丁酸梭菌對蛋用仔公雞腸道菌群、形態結構及黏膜免疫相關細胞的影響

劉亭婷 滑 靜 王曉霞 劉莉如 海 鵬

(1.北京農學院動物科學技術學院，北京 102206;2.北京農學院生物技術學院，北京 102206;3.北京市昌平區區委，北京 102200;4.新疆農業大學動物科學學院，烏魯木齊 830052;5.遼寧阜新市動物衛生監督所，阜新 123000)

隨著畜牧業現代化的實現，健康養殖理念越來越多地受到關注，而健康養殖的關鍵就是腸道健康。長期以來，由于抗生素的添加使得畜禽維持短期的健康狀態，而這種健康是一種偽健康，不僅導致畜禽腸道有益菌被抑制，菌群平衡被破壞，而且畜禽經常反復接觸某種抗生素后會在體內產生抗藥性。當飼料中禁止添加抗生素時，如何維持或增強畜禽健康就成為目前研究的重點，尤其是畜禽早期的腸道健康。腸道健康是一門復雜的學科，涉及腸道微生物區系的平衡、宏觀和微觀結構的完整性和免疫系統的狀態等。丁酸梭菌是普遍存在于人和動物腸道內的一種益生菌，已有研究表明丁酸梭菌可以促進腸道有益菌群增殖，丁酸梭菌代謝可以產生丁酸，抑制腸道有害菌生長和繁殖，同時刺激黏膜免疫;丁酸梭菌還可以產生B族維生素、維生素K、葉酸和多種酶類物質等，對機體有重要的生理功能。目前，對該菌的研究主要集中在腹瀉、炎癥性腸病的防治與預防上，在動物尤其在蛋用仔公雞生產上應用的研究鮮有報道。本試驗在飼糧中添加丁酸梭菌，通過測定蛋用仔公雞腸道菌群、小腸黏膜結構及黏膜免疫相關細胞分布等來探討不同丁酸梭菌水平對蛋用仔公雞腸道健康的影響，為其在家禽生產中的應用提供試驗數據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

丁酸梭菌(批次號:S20110309)由浙江惠嘉生物科技有限公司提供，其中活菌數≥1.0×108CFU/g。

1.2 試驗設計

試驗采用單因子完全隨機區組設計，選用1日齡健康海蘭褐蛋用仔公雞240只，平均體重在(39.36 ±0.11)g，隨機分成 6 組，每組 4 個重復，每個重復10只雞，對照組飼喂基礎飼糧，抗生素組在基礎飼糧中添加150 mg/kg金霉素，試驗組飼糧分別在基礎飼糧中添加 250、500、750、1 000 mg/kg丁酸梭菌。試驗期為42d。試驗雞自由采食和飲水，按常規免疫程序免疫，定期清理打掃雞舍衛生并消毒。基礎飼糧是根據美國NRC(1994)推薦的營養需要配制的玉米－豆粕型基礎飼糧，其組成及營養水平見表1。

1.3 飼養管理

試驗雞采用3層籠養，自由采食和飲水，光照、溫度和濕度嚴格按照常規飼養管理要求進行，按照常規免疫程序進行免疫，并定期清掃雞舍和消毒保持雞舍清潔衛生。試驗期為42d。

1.4 檢測指標與方法

1.4.1 腸道菌群

試驗雞于試驗的第42天，每個重復隨機取1只體重接近平均體重、健康狀況較好的蛋用仔公雞屠宰，無菌條件下取盲腸腸段用棉線將其兩端結扎，紗布包好，于－80℃速凍以備大腸桿菌、乳桿菌和雙歧桿菌數量的測定，結果用1 g腸道內容物中細菌數量的對數［lg(CFU/g)］表示。

