，稱為Rh（D）陽性，反之成為陰性；同時Rh（D）血型系統還含有弱D和不完全D抗原，接受正常D陽性紅細胞仍有可能產生抗D反應，因此臨床上常將其作為陽性對待，如果Rh(D)陰性的受血者接受了Rh（D）陽性者血液后，可產生免疫性抗體，如再次輸受Rh陽性血液時，可發生溶血性輸血反應。ABO血型檢測常用紅細胞凝集試驗，通過正定型（細胞試驗）、反定型（血清試驗）鑒定ABO血型，通過兩次檢測判讀用血者血型有效地降低了誤判率。傳統手工試管法與全自動血液儀的操作原理均為采用凝集實驗檢測用血者血型，強生Auto Vue Imnova全自動血型儀主要是應用玻璃珠凝集技術，將紅細胞定量加于凝柱頂端與試劑發生反應，未凝集的紅細胞在離心力的作用下通過玻璃珠到達底端，為反應陰性，而凝集的紅細胞懸浮于玻璃珠頂端，為反應陽性。

本研究中分別應用全自動血型儀及傳統手工試管法檢測了1 861例患者的血液樣本，并且對其結果進行比較分析，兩種方法檢測結果雖差異無統計學意義（P＞0.05），儀器法檢測結果準確率更高，為99.7%，這與鄧曦[6]的研究結果一致，但仍存在判讀錯誤的情況，其誤定率為0.21%。由于患者血型錯誤輸血所產生的危害是致命的，應有效改進用血者血型判讀方法，保證判讀正確率。紅細胞懸液過濃或過淡引起的抗原抗體比例不適當，反應不明顯，易于誤判為陰性反應[7]。Filipowicz等[8]認為稀釋后待檢者紅細胞懸液的濃度為3%～5%時，紅細胞濃度較為合適。本研究中紅細胞懸液的濃度取其高值為5%，但仍有3例患者顯現出紅細胞上抗原較弱或血清中抗體較弱的現象，參考患者病歷時發現該3例患者年齡均在70歲以上，筆者認為其原因應為老年人血清中抗體水平大幅度下降所致，排除患者自身因素，全自動血型儀檢測血型的優勢尤為突出。研究結果顯示加樣錯誤會引致用血者血型鑒定錯誤，何永勛等[9]認為，全自動加樣儀能有效防止人工加樣造成的錯誤，并且應用傳統手工試管法易于出現筆誤、試管標識錯誤等非技術性原因造成的血型判讀錯誤。并且血型儀對于患者紅細胞表面抗原亞型鑒定更有優勢，手工試管法將A2 亞型6例誤判為O型，A2B型3例誤判為B型，而血型儀全部判讀正確；兩種方法對于Rh（D）血型的鑒定結果一致，儀器法判讀出1例弱D用血者，符合率為100%，以往的血液檢測常用傳統手工試管法，該方法是交叉配血試驗中最基礎的實驗方法之一，具有一定的準確性和可靠性，但結果主要是以肉眼或顯微鏡下觀測獲得，受觀測者主觀因素及環境因素影響較大，且結果不易判讀，待檢樣本含量大時，耗時長，常滿足不了臨床用血需求。而全自動血型儀檢測過程完全自動化，操作流程簡單、檢測過程易于標準化，避免了人為因素的誤差；并且血型儀有拍照功能，可直觀的保存檢測結果。

綜上所述，儀器檢測血型速度快，使用該儀器后，不僅提高了工作效率，檢測的靈敏度和準確性同樣有所提高；同時血型微量化檢測具有節約大量昂貴抗血清的功能。筆者認為應用全自動血型儀進行臨床血型判讀，并且在加樣時應用全自動加樣儀能有效地提高臨床輸血安全，適宜加大推廣力度。

[1] Neasham D，Sifi A，Nielsen KR，et al.Occupation and risk of lymphoma： a multicentre prospective cohort study （EPIC） [J].Occup Environ Med，2011 Jan，68（1）：77-81.

[2] 林武存，趙樹銘.應用輸血新技術提高輸血安全性[J].重慶醫學，2007，3（24）：2471-2472.

[3]Díaz FB，Pérez Benavente MA，Cabrera-Diaz S，et al.Change in clinical management of sentinel lymph node location in early stage cervical cancer： the role of SPECT/CT[J].Gynecol Oncol，2011，120（3）：353-357.

[4] 馬貴明，費榮.POSEIDON數字血型儀在ABO正反定型及Rh（D）不規則抗體篩選中的應用[J].臨床血液學雜志，2007，4（2）：58-59.

[5] 高峰.輸血與輸血技術[M].北京：人民衛生出版社，2003：90-95.

[6] 鄧曦.全自動血型檢測系統在ABO血型定型中的應用[J].臨床血液學雜志，2010，23（4）：235-236.

[7] 董立君.批量檢測ABO血型錯檢原因分析[J].海南醫學院學報，2011，17（12）：1721-1722，1725.

[8] Filipowicz EA，Ventura KC，Pou AM，et al.FNAC in the diagnosis of recurrent dermatofibrosarcoma protuberans of the forehead：a case report[J].Acta Cytol，1999，43（6）：1177-1180.

[9] 何永勛，李國美，張利華，等.微量ABO反定型手工與全自動加樣掃描結果的對比分析[J].臨床輸血與檢驗，2003，5（1）：61.