下呼吸道感染患兒金黃色葡萄球菌耐藥性分析

黃育敏，涂志華

（海南省婦幼保健院檢驗中心，海南海口570206）

下呼吸道感染患兒金黃色葡萄球菌耐藥性分析

黃育敏，涂志華

（海南省婦幼保健院檢驗中心，海南?？?70206）

目的了解下呼吸道感染患兒金黃色葡萄球菌（SAU）的耐藥特性，為臨床抗生素使用提供依據。方法用VITEK-32對SAU進行鑒定，采用K-B法進行藥敏試驗及D-試驗。結果127株金黃色葡萄球菌中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）分離率為32.3%（41/127），MRSA的耐藥率高于甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌(MSSA)。MRSA對常用β-內酰胺類抗菌藥有極高耐藥率（95.1%～100%），對常用大環內脂類抗菌藥有高耐藥率（80.5%～90.3%），對呋喃妥因的耐藥率較低（17.0%）；MSSA對青霉素、復方新諾明、阿莫西林/克拉維酸耐藥率極高（分別為90.7%、59.3%、46.5%），對苯唑西林、頭孢西丁敏感率為100%，對大環內酯類抗菌藥的耐藥率高于β-內酰胺類抗菌藥，MRSA和MSSA對利奈唑胺、萬古霉素敏感率均為100%。結論SAU對常用抗生素的耐藥性已經很嚴重，必須加強對細菌耐藥性的監測與控制，以延緩細菌耐藥性增長趨勢。

金黃色葡萄球菌；耐藥性；MRSA

下呼吸道感染是臨床最常見的感染性疾病之一，金黃色葡萄球菌（Staphylococcus Aureus，SAU）是下呼吸道感染的重要病原菌。近年來隨著廣譜、高效抗生素的大量使用，金黃色葡萄球菌的耐藥性發生了很大的變化，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（Meticillin-resistant S.aureus，MRSA）于1961年首次被發現后，其檢出率逐年上升[1]，因其多重耐藥，已成為臨床抗感染化療的難題之一[2]。了解本地區兒童感染SAU對常用抗菌藥物的耐藥情況具有重要的參考意義，為此對海南省婦幼保健院兒科2011年下呼吸道感染患兒痰標本分離出的127株金黃色葡萄球菌的耐藥性進行回顧性分析，以期為臨床更有針對性地選擇抗菌藥物提供參考和幫助。

1 材料與方法

1.1 菌株來源2011年1～12月，海南省婦幼保健院兒科送檢的下呼吸道感染患兒痰標本中分離出的127株SAU。

1.2 藥敏紙片青霉素、苯唑西林、頭孢西丁、阿莫西林/克拉維酸、頭孢呋辛、拉氧頭孢、頭孢唑林、阿奇霉素、紅霉素、克林霉素、復方新諾明、莫西沙星、左氧氟沙星、呋喃妥、因萬古霉素、利奈唑胺等抗生素紙片購自英國Oxoid公司。

1.3 儀器與試劑VITEK-32鑒定儀、GPI鑒定卡購自法國生物梅里埃公司。血瓊脂平板培養基、M-H藥敏平板購自安圖公司。

1.4 菌株鑒定嚴格按照《全國臨床檢驗操作規程》第三版相關規程分離培養和常規鑒定。送檢痰標本先做涂片檢查，合格的痰標本接種于血瓊脂平板，35℃培養約24 h。可疑菌落進行分純，革蘭染色、觸酶試驗、血漿凝固酶試驗做初步鑒定試驗，純化后的菌落用GPI鑒定卡在VITEK-32鑒定儀上進行菌株鑒定。

1.5 藥敏試驗采用K-B紙片擴散法。將純化后的待檢驗菌用0.85%鹽水調至0.5麥氏濃度，均勻涂布于M-H藥敏平板上，貼上藥敏紙片，35℃下培養16～18 h，操做過程中用標準菌株進行平行測驗，按照CLSI 2008 M100-S18相關標準判斷。對頭孢西丁耐藥菌株判斷為MRSA。質控菌株金黃色葡萄球菌ATCC 25923購自杭州天和有限公司。