1.4.2 小腸黏膜形態結構

于試驗的第42天，每個重復隨機取1只體重接近平均體重、健康狀況較好的蛋用仔公雞屠宰，切取十二指腸、空腸和回腸中段各2 cm組織樣，生理鹽水沖洗干凈，分別置于4%多聚甲醛磷酸緩沖液(pH 7.4)和戊二醛磷酸緩沖液(0.1 mol/L，pH 7.4)中，固定48 h。其中多聚甲醛固定的部分腸段常規酒精脫水、石蠟包埋、切片厚5 μm、蘇木精－伊紅(HE)染色。應用BX51病理圖像分析處理系統，每個腸段取5張不連續切片，每張切片選取5個最長腸絨毛測量絨毛的高度、相鄰絨毛的隱窩深度及相應黏膜厚度，并計算絨毛高度/隱窩深度(V/C)值，各指標取平均值作為測定數據。戊二醛緩沖液固定的腸段用來做掃描電鏡切片，掃描電鏡觀測腸黏膜表面腸絨毛的變化情況。

表1 基礎飼糧組成及營養水平(風干基礎)Table 1 Composition and nutrient levels of the basaldiet(air-dry basis) %

1.4.3 小腸黏膜免疫相關細胞數量分布

1.4.3.1 上皮內淋巴細胞

石蠟切片進行常規HE染色后，光鏡下可觀察上皮內淋巴細胞形態分布。小腸各腸段分別取5張切片，每張切片選取5個最長腸絨毛，統計腸絨毛相同部位單位(相同)面積視野內上皮內淋巴細胞的數量。

1.4.3.2 杯狀細胞

部分十二指腸、空腸和回腸的切片進行糖原及多糖高碘酸－Schiff氏液(PAS)染色，可顯示小腸上皮杯狀細胞。應用光學顯微鏡觀察，每個腸段取5張切片，每張切片選取5個最長腸絨毛，統計單個絨毛相同部位單位面積視野內杯狀細胞的數量及變化，各指標取平均值作為測定數據。

1.4.3.3 免疫球蛋白A(IgA)陽性物質

小腸的切片按常規免疫組織化學抗生蛋白鏈菌素生物素復合體法(SABC)染色。石蠟切片常規脫蠟至水，用3%H2O2封閉內源性酶10 min和5%牛血清白蛋白(BSA)封閉液室溫下作用20 min后，滴加羊抗雞 IgA 單抗(1∶500倍稀釋)，4℃過夜;磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌后，加生物素標記兔抗羊免疫球蛋白G(IgG)二抗，室溫下20 min;PBS洗滌后，滴加鏈霉親和素－過氧化物酶復合物試劑，37℃ 20 min，增敏二氨基聯苯胺(DAB)顯色，脫水、透明、封片。陰性對照組染色用PBS代替一抗。光鏡下觀察IgA陽性物質的數量及分布，并應用BX51病理圖像分析處理系統統計小腸黏膜單位面積內IgA陽性物質的有效數量。

1.5 數據統計和處理

所有試驗數據均用Excel進行初步處理，應用SPSS 17.0軟件進行統計分析，用單因素方差分析(one-way ANOVA)比較各組間相關指標的差異，采用最小顯著級差法對差異顯著的數據進行多重比較。試驗數據均以平均值±標準誤表示。

2 結果

2.1 腸道菌群

試驗結束時，對蛋用仔公雞盲腸中幾項微生物指標的檢測結果如表2所示。由此可以看出，42日齡時，各試驗組蛋用仔公雞的盲腸內大腸桿菌數均小于對照組，其中750 mg/kg丁酸梭菌組與1 000 mg/kg丁酸梭菌組的盲腸內大腸桿菌數與對照組和抗生素組相比顯著降低(P＜0.05)，分別比對照組降低了11.70%、14.01%，分別比抗生素組降低了 9.23%、11.61%。42日齡時，除250 mg/kg丁酸梭菌組外，其他各試驗組盲腸內乳桿菌數量均顯著高于對照組和抗生素組(P＜0.05)，其中1 000 mg/kg丁酸梭菌組的盲腸內乳桿菌數量最高，分別比對照組和抗生素組增加了6.05%、2.15%。42日齡時，與對照組相比，各試驗組盲腸內雙歧桿菌數量隨丁酸梭菌添加量的增加而呈現增加的趨勢，但差異不顯著(P＞0.05)。

