抗纖益心方對擴張型心肌病大鼠心肌TGF-β1表達的影響

王小青 張春霞 惠玲

擴張型心肌病(DCM)是一種以左心室和(或)右心室心腔過大、心肌收縮功能障礙為主要特征的心肌疾病，心室重構是該病發展的重要病理環節。本研究通過觀察抗纖益心方對擴張型心肌病大鼠心肌TGF-β1表達水平的變化探討其作用機制。

1 資料與方法

1.1 實驗材料 抗纖益心方干浸膏(由黨參，黃芪，云苓，白術，丹參，川芎，紅花，赤芍，澤蘭，益母草組成):由南陽市中醫院制劑室提供，每克浸膏相當于生藥4 g;呋喃唑酮片:福建省三明天泰制藥有限公司生產，批號:20050204;卡托普利片:常州制藥廠生產，批號:200502242;戊巴比妥鈉:中國醫藥(集團)上海化學試劑公司生產，批號:F20021216。TGF-β1多克隆抗體，購自北京博奧森生物技術有限公司。

1.2 動物造模及分組 選取體重為(61.9 g±7.0)g的Wistar健康雄性大鼠(由鄭州大學動物中心提供，合格證號:510116)。將動物按5:1隨機分為模型組和正常對照組。參照文獻方法[1]，模型組在飲水中加呋喃唑酮 (按1 kg水加700 mg呋喃唑酮配置)喂養，喂養8周。正常組動物常規飼養，不進行藥物干預。

1.3 治療方法 造模8周后開始藥物干預，1次/d給藥。正常組動物常規飼養，不進行藥物干預;模型組動物每日管飼與治療組同等容積的生理鹽水;抗纖益心方治療小劑量組動物每日管飼抗纖益心方4.7 g/(kg·d);抗纖益心方治療大劑量組動物每日管飼抗纖益心方18.8 g/(kg·d);卡托普利對照組動物每日管飼卡托普利10.125 mg/(kg·d);中西藥聯用組動物同時管飼卡托普利及抗纖益心方大劑量。灌藥8周后處死動物。

1.4 心肌取材及OD測定 動物麻醉后，迅速打開胸腔，取出心臟，濾紙吸干水分，剪去左、右心房及右心室，然后從心尖處沿冠狀面切取心肌組織，放入10%中性緩沖福爾馬林液中固定，石蠟包埋，制備厚4 μm組織切片。TGF-β1陽性表達采用平均光密度值(OD)的測定[1]。

1.5 統計學方法 數據用SPSS 13.0統計分析軟件處理，計算所有數據以均數±標準差(±s)表示，組間比較采用單因素方差分析。

2 結果

2.1 各組TGF-β1陽性表達 光鏡下，各組TGF-β1的陽性染色呈棕黃色或棕褐色，陽性區域主要分布于心肌細胞和間質胞漿內。各組TGF-β1染色可見:正常組心肌纖維排列整齊，心肌細胞間質中有少量棕黃色陽性表達，顏色較淡。模型組心肌細胞間質中有大量棕黃色或棕褐色陽性表達，可看到陽性染色成片或反復重疊排列在心肌間質中，染色較深。卡托普利組、大劑量組、中西藥聯用組心肌細胞結構清晰，心肌細胞間質中有部分棕黃色陽性表達，三者無明顯差別，但與模型組相比，表達明顯減少。

2.2 各組OD值比較 正常組、中西藥聯用組、大劑量組和卡托普利組與模型組相比TGF-β1陽性表達明顯減少(P＜0.05);中西藥聯用組、卡托普利組、大劑量組和小劑量組與模型組相比明顯抑制TGF-β1陽性表達(P＜0.05)，其中以中西藥聯用組作用最強;大劑量組與模型組比較對其改善作用明顯(P＜0.05);與卡托普利組作用相似(P＞0.05);與小劑量組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 各組TGF-β1OD值的比較(±s)

表1 各組TGF-β1OD值的比較(±s)