1.6 誘導型克林霉素耐藥檢測(D-試驗)采用雙紙片擴散法。在M-H瓊脂平板上均勻涂布待檢菌液后，貼上紅霉素紙片(15μg)和克林霉素紙片(2μg)，兩紙片中心相距15 mm，35℃孵育16～18 h，觀察靠近紅霉素紙片一側的克林霉素抑菌環有無截平現象，即D型環形成，有D型環者為試驗陽性，無D型環者為陰性。

2 結果

2.1 MRSA和MSSA耐藥情況在127株金黃色葡萄球菌中檢出MRSA 41株(32.3%)、甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌(meticillin-sensitive S.aureus，MSSA)86株（67.7%）。MRSA對β-內酰胺類抗菌藥青霉素、苯唑西林、頭孢西丁、阿莫西林/克拉維酸、頭孢呋辛、拉氧頭孢、頭孢唑林嚴重耐藥，耐藥率除了苯唑西林95.1%外，其余均為100%。對大環內脂類阿奇霉素、紅霉素、克林霉素、磺胺類復方新諾明、氟喹諾酮類莫西沙星、左氧氟沙星耐藥率也很高，分別為90.3%、90.3%、80.5%、75.6%、73.2%、43.9%。而MSSA對青霉素、阿莫西林/克拉維酸、復方新諾明的耐藥率很高，分別為90.7%、46.5%、59.3%，但對β-內酰胺類抗菌藥苯唑西林、頭孢西丁完全敏感，整體上對大環內脂類耐藥率高于β-內酰胺類。41株MRSA和86株MSSA對糖肽類抗菌藥萬古霉素、噁唑環酮類抗菌藥利奈唑胺均敏感，其耐藥性見表1。

表1 金黃色葡萄球菌對常用抗菌藥物的耐藥率(%)

2.2 頭孢西丁紙片擴散法和苯唑西林紙片擴散法的比較41株頭孢西丁耐藥的菌株中，對苯唑西林耐藥39株，敏感2株，苯唑西林紙片擴散法漏檢率為4.9%（2/41）。

2.3 D-試驗結果127株菌株中D-試驗檢測陽性的12例，檢出率為9.4%(12/127)。

3 討論

呼吸系統是SAU檢出的常見部位，嬰幼兒免疫系統尚未發育成熟，機體抵抗力較低，對廣泛存在于日常生活環境中的SAU屏障作用不強，因而常罹患SAU感染導致的呼吸系統疾病。

2004年CLSI推薦用頭孢西丁紙片擴散法檢測MRSA[3]，優于苯唑西林紙片擴散法。本組資料顯示，41株頭孢西丁耐藥的菌株中，對苯唑西林耐藥39株，敏感2株，若用苯唑西林紙片擴散法，則會有4.9%（2/41）的漏檢率。鑒于目前SAU耐藥率日趨增強，臨床實驗室應加強藥敏試驗方法學比較等方面的質量控制。

本組資料顯示，MRSA檢出率32.3%（41/127），接近黃慶梅等的試驗數據（37.3%）[4]，但低于任保艷等及張忠等的數據（分別為65.9%、69.6%）[5-6]，原因可能是標本來源、患者年齡、既往使用抗菌藥物使用量及次數不同。從表1可以看出，MRSA對多種抗菌藥物高耐藥，耐藥率明顯高于MSSA，表現出多重耐藥、交叉耐藥的特性。MRSA對β-內酰胺類抗菌藥耐藥率除苯唑西林95.1%外，其余均為100%，此類抗菌藥對其基本無效。隨著大環內酰類抗菌藥的廣泛使用，MRSA對此類抗菌藥的耐藥性也在增強，本文藥敏試驗結果顯示MRSA對阿奇霉素、紅霉素、克林霉素耐藥率達到80.5%以上。

MRSA對紅霉素耐藥而克林霉素敏感時，克林霉素有可能存在誘導型耐藥，必須進行D-試驗才能檢測出來。我們的D-試驗結果顯示陽性12株，即對克林霉素誘導型耐藥的SAU檢出率9.4%。因此在藥敏試驗中，應同時做D-試驗，從而排除克林霉素誘導型耐藥引起的臨床治療失敗。

