HPV感染和臨床相關資料與舌根癌預后關系的初步研究

陳凱，周銀鳳，王玉棟，周折沖

（廣東藥學院附屬第一醫院口腔科，廣東廣州510080）

HPV感染和臨床相關資料與舌根癌預后關系的初步研究

陳凱，周銀鳳，王玉棟，周折沖

（廣東藥學院附屬第一醫院口腔科，廣東廣州510080）

目的評估HPV感染和臨床相關資料對舌根癌預后的影響。方法記錄56例舌根癌患者的相關臨床資料，包括診斷時年齡、性別、TNM分期、復發與否、治療方案和死亡原因，并對其中51例患者運用聚合酶鏈式反應（Polymerase chain reaction，PCR）檢測其HPV感染狀態，統計分析HPV感染和臨床相關資料與預后的關系。結果年齡越小則預示患者預后較好（P=0.015）。HPV陽性的腫瘤患者，其存活率有顯著變好的趨勢，但未能達到統計學意義（P=0.140）。此外，通過多元分析發現年齡（P=0.004）是獨立的預后影響因子。結論年齡在臨床上可用作評估舌根癌預后的指標。

舌根癌；年齡；人乳頭瘤病毒；預后因子

頭頸部腫瘤占所有腫瘤的3%～4%，其最主要危險因素是飲酒和吸煙[1-2]。2007年國際癌癥研究署（International Agency on Research for Cancer，IARC）提出人乳頭瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）也是口咽部鱗狀細胞癌的一個重要危險因素[3]。在許多國家，口咽部腫瘤的發生率逐步上升[1，4-6]，但是吸煙率下降，故HPV感染增多被認為可能是導致該數據上升的原因[1，7]。同時較多證據顯示HPV是口咽癌陽性預后因子，HPV感染陽性的腫瘤患者，尤其是非吸煙患者，其生存率較HPV陰性的腫瘤患者高[7-8]。

舌根癌是口咽癌的主要組成部分，且和HPV感染密切相關。近年來，對口咽癌的治療已經加強[7]。目前，患者多接受誘導化療或加強高分次放療，且部分患者使用表皮生長因子受體（Epidermal growth factor receptor，EGFR）抑制劑，這些往往導致一些額外的副作用。為了明確哪些因素會影響舌根癌患者的預后，我們檢測了廣東藥學院附屬第一醫院和廣州醫學院附屬腫瘤醫院1985-2010年間舌根癌的發病率和HPV感染發生率，評估HPV感染狀態及臨床相關資料與生存率之間的相關性。

1 資料與方法

1.1 病例選擇1985-2010年間，廣東藥學院附屬第一醫院和廣州醫學院附屬腫瘤醫院有65例患者被診斷患有舌根部鱗狀細胞癌。本研究已經通過了廣東藥學院附屬第一醫院倫理委員會認證，5例患者不愿意參加本實驗，其他患者均簽署了知情同意書。對患者進行進一步追蹤，由一名資深病理醫生進行再次診斷，其中4例患者被排除，最終有56例患者納入實驗。

1.2 臨床相關資料采集對最終納入實驗的56例患者記錄其臨床相關資料，內容包括診斷時年齡、性別、TNM分期、復發與否、治療方案和死亡原因，見表1。56例患者中53例接受了放療預治療，并進行了存活率分析，2例患者僅接受姑息治療，1例患者未采集到有效數據。

1.3 檢測HPV的DNA水平由于受到采集石蠟標本的限制，僅對51例患者運用聚合酶鏈式反應（PCR）檢測HPV的DNA水平。從3片10 μm石蠟包埋的標本中提取DNA。使用PCR方法檢測HPV的DNA水平，采用的引物是通用引物Gp5+/6+[9]和CpI/IIG[10]，目的區域分別是基因序列中的L1和E1區。這種方法幾乎可以檢測出口咽部和頸部癌癥中所有的HPV類型[11]。所有的HPV陰性樣本也同樣進行PCR及DNA擴增[12]。

1.4 統計學方法變量間的關聯性運用卡方檢驗或者是Fisher's exact test進行檢測。所有臨床相關資料和HPV狀態與預后的關系用Kaplan-Meier plot和時序檢驗進行分析。HPV感染狀態和被認為可能影響生存率的因子如年齡、TNM分期、分化的水平、性別等分別進行單因素分析后再進行多元分析，以評估對死亡率風險的影響。使用SPSS13.0漢化版軟件，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患者及其腫瘤臨床表現特性圖1顯示的是1985-2010年每5年為一個單位的舌根癌患者的數據，可以觀察到舌根癌患者的數量呈現逐年上升的趨勢。表1顯示56例患者及其腫瘤的特性，但是并未獲得可靠的吸煙習慣的數據。隨訪時間中位數為28個月（0～121個月），未死亡患者隨訪時間中位數為68個月（2～121個月）。通過單因素分析顯示年齡越年輕（P=0.015）則預示患者預后較好（表2）。通過多元分析發現年齡是一個影響預后的因素（表3）。以下因素通過單變量和多元分析均顯示在生存率上差異無統計學意義，包括有分化程度、TNM分期和性別（表2、表3）。

