NO、TNF-α、IL-6、IL-8檢測技術在腦卒中的應用

段利利 荊曰松

2009年2月～2012年4月，作者觀察了45例急性腦卒中患者血清NO和炎性細胞因子(TNFα、IL-6、IL-8)含量，探討它們的變化與預后的關系。

1 臨床資料

1.1 研究對象

2009年2月～2012年4月收治的各類腦卒中患者45例，男27例，女18例，平均年齡60.41±15歲。其中腦出血23例，腦梗塞12例，腦蛛網膜下腔出血 10例。于發病 1～72h(平均 19.26±18.04h)采血并分離血清，-20℃冰箱保存待測。正常對照組16例，男9例，女7例，平均年齡53±16歲。

1.2 NO測定

1.3 細胞因子測定

采用生物素鏈親和素ELISA方法檢測，以ng/L表示。TNFα標準品為Sigma產品，IL-6、IL-8按照試劑盒的要求進行。

1.4 統計學方法

2 結果

不論卒中性質及類型，全部患者血清NO均低于對照組，有統計學意義，并且隨腦出血容積的增加而遞減。腦梗塞及腦出血≤20ml組TNF-α有增高趨勢(P＞0.05)，其它各組均顯著增高(P＜0.05或0.01)。全部患者IL-6及IL-8含量一致性增高(見表1)。

表1 腦卒中急性期血清NO和細胞因子含量

急性出血性腦卒中GCS≤8分組，IL-6、IL-8及血WBC計數顯著高于GCS＞8分組(P＜0.01)，前者死亡率為64%，后者死亡率為3%(見表2)。

表2 急性出血性腦卒中GCS與血清細胞因子關系

3 討論

本組病例顯示，不論卒中性質，NO的血清含量均低于對照組，組間無顯著差異，其原因一是腦出血及腦梗塞有相似的腦血管病危險因素。多數研究報道，內皮衍生的舒張因子隨年齡而減少，由于血管細胞因氧化應激加甚而不能正常地釋放血管活性物質，與NO釋放和內皮NOS基因表達減少有關。二是有共同的缺血性腦損害的發病機制。腦出血時半暗帶神經細胞的功能除受大塊血腫的機械性影響外，還受衍生的血紅蛋白(Hb)代謝產物的影響，Hb直接與NO結合以及通過激活過氧化物的產生使NO滅活。出血引起的腦缺血體積可以超過血腫體積的幾倍，血腫直接壓迫、血液中血管收縮物質誘發缺血的參與，使得出血初期發生的局部缺血成為不可逆。三是發病多為老年人，平時即可能處于潛在的腦缺血缺氧狀態，當血管突然閉塞或破裂的應激狀態時，這些區域氧的供給進一步大幅度減少，腦血流下降→L-精氨酸缺乏或NOS活性降低→NO合成不足；在這個過程中，過多氧自由基產生，超氧陰離子與NO反應生成過氧亞硝酸陰離子(ONOO-)，明顯縮短了NO的半衰期，加速了NO的分解。

適量產生的NO可以滿足生理功能需要，但當產生過多或過少都將導致腦組織的病理性損傷。研究表明，最初2～3min腦內NO含量開始上升，6min穩定增高，1h后降至對照組水平以下，1h再灌注后NO含量緩慢上升。在腦出血或腦梗塞的患者中血清NO含量減少，腦脊液中含量可高于正常。腦卒中TNF-α、IL-6、IL-8和白細胞激活過程都是增強的，其原因與出血時伴隨的神經組織缺血和炎癥過程有關。在缺血—炎癥/免疫反應—血栓或出血發生—再缺血的病理環路中，TNF-α可能具有關鍵作用(如增強粘附因子表達，激活中性粒細胞和內皮細胞，改變星形膠質細胞谷氨酸的攝取和代謝等)，但并不一定是直接損傷作用，而是通過促進其它組織因子的生成和釋放，增強其對缺血性神經組織的損傷作用而實現的。

本文資料顯示TNF-α的增高伴隨有IL-6及IL-8的增高，且以后者增高更明顯。但在 GCS＞8分及GCS≤8分組并未觀察到TNFα含量有統計學差異，因此 TNFα的變化并不能作為病情嚴重程度的敏感指標。IL-6與IL-1、TNF-α同屬介導天然免疫應答的細胞因子或炎癥因子，和IL-1有相似作用(如發熱、誘導急性相蛋白合成、激活垂體-腎上腺皮質軸等)，但IL-6也能抑制IL-1的合成，刺激產生內源性IL-1受體拮抗劑，下調NMDA受體活性，在中樞神經系統內被認為具有神經保護作用。在腦梗塞及不同類型的出血性卒中均可發現血中IL-6含量顯著增高，不同GCS評分差異顯著(P＜0.01)，提示了病情的嚴重程度，表明細胞因子的過量產生形成的病理性網絡作用參與了繼發性腦損害。IL-8是重要的中性粒細胞(PMN)趨化因子。研究認為 IL-8的存在位置以及與受體結合狀態決定IL-8在炎癥中的作用。血管外的IL-8通過WBC表面IL-8受體趨化PMN，而血液中游離的IL-8則抑制PMN粘附游走，結合于內皮細胞表面的IL-8同樣發揮促進PMN粘附、滲出效應。IL-8不僅具有強烈的化學趨化作用，而且具有活化中性粒細胞NADPH-氧化酶和磷酯酶A2的功能，前者活性增強引起“呼吸爆發”，釋放大量氧自由基，后者破壞膜結構，其降解產物的瀑布效應使組織損傷迅速而嚴重。這種結局在腦卒中的實驗研究中已得到充分驗證。在本文中同樣發現在GCS≤8分組，IL-8及血白細胞計數都顯著高于 GCS＞8分組(P＜0.01)，并且存在截然不同的死亡率。因此我們認為炎性細胞因子和血白細胞的早期同步增高提示預后不佳。

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