表2 丁酸梭菌對蛋用仔公雞盲腸菌群的影響Table 2 Effects of Clostridium butyricum on cecal flora of egg-laying male chicks lg(CFU/g)

2.2 小腸黏膜形態結構

2.2.1 小腸黏膜的光鏡觀察

經HE染色后，各組動物小腸腸壁層次分明，對照組的黏膜結構基本完整，偶見腸絨毛頂端脫落現象，有的絨毛較細，排列不緊密。與對照組相比，各試驗組和抗生素組蛋用仔公雞腸黏膜結構較為完整，層次分明，腸黏膜上皮表面的紋狀緣結構清晰，腸絨毛排列較緊密。各組的小腸黏膜上皮細胞輪廓清晰，排列緊密，染色鮮明。柱狀細胞呈高柱狀，單層排列，胞漿豐富，胞核橢圓形，位于細胞基部。杯狀細胞呈現高腳狀，分散在柱狀細胞之間，染色鮮明(圖1)。

2.2.2 小腸黏膜的掃描電鏡觀察

掃描電鏡觀察顯示，對照組的小腸黏膜表面腸絨毛結構較完整，但腸絨毛排列不整齊，絨毛之間間距大，絨毛呈葉片狀，絨毛頂端橢圓形，表面有長短不一、縱橫交錯的溝痕。而各試驗組的腸絨毛排列較整齊，與對照組相比較寬厚，腸絨毛密度大、間距較小，表面溝痕大部分與腸絨毛縱軸近似垂直，溝痕多且更加明顯，微絨毛紋狀緣排列緊密(圖2)。

圖1 對照組與1 000 mg/kg丁酸梭菌組空腸的黏膜結構Fig.1 Jejunum mucosal structure of control group and 1 000 mg/kg Clostridium butyricum group

圖2 1000 mg/kg丁酸梭菌組雞空腸黏膜絨毛形狀與對照組比較Fig.2 Comparison of mucosal villus shape of 1 000 mg/kg Clostridium butyricum group with that of control group

2.3 丁酸梭菌對小腸絨毛高度、V/C值、黏膜厚度和肌層厚度的影響

2.3.1 丁酸梭菌對十二指腸絨毛高度、V/C值、黏膜厚度和肌層厚度的影響

表3顯示丁酸梭菌對十二指腸絨毛高度、V/C值、黏膜厚度和肌層厚度的影響，從表中可以看出，750 mg/kg丁酸梭菌組和1 000mg/kg丁酸梭菌組十二指腸的絨毛高度顯著高于對照組和抗生素組(P＜0.05)，其中以750 mg/kg丁酸梭菌組最高，比對照組高了26.00%，比抗生素組高了7.86%，其次是1 000 mg/kg丁酸梭菌組，這2個試驗組之間差異不顯著(P＞0.05)。6個組中，V/C值最大的是1 000 mg/kg丁酸梭菌組，與除750 mg/kg丁酸梭菌組外的其他各組差異顯著(P＜0.05);250 mg/kg丁酸梭菌組和500 mg/kg丁酸梭菌組V/C值顯著高于對照組(P＜0.05)，但與抗生素組相比差異不顯著(P＞0.05)，這2組之間差異也不顯著(P＞0.05)。對照組的黏膜厚度的值最小，但僅與1 000mg/kg丁酸梭菌組相比差異顯著(P＜0.05)，其他各組之間差異不顯著(P＞0.05)。各組肌層厚度之間差異不顯著(P＞0.05)，但試驗組隨丁酸梭菌添加量的增加，基層厚度增加。

表3 丁酸梭菌對蛋用肉仔公雞十二指腸絨毛高度、V/C值、黏膜厚度和肌層厚度的影響Table 3 Effects of Clostridium butyricum on villus height，V/C value and thickness of mucosa and muscular layer ofduodenum of egg-laying male chicks