本組藥敏試驗MRSA與MSSA均未檢出對利奈唑胺和萬古霉素耐藥的菌株。利奈唑胺耐藥的葡萄球菌盡管非常罕見,但國外已有報道[7-8]，因此繼續監測兩者的耐藥性還是很有必要的。

綜上所述，SAU對常用抗菌藥的耐藥性已相當嚴重，我們應加強醫護人員對MRSA的認識，合理使用抗菌藥，建立和完善多藥耐藥菌株的監測。特別在兒科，因嬰幼兒免疫力較低，是SAU易感人群，更應積極采取預防措施，建立完善的隔離制度，防止SAU尤其是MRSA的感染、傳播，延緩耐藥菌株的產生。

[1]Purcell K,Fergie J.Epidemic of community-acquired methicillin-resistant staphylococcus aureus infections：A 14-year study at driscoll children's hospital[J].Arch Pediatr Adolesc Med,2005,159(10)：980-985.

[2]Rehm SJ,Tice A.Staphylococcus aureus：methicillin-susceptible s. aureus to methicillin-resistant s.aureus and vancomycin-resistant s. aureus[J].Clin Infect Dis,2010,51(2)：176-182.

[3]Clinical and Laboratory Standards Institute.Performance Standards forAntimicrobial Susceptibility Testing[S].Eighteenth Informational Supplement,2009,29(3)：10-18.

[4]黃慶梅,零培長.415株金黃色葡萄球菌的耐藥性分析[J].醫學動物防治,2011,7(27)：628.

[5]任保艷,張海莎.132株金黃色葡萄球菌感染耐藥情況分析[J].社區醫學雜志,2011,4(9)：72-73.

[6]張忠,黎素琴,谷忠茨.145株金黃色葡萄球菌的耐藥性分析[J].中國現代醫生,2011,11(49))：113-114.

[7]Meka VG,Pillai SK,Sakoulas G,et al.Linezolid resistance in equential Staphylococcus aureus isolates associated with a T2500A mutation in the 23S rRNA gene and loss of a single copy of rRNA [J].J Infect Dis,2004,190(2)：311-317.

[8]Weigel LM,Donlan RM,Shin DH,et al.High-level vancomycin-resistant Staphylococcus aureus isolates associated with a polymicrobial biofilm[J].AntimicrobAgents Chemother,2007,51(1)：231-238.

Analysis on antimicrobial resistance of Staphylococcus Aureus in children with lower respiratory tract infection.

HUANG Yu-min,TU Zhi-hua.Department of Clinical Laboratory,Hainan Provincial Maternity and Infant HealthHospital,Haikou 570206,Hainan,CHINA

ObjectiveTo investigate the antimicrobial resistance of Staphylococcus aureus(SAU)in children with lower respiratory tract infection(LRTI),and to provide guidance for the reasonable use of antibiotics. MethodsThe bacterial identification of SAU was performed on VITEK-32,and the drug sensitivity testing and D testing were performed by K-B method.ResultsOf 127 strains of SAU,the detection rate of methicillin-resistant S. aureus(MRSA)was 32.3%(41/127).The antimicrobial resistance rate of MRSAwas higher than that of meticillin-sensitive S.aureus(MSSA).The antimicrobial resistance rate of MRSA was 95.1%～100%to β-lactam antibiotics,80.5%～90.2%to macrolide antibiotics,and 17.0%to Nitrofurantoin.MSSA was highly resistant to Penicillin,Sulfamethoxazole Compound,and Amoxicillin/Clavulanic Acid,with the antimicrobial resistance rates of 90.7%,56.3%and 46.5% respectively.The antimicrobial sensitive rates of MSSA to Oxacillin and Cefoxitin were both 100%.ConclusionThe antimicrobial resistance of SAU is very serious.The monitoring and controlling of the antimicrobial resistance should be strengthen to slow down the increasing tendency of antimicrobial resistance rate.

Staphylococcus aureus;Antimicrobial resistanc;MRSA

R446.5

B

1003—6350（2012）22—101—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.22.042

2012-04-24）

黃育敏（1973—），女，廣東省廉江市人，主管技師。