跌打傷科酒質量標準分析與研究

周燕雙 黃惠蓮

跌打傷科酒收載于衛生部《藥品標準》中藥成方制劑第十九冊，是由徐長卿、澤蘭、兩面針、九節茶等組成的酒劑，具有活血散瘀，消腫止痛作用。主要用于跌打損傷，積瘀腫痛，筋骨扭傷[1]。原標準中只有九節茶的薄層色譜鑒別，根據國家藥典委員會關于提高國家藥品行動計劃的要求，對原質量標準進行提高，分析與研究，本實驗按此要求作了一些探索，采用薄層色譜法和高效液相色譜法對跌打傷科酒進行更好的質量監控。

1 儀器與藥品

高效液相色譜儀:Agilent1100，DAD檢測器;色譜柱:Diamonsil(鉆石)C18(250 mm×4.6 mm×5 m);電子天秤:Sartorius-CPA225D型號;超聲波清洗器:KQ-500DE型;成像系統:CMAG REPROSTARⅡ型號;硅膠G板(青島海洋化工研究所);甲醇:色譜純，Merck KGaA;水為超純水;其余試劑均為分析純;兩面針對照藥材(中國藥品生物制品檢定所，批號:121014-201003)、熊果酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110742-200518)、丹皮酚對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110708-200505)。跌打傷科酒及陰性對照(廣州王老吉藥業股份有限公司提供)。

2 實驗方法與結果

2.1 澤蘭、兩面針薄層色譜鑒別

2.1.1 陰性對照溶液的制備 按跌打傷科酒處方配制分別缺澤蘭、兩面針藥材的樣品，按供試品溶液的制備方法，取同樣比例的量，制備各自的陰性對照溶液。

2.1.2 澤蘭的薄層色譜鑒別 取供試品及陰性對照樣品各25 ml，加乙酸乙酯提取2次，10 ml/次，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加乙醇1 ml使溶解，分別作為供試品溶液及陰性對照品溶液。再取熊果酸對照品，加乙醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗[2]，吸取上述溶液各6 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯－冰醋酸(12∶4∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照品在相應位置上無斑點。結果見圖1。

圖1 澤蘭薄層色譜圖

2.1.3 兩面針的薄層鑒別 取供試品及陰性對照樣品各10 ml，濃縮至1 ml，再加水10 ml稀釋，用氨水調 pH 值至9，用二氯甲烷提取二次，10 ml/次，合并提取液，蒸干，殘渣加乙醇1 ml，使溶解，分別作為供試品溶液及陰性對照溶液。取對照藥材粉末0.5 g，加乙醇30 ml，超聲提取40 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 ml使溶液，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述溶液各6 μl，分別用條狀點樣于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲醇(18∶2∶0.4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照液在相應位置上無熒光斑點。見圖2。

圖2 兩面針薄層色譜圖

2.2 徐長卿含量測定

2.2.1 檢測波長選擇 采用Agilent1100高效液相色譜儀，DAD檢測器，配制丹皮酚對照品溶液及跌打傷科酒(缺徐長卿)陰性對照溶液，在200～400 nm波長范圍內進行光譜掃描。掃描結果丹皮酚對照品溶液在274 nm處有最大吸收波長，跌打傷科酒(缺徐長卿)陰性對照溶液，在274 nm處無吸收波長。選定274 nm為檢測波長，結果見圖3～4。

圖3 丹皮酚光譜圖圖4 跌打傷科酒(缺徐長卿)陰性光譜圖

2.2.2 色譜條件 色譜柱:Diamonsil(鉆石)C18(250 mm×4.6 mm ×5 μm);流動相:甲醇-水(43 ∶57);檢測波長;274 nm;進樣量:10 μl;柱溫:35℃。理論板數按丹皮酚峰計算應不低于 3000[3]。

2.2.3 溶液制備

2.2.3.1 對照品溶液的制備 取丹皮酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含15 μg的溶液，即得。

2.2.3.2 供試品溶液的制備 精密量取跌打傷科酒25 ml，蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至5 ml，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得。

2.2.3.3 陰性對照品溶液的制備 按跌打傷科酒處方配制缺徐長卿藥材的樣品，按供試品溶液的制備方法，取同樣比例的量，制備徐長卿的陰性對照溶液。

2.2.4 專屬性考察 按制定的色譜條件，將丹皮酚對照品溶液、供試品溶液、缺徐長卿的陰性對照溶液，進行液相色譜分析，結果陰性對照無干擾。結果見圖5。圖5:從上至下①丹皮酚對照品;②供試品溶液;③徐長卿陰性對照溶液

圖6

2.2.5 線性關系考察 精密稱取丹皮酚對照品適量，加甲醇配制成每 1 ml含丹皮酚 1.9266、3.8530、7.7063、15.4125、30.8250、61.6500、123.3000 g 的溶液。分別吸取 10 μl，進行液相色譜分析，計算回歸方程為:Y=50.837X-2.9426，R=0.9996。說明丹皮酚在1.93～123.30 g之間呈良好的線性關系。

2.2.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μl，連續進樣5次，進行色譜分析，測定丹皮酚峰面積，并計算峰面積的RSD=0.54%。說明所建立方法的精密度良好。

2.2.7 穩定性試驗 取供試品溶液，精密吸取10 μl，進行色譜分析，分別在 0、2、4、8、12、24 小時測定，并計算含量，得相對標準偏差，RSD=2.65%。說明制備的供試品溶液在24 h內穩定。

2.2.8 重復性試驗 取同一批號的樣品6份，按供試品制備方法制備供試品溶液，按制定色譜條件依法測定，并計算含量。RSD=1.45%，說明該方法重復性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗 精密量取已知含量的跌打傷科酒6份，精密加入一定量的丹皮酚對照品溶液，按制定的方法進行操作與分析，測定丹皮酚的含量，計算加樣回收率，回收率為98.44%，RSD=1.22%，該方法準確度較高，結果見表1。

表1 跌打傷科酒加樣回收率試驗測定結果

2.2.10 樣品測定 根據所制定的供試品提取方法及色譜條件對跌打傷科酒三批進行分析與計算，結果見表2。

表2 樣品測定結果

3 討論

3.1 丹皮酚是該制劑中藥材徐長卿主要成分之一。鑒于丹皮酚在中藥材及其制劑中含量均不高，加之中藥成分的復雜性，故取樣量較大，但含量穩定性好，高效液相色譜法應是中藥材及其制劑中丹皮酚首選的分離分析方法。

3.2 增加澤蘭和兩面針的薄層色譜的定型鑒別，徐長卿的高效液相定量含量測定，更好更全面的控制跌打傷科酒的質量。

[1]中華人民共和國衛生部藥品標準－中藥成方制劑(第19冊)，1998:226.

[2]國家藥典委員會.中國藥典(2005年版).一部.北京:化學工業出版社，2005:233，附錄Ⅵ B，Ⅵ D.

[3]郭漢文，侯峰，任傳波.HPLC法測定定坤寧丸中丹皮酚的含量，中國藥事，2007，21(9):736.