2.3.2 丁酸梭菌對空腸絨毛高度、V/C值、黏膜厚度和肌層厚度的影響

表4顯示丁酸梭菌對空腸絨毛高度、V/C值、黏膜厚度和肌層厚度的影響，從表中可以看出，各試驗組與抗生素組的空腸絨毛高度與對照組相比顯著增加(P＜0.05)，750 mg/kg丁酸梭菌組和1 000 mg/kg丁酸梭菌組與抗生素組相比差異顯著(P ＜0.05)，分別比抗生素組高了 11.97%、15.82%，這 2 組之間差異不顯著(P ＞0.05)。750 mg/kg丁酸梭菌組和1 000 mg/kg丁酸梭菌組的V/C值與對照組相比顯著增大(P＜0.05)，與抗生素組相比差異不顯著(P＞0.05)，除250 mg/kg丁酸梭菌組外，其他各試驗組之間V/C值差異不顯著(P＞0.05)。各試驗組的黏膜厚度均比對照組顯著增厚(P＜0.05)，其中黏膜厚度最大的是1 000mg/kg丁酸梭菌組，比對照組增加了27.90%。除250 mg/kg丁酸梭菌組外，其他各試驗組與抗生素組相比黏膜厚度也顯著增加(P＜0.05)。對于肌層厚度，各組之間差異不顯著(P＞0.05)。

表4 丁酸梭菌對蛋用肉仔公雞空腸絨毛高度、V/C值、黏膜厚度和肌層厚度的影響Table 4 Effects of Clostridium butyricum on villus height，V/C value and thickness of mucosa and muscular layer of jejunum of egg-laying male chicks

2.3.3 丁酸梭菌對回腸絨毛高度、V/C值、黏膜厚度和肌層厚度的影響

表5顯示丁酸梭菌對回腸絨毛高度、V/C值、黏膜厚度和肌層厚度的影響，從表中可以看出，750 mg/kg丁酸梭菌組和1 000 mg/kg丁酸梭菌組絨毛高度與對照組相比差異顯著，分別比對照組高了21.10%、20.79%(P ＜0.05);各試驗組與抗生素組相比差異不顯著(P＞0.05)，各試驗組之間差異不顯著(P＞0.05)。對于V/C值的比較，僅1 000 mg/kg丁酸梭菌組與對照組和抗生素組差異顯著(P＜0.05)，分別比對照組和抗生素組增加了40.43%和 33.12%;除 1 000 mg/kg丁酸梭菌組外，其他各試驗組之間差異不顯著(P＞0.05)。與對照組相比，500 mg/kg丁酸梭菌組和1 000 mg/kg丁酸梭菌組的黏膜厚度顯著增加(P＜0.05);各試驗組與抗生素組相比差異不顯著(P＞0.05)，各試驗組之間差異也不顯著(P＞0.05)。各組肌層厚度沒有顯著差異(P＞0.05)，但隨丁酸梭菌添加量的增加有增厚的趨勢。

表5 丁酸梭菌對蛋用肉仔公雞回腸絨毛高度、V/C值、黏膜厚度和肌層厚度的影響Table 5 Effects of Clostridium butyricum on villus height，V/C value and thickness of mucosa and muscular layer of ileum of egg-laying male chicks

2.4 黏膜免疫

2.4.1 丁酸梭菌對小腸上皮內淋巴細胞數量及分布的影響

經HE染色后，光鏡下觀察，上皮內淋巴細胞分散在小腸絨毛的上皮細胞之間，多位于上皮細胞基側膜附近，少數位于上皮核層和頂層，上皮內淋巴細胞以小型細胞為主，胞核大且呈圓形，深染，胞漿少。固有層內也有淋巴細胞分布。

圖3 1000 mg/kg丁酸梭菌組空腸上皮內淋巴細胞Fig.3 Intraepithelial lymphocyte in jejunum of 1 000 mg/kg Clostridium butyricum group