圖1 1985-2010年間舌根癌患者的數量

2.2 HPV狀態及與臨床表現及預后的關系對56例腫瘤標本中的51例標本進行HPV狀態分析，總共有29例（56.86%）為HPV陽性，其中包括HPV類型12種；22例（43.14%）為HPV陰性。HPV陽性患者29例，其中男性19例，女性10例，年齡34～52歲，平均43歲。隨著舌根癌患者數量逐年增多，HPV陽性檢出率也明顯上升，可以從1985-1999年21例患者確診與2000-2010年30例患者確診對比得知（P=0.009，圖2）。另外HPV陽性的舌根癌患者(年齡中位數為44歲)較HPV陰性的舌根癌患者(年齡中位數為63歲)明顯年輕，且差異有統計學意義（P=0.039，Mann-Whitney檢驗）。對51例患者中的48例患者進行存活率分析，其中排除了接受姑息療的患者（n=2）和治療數據未采集到的患者（n=1）（表1）。結果顯示HPV陽性的腫瘤患者與其疾病相關的存活率較好有顯著趨勢，但是未達到統計學意義（P=0.14，表2）。

表1 56例患者及其腫瘤臨床表現特性

表2 單因素分析結果

表3 多元分析結果

圖2 舌根癌患者HPV檢測狀況

3 討論

本研究顯示從1985年到2010年廣東藥學院附屬第一醫院和廣州醫學院附屬腫瘤醫院舌根癌的發病率逐年上升，同時HPV陽性的患者也逐年增多。且通過PCR分析HPV感染狀態可以推測其可能是舌根癌患者的一個預后影響因子。HPV狀態顯示其具有成為一個陽性預后因子的趨勢，但可能由于本研究病例數的限制，未能達到統計學上的顯著差異。

對于廣州市地區，之前未見舌根癌的發病率上升和HPV感染陽性發生率上升的相關報道，但是在我國其他地區及其他國家已有相關報道[13-14]。這也說明了對于這個逐漸增多的患者人群，尋找到能對日后的個性化治療有利的預測預后因子是非常有必要的。

本實驗發現年齡因素與預后密切相關，且呈獨立相關，正如期望，年輕患者的臨床預后較好[15]。另外HPV陽性的舌根癌患者的年齡中位數較HPV陰性舌根癌患者的年齡中位數明顯較小，差異有統計學意義，與之前的臨床報道相一致[13]。

當將HPV感染狀態和其他臨床相關資料如診斷時年齡、TNM分期、分化程度和性別進行多元分析時，年齡仍然是一個強的顯著預后影響因子，這就說明年齡可能不依賴其他因素，是一個獨立的預后影響因子。因此本研究推測診斷時年齡可評估舌根癌患者的預后。在后期的研究中，將納入更多的患者，并分析不同的治療方法等因素，以分析這些因素是否具有評估舌根癌患者預后的價值。

本研究的一個局限是樣本量不足，這也可能是HPV感染狀態并未在統計學意義上認定為顯著預后影響因子的原因。但是HPV感染狀態作為一種趨勢，這與之前的報道一致。在后期的研究中，還可以對腫瘤標記物如CD44、p16、EGFR、血管內皮生長因子、上皮鈣粘蛋白、環氧化酶-2（COX-2）、Ki-67、p27等在治療后的表達水平與預后之間的關系進行分析，尋找可能影響預后的因子，以指導臨床上對舌根癌患者預后的評估。

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Correlation of HPV infection and related clinical data with the prognosis of tongue base carcinoma.

CHEN Kai, ZHOU Yin-feng,WANG Yu-dong,ZHOU Zhe-chong.Department of Stomatology,the First Affiliated Hospital of Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou 510080,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo study the correlation of HPV and related clinical data with the prognosis of tongue base carcinoma.MethodsThe clinical data was collected from 56 patients of tongue base carcinoma,including age at diagnosis,gender,TNM stage,relapse,treatment and cause of death.Fifty-one of the 56 patients were tested for HPV by polymerase chain reaction(PCR).The data were statistically analyzed.ResultsYounger patients were found to have better prognosis(P=0.015).Patients with HPV-positive were found to have a better disease-specific survival,but this did not reach statistical significance(P=0.140).Furthermore,multivariate analysis showed that age was the independent influence factor of the prognosis(P=0.004).ConclusionAge could be used as an independent factors in the evaluation of the prognosis.

Tongue base carcinoma;Age;Human papillomavirus;Prognostic factor

R739.86

A

1003—6350（2012）22—028—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.22.009

2012-06-25)

陳凱（1982—），男，廣東省廣州市人，住院醫師，本科。E-mail:chenkai198211@yahoo.cn