注:與正常組相比，﹟P＜0.05;與模型組相比，△P＜0.05

組別 n TGF-β1 0.1863±0.0603模型組 6 0.4884±0.0421卡托普利組 6 0.2695±0.0318△﹟中藥大劑量組 6 0.2679±0.0321﹟中藥小劑量組 6 0.3014±0.0145△中西藥聯用組 6 0.2669±0.0424正常組6﹟

3 討論

擴張型心肌病是一種病因未明的疾病，主要是以單側或雙側心腔擴大，心肌收縮功能減退，伴或不伴有充血性心力衰竭為特征的心肌疾病。心室重構是該病發展的重要病理環節，因此，對于擴張型心肌病心室重構的研究已成為近年來心血管疾病病理生理研究的一個熱點。

從細胞和分子水平看，在心室重構過程中，心肌細胞和細胞外基質(ECM)的變化是心室重構的結構基礎。研究表明心室重構是細胞外基質促合成與促降解在高水平上的失平衡的結果，使平衡偏向于促生長的效應，導致成纖維細胞增生及心肌間質纖維化等病理性變化。近年來TGF-β1在心室重構發生過程中的重要作用十分引人關注。TGF-β1由于能增加以膠原為主的間質蛋白質的合成，在組織器官纖維化形成過程中起重要的作用，TGF-β1能增加膠原等間質蛋白質的合成，抑制膠原酶等金屬蛋白酶的分泌及刺激金屬蛋白酶抑制劑的表達而抑制膠原的降解，還直接刺激細胞外基質蛋白的合成，且對新合成的基質的降解有明顯的阻抑作用，而ECM的重塑則引起心肌結構的紊亂、組織異質性增高[2]，導致心肌異常僵硬及順應性降低，是發生心律失常的結構基礎，更是猝死和慢性心功能不全的潛在危險因素，對心臟患者的住院率、預后及死亡率，有著顯著的影響。

擴張型心肌病的病機多為本虛標實，早期氣虛為本，瘀血為標，晚期心腎陽氣虛衰，溫煦失職，導致諸臟腑功能失調。其中氣虛血瘀不僅是擴張型心肌病發病的內因，還是病變的結果，存在于病變發展過程中的各個環節，有證據表明[3，4]，臨床上應用益氣活血法能改善擴張型心肌病的臨床癥狀、體征和心功能，因此益氣活血法應貫穿于本病治療的始終。本研究發現模型組TGF-β1陽性表達明顯高于正常組，提示TGF-β1參與了擴張型心肌病ECM的重塑，是造成擴張型心肌病心室重構的機制之一。而通過統計各組TGF-β1陽性表達的OD值可發現與模型組相比，中西藥聯用組、卡托普利組和大劑量組明顯抑制TGF-β1的表達，抗纖益心方小劑量組與模型組相比抑制TGF-β1表達的作用不明顯。提示大劑量抗纖益心方能通過抑制DCM大鼠心肌TGF-β1的表達，從而維持心肌間質纖維膠原合成和降解之間的動態平衡，這可能是其干預擴張型心肌病大鼠心室重構的機制之一。盡管抗纖益心方能抑制DCM大鼠心肌TGF-β1的表達，干預DCM心室重構，但其最佳有效劑量是多少，用藥時間多長為宜，還有待進一步深入研究。

[1]黃榮杰，劉唐威，伍偉鋒，等.呋喃唑酮制備大鼠擴張型心肌病模型.中國病理生理雜志，2003，23(10):2147-2150.

[2]郝嘉，肖穎彬.心肌纖維化的臨床評估和藥物治療進展.心血管康復醫學雜志，2006，15(2):195-199.

[3]朱發珍，王露露，劉致美.黃芪注射液聯合復方丹參注射液佐治擴張型心臟病療效觀察.臨沂醫學專科學校學報，2002，25(1):7-8.

[4]廖蔚茜，房莉萍，叢鵬.益氣活血法治療擴張型心肌病臨床觀察.上海中醫藥雜志，2005，39(5):18-19.