丁酸梭菌對小腸上皮內淋巴細胞數量的影響見表6，各組十二指腸上皮內淋巴細胞的數量差異不顯著(P＞0.05)。750 mg/kg丁酸梭菌組和1 000 mg/kg丁酸梭菌組空腸上皮內淋巴細胞的數量與對照組相比顯著增加(P＜0.05)，分別比對照組增加了24.05%、25.32%，與抗生素組相比無顯著差異(P＞0.05)，各試驗組之間也無顯著差異(P＞0.05)。試驗組中，750 mg/kg丁酸梭菌組和1 000 mg/kg丁酸梭菌組回腸上皮內淋巴細胞的數量與對照組相比顯著增加(P＜0.05)，分別比對照組增加了15.28%、15.44%，與抗生素組相比無顯著差異(P＞0.05)，各試驗組之間也無顯著差異(P＞0.05)。從表中還可看出，不同的腸段上皮內淋巴細胞的數量也有所不同，各組上皮內淋巴細胞數量由十二指腸向回腸逐漸減少。

2.4.2 丁酸梭菌對小腸杯狀細胞數量及分布的影響

經PAS染色后，杯狀細胞散在分布于上皮細胞間，高腳杯狀，頂部胞質為大量糖原顆粒擁塞而膨隆，底部纖細，有小而深染的不規則核與少量嗜堿性胞質。PAS染色呈桃紅色陽性反應。

表6 丁酸梭菌對蛋用仔公雞小腸中上皮內淋巴細胞數量變化的影響Table 6 Effects of Clostridium butyricum on the change of intraepithelial lymphocyte number in small intestine of egg-laying male chicks

圖4 1 000 mg/kg丁酸梭菌組空腸杯狀細胞Fig.4 Goblet cells in jejunum of 1 000 mg/kg Clostridium butyricum group

由表7可知，同一腸段但不同組間杯狀細胞數量分布有差異，試驗組中，750 mg/kg丁酸梭菌組和1 000 mg/kg丁酸梭菌組十二指腸杯狀細胞的數量與對照組相比顯著增加(P＜0.05)，均比對照組增加了45.90%，與抗生素組相比無顯著差異(P＞0.05)。各試驗組中，750 mg/kg丁酸梭菌組和1 000 mg/kg丁酸梭菌組十二指腸杯狀細胞數量最多，均比250 mg/kg丁酸梭菌組顯著增加(P＜0.05)，但這 2組之間差異不顯著(P＞0.05)。各試驗組中僅1 000 mg/kg丁酸梭菌組空腸杯狀細胞數量顯著高于對照組和抗生素組(P＜0.05)，分別比對照組和抗生素組高了30.61%、24.27%。750 mg/kg丁酸梭菌組和1 000 mg/kg丁酸梭菌組回腸杯狀細胞的數量與對照組相比顯著增加(P＜0.05)，分別比對照組高了33.64%、39.09%。1 000 mg/kg丁酸梭菌組回腸杯狀細胞的數量與抗生素組相比顯著增加(P＜0.05)，同時也顯著高于250 mg/kg丁酸梭菌組(P＜0.05)，除1 000 mg/kg丁酸梭菌組外，其他各試驗組之間差異不顯著(P＞0.05)。不同的腸段杯狀細胞的數量也有所不同，各組杯狀細胞數量由十二指腸向回腸逐漸增多。

2.4.3 丁酸梭菌對小腸黏膜IgA陽性物質有效數量及分布的影響

免疫組織化學染色的結果表明，IgA漿細胞分散于小腸絨毛固有層、腸腺周圍，IgA漿細胞呈圓形或橢圓形，細胞質呈陽性反應，為深棕色，細胞核呈陰性反應。IgA漿細胞向腸腔分泌的陽性反應物分布于絨毛表面和固有層，免疫組織化學染色后也呈陽性反應，因此該試驗統計的是IgA漿細胞和IgA的陽性反應物。

表7 丁酸梭菌對蛋用仔公雞小腸中杯狀細胞數量變化的影響Table 7 Effects of Clostridium butyricum on the change of goblet cell number in small intestine of egg-laying male chicks

圖5 對照組與1 000 mg/kg丁酸梭菌組空腸黏膜IgA陽性物質Fig.5 IgA positive material in jejunum of control group and 1 000 mg/kg Clostridium butyricum group

由表8可以看出，1 000 mg/kg丁酸梭菌組的十二指腸IgA陽性物質有效數量最多，達到66.75個，顯著高于對照組(P＜0.05)，但與抗生素組相比差異不顯著(P＞0.05)，各試驗組之間差異不顯著(P＞0.05)。500 mg/kg丁酸梭菌組、750 mg/kg丁酸梭菌組、1000 mg/kg丁酸梭菌組空腸的IgA陽性物質有效數量均顯著高于對照組(P＜0.05)，分 別 比 對 照 組 高 了 18.84%、18.84%、21.26%，但與抗生素組相比沒有顯著差異(P＞0.05)，4個試驗組之間的差異也不顯著(P＞0.05)。各組回腸IgA陽性物質有效數量無顯著差異(P＞0.05)，僅隨丁酸梭菌添加量升高呈增加趨勢。

表8 丁酸梭菌對蛋用仔公雞小腸黏膜IgA陽性物質有效數量及分布的影響Table 8 Effects of Clostridium butyricum on the number anddistribution of IgA positive material in small intestine of egg-laying male chicks 個

3 討論

3.1 腸道菌群

動物的腸道是一個復雜的微生態系統，腸道內的微生物對于動物的營養、免疫、生理功能的發揮以及疾病防治等都發揮著重要的影響。據報道，腸道占優勢的菌群為雙歧桿菌、乳酸桿菌及擬桿菌，其次為消化球菌及彎曲桿菌等厭氧菌。腸道中，盲腸內細菌的種類豐富和數量多，且以厭氧菌為主，總菌數達1011個/g。雖然目前對雞盲腸微生物微生態學的研究遠沒有反芻動物瘤胃和豬后腸微生物微生態學的研究深入，但是研究雞盲腸內容物中微生物的正常腸道菌群變化，對防治腸道感染疾病具有很高的實用價值［1－2］。

唐寶英等［3］在雙歧桿菌、嗜酸乳酸桿菌和糞鏈球菌的培養基中加入相同比例的丁酸梭菌發酵提取物，室溫培養24 h，結果表明3種菌的活菌含量分別比對照組提高了 24.00%、42.57%和6.76%，這說明丁酸梭菌能夠促進有益菌的增殖。體內試驗也有相同的研究結果，趙熙等［4］通過動物試驗和人體試食試驗對丁酸梭菌活菌制劑對腸道菌群的影響進行研究發現，受試對象腸道內的雙歧桿菌數量極顯著增加，乳酸桿菌數量顯著增加，說明丁酸梭菌活菌制劑具有一定的增殖腸道內有益菌和抑制有害菌的作用。以上研究結果與本試驗的研究結果相一致，可以表明丁酸梭菌可以促進有益菌增殖并抑制有害菌生長從而調節腸道內菌群的平衡，改善腸道微生態環境。究其原因可能是丁酸梭菌代謝可產生淀粉酶，淀粉酶水解淀粉和碳水化合物生成的低聚糖更容易被雙歧桿菌和乳酸菌所利用，而且丁酸梭菌生長速度快，能夠產生大量丁酸、乳酸等有機酸，使腸道pH降低，不利于有害菌生長。

3.2 小腸黏膜結構

腸道是機體消化、吸收的重要的場所，一個保持完整性的健康腸道可以確保有價值的飼料營養成分得到完全的消化和吸收。小腸的正常結構尤其是絨毛高度、隱窩深度及V/C值等是衡量小腸消化吸收功能的重要指標。腸絨毛作為小腸的重要組成部分，在吸收營養物質上尤為重要，其強有力的、有規律的擺動還可以排斥有害菌群的定植。而且，指狀腸絨毛形態與腸上皮細胞數量顯著相關，當絨毛變高變寬時，腸上皮細胞數量增多，與營養物質的接觸和吸收面積增大，對養分的吸收能力增強，反之，絨毛短、窄，吸收面積則小，對養分的吸收能力降低。隱窩是絨毛基部的上皮下陷至固有層形成的管狀結構，它的深度反映了細胞生產率，細胞從隱窩基部不斷向絨毛頂部遷移、分化，形成有吸收能力的細胞，從而補充絨毛上皮的正常脫落。當這一過程減慢時，隱窩基部的細胞生成率降低，隱窩變淺，說明腸上皮細胞的成熟率上升，吸收能力增強。如果隱窩變深則說明機體的組織代謝增快，維持需要增加，生產性能降低。所以，V/C值可以很好地反映小腸的功能情況，比值上升，黏膜改善，消化吸收能力增強，生長發育快;比值下降，可能黏膜受損，消化吸收能力降低［5－7］。而黏膜的厚薄與營養物質的吸收和轉運過程有關，進而影響小腸的吸收的功能。

相關的研究表明［8］，丁酸梭菌對于斷奶仔豬的小腸形態有明顯的改善功能，斷奶第7天，與對照組相比，丁酸梭菌可以顯著增加回腸絨毛高度。當丁酸梭菌與谷氨酰胺連用時，斷奶第7、14天，與對照組相比，復合組的十二指腸絨毛高度有顯著地提高，隱窩深度顯著變淺。在本試驗的研究中，也有相一致的結果，1 000 mg/kg丁酸梭菌組的添加效果較為理想，能夠使各個腸段的絨毛高度、V/C值、黏膜厚度都顯著高于對照組，1 000 mg/kg丁酸梭菌組與對照組相比，使十二指腸的絨毛高度增加了22.77%，V/C值增加了55.50%，黏膜厚度增加了19.98%;空腸絨毛高度增加24.47%，V/C值增加35.34%，黏膜厚度增加27.90%;回腸的絨毛高度增加了20.79%，V/C值增加了40.43%，黏膜厚度增加了20.33%。這說明丁酸梭菌對蛋用仔公雞的小腸形態具有改善作用，增強了消化吸收功能，可以促進蛋用仔公雞的生產發育。丁酸梭菌產生這一效果的原因，可能是丁酸梭菌的主要代謝產物為丁酸，丁酸是腸道上皮組織細胞再生和修復的主要營養物質，對腸道上皮組織的再生和修復有重要作用。

3.3 黏膜免疫

腸道不僅是消化、吸收營養物質的重要場所，還是機體最大的免疫器官，發揮重要的免疫功能，腸道黏膜就是抵御病原微生物進入體內、防止機體感染的第一道屏障，包括機械屏障、生物屏障、化學屏障、免疫學屏障和腸黏膜固有層篩等部分［9－11］。其中，腸黏膜機械屏障和免疫學屏障具有重要的作用。腸黏膜上皮結構的完整性與腸黏膜機械屏障功能密切相關，免疫學屏障則主要由免疫球蛋白、免疫細胞、細胞因子等共同構成，而免疫細胞又包括淋巴細胞、杯狀細胞和肥大細胞等。上皮內淋巴細胞位于腸絨毛上皮細胞之間，在黏膜免疫系統中最先接觸抗原，它不僅參與免疫反應，還能通過偽足與上皮細胞接觸，加速上皮細胞的再生，在腸道黏膜中起著重要的免疫作用［12］。

楊慧［13］以小鼠為試驗對象，研究益生菌對其黏膜結構和黏膜免疫的影響，結果表明，益生菌可以增加小鼠腸道內上皮內淋巴細胞的數量。同時還有報道，上皮內淋巴細胞數量的增加可能代表機體黏膜免疫力的增強［14］。在本試驗研究中，750 mg/kg丁酸梭菌組和1 000 mg/kg丁酸梭菌組對小腸上皮內淋巴細胞數量的影響較明顯，這2個試驗組空腸和回腸的上皮內淋巴細胞數量顯著高于對照組，分別比對照組高了 20.05%、25.32%。這與楊慧［13］的試驗結果相一致，說明丁酸梭菌可以顯著提高蛋用仔公雞小腸上皮內淋巴細胞數量，增強腸黏膜免疫水平。本試驗還可以看出，從十二指腸到回腸，小腸上皮內淋巴細胞數量逐漸減少，這一分布規律與相關報道相一致［15－16］。

小腸絨毛上的杯狀細胞是一種典型的糖蛋白分泌細胞，分泌的黏蛋白釋入管腔內成為潤滑性黏液覆蓋在小腸黏膜表面，形成接觸外部環境的屏障，對上皮有保護作用［17］。黏液層如同分子篩，選擇性的排斥大分子物質，氨基酸等小分子物質則可以自由通過，同時黏液能夠保護上皮表面不受細菌、病毒及水解酶的侵害。但黏液的黏性要保持一定的平衡，如果平衡破壞，將影響小腸的正常生理功能。而且，杯狀細胞分泌的黏蛋白與柱狀細胞分泌的復合糖蛋白組成腸道黏膜上皮細胞表面的細胞衣，細胞衣的糖蛋白和細胞膜的蛋白質和脂質可以結合牢固，捕獲微生物，是潛在致病原的重要物理屏障。此外有研究表明杯狀細胞可能在腸黏膜損傷后的重建過程中起關鍵作用［18－19］。

在本試驗研究中，1 000 mg/kg丁酸梭菌組飼喂效果明顯，十二指腸、空腸、回腸的杯狀細胞數量均顯著高于對照組，分別比對照組高了45.90% 、30.61%、39.09%。1 000 mg/kg 丁酸梭菌組空腸、回腸的杯狀細胞數量還顯著高于抗生素組，分別比抗生素組提高了24.27%、22.40%。這說明丁酸梭菌可以顯著提高蛋用仔公雞小腸杯狀細胞數量，更好的發揮免疫屏障作用，保護機體免受外界病原微生物的侵害。

在腸道黏膜免疫系統起著中心作用的是分泌型免疫球蛋白A(sIgA)，在腸道分泌物中含量豐富，漿細胞分泌的IgA經過腸上皮細胞或在細胞間隙內與上皮細胞產生的分泌片段結合形成sI-gA，它參與體液免疫，可以防止病原微生物的入侵，同時在調節腸道菌群方面也發揮著重要作用［20］。有研究表明，機體sIgA有調節多層黏膜防御體系的能力，第1層在腸腔，通過sIgA排除抗原;第2層在上皮細胞內，清除細胞內病原體等;第3層在黏膜固有層，sIgA通過分泌途徑排出抗原到腸腔［21］。

本試驗表明，蛋用仔公雞飼喂不同水平的丁酸梭菌與對照組相比，都可以使小腸黏膜中IgA陽性物質的有效數量有一定地增加，在十二指腸中，1 000 mg/kg丁酸梭菌組比對照組顯著高了17.11%，空腸中 750 mg/kg丁酸梭菌組與1 000 mg/kg丁酸梭菌組也顯著高于對照組，分別比對照組提高18.84%、21.26%。回腸中，各組之間差異不顯著，但隨丁酸梭菌添加量的增加IgA陽性物質的有效數量呈增加趨勢。綜上可知，丁酸梭菌可以增強腸道黏膜的抵抗力，提高機體免疫力，添加量以1 000 mg/kg為佳。

4 結論

①丁酸梭菌能夠增加乳桿菌和雙歧桿菌的數量，降低大腸桿菌的數量，1 000 mg/kg丁酸梭菌組調節菌群的效果好于其他組。這說明，丁酸梭菌可以促進有益菌增殖并抑制有害菌生長從而調節腸道內菌群的平衡，改善腸道微生態環境。

②飼糧中添加丁酸梭菌能顯著改善蛋用仔公雞小腸黏膜上皮細胞的形態結構，黏膜厚度、絨毛高度、V/C值等相關指標，同時也增加了黏膜上皮淋巴細胞、杯狀細胞及IgA陽性物質的數量。且1 000 mg/kg丁酸梭菌組的效果好于其他組，增強了消化吸收能力，從而維護了腸道正常的黏膜屏障功能，提高了免疫水平。

③綜上可知，丁酸梭菌能夠促進生長發育，維持腸道健康，在本試驗條件下，最適宜的添加水平為1 000 mg/kg。

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