基層醫(yī)院HBsAg檢測方法的選擇

蔡鳳萍

基層醫(yī)院HBsAg檢測方法的選擇

蔡鳳萍

目的 通過對HBsAg檢測方法的比較，選出適合基層醫(yī)院檢驗(yàn)科使用的方法。方法 用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、化學(xué)發(fā)光免疫分析法、膠體金免疫層析實(shí)驗(yàn)三種方法分別同時(shí)對本院住院的259例患者血清標(biāo)本進(jìn)行檢測。結(jié)果 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和膠體金免疫層析實(shí)驗(yàn)的敏感度和特異度均低于化學(xué)發(fā)光免疫分析法，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測HBsAg靈敏度高、特異性好，適宜基層醫(yī)院應(yīng)用。

HBsAg; 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn); 化學(xué)發(fā)光免疫分析法; 膠體金免疫層析實(shí)驗(yàn); 基層醫(yī)院

據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，全球約20億人曾感染過HBV，其中3.5億人為慢性感染者，每年約有100萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌。我國屬高流行區(qū)，一般人群HBsAg陽性率為9.09%，接種與未接種乙型肝炎疫苗人群HBsAg陽性率分別為4.51%和9.51%［1］。檢測HBsAg在該類疾病的預(yù)防、診斷及控制的過程中是重要的依據(jù)。然而，由于試劑的敏感性及特異性等指標(biāo)的差異，部分HBsAg滴度表達(dá)很低的標(biāo)本，不同方法測定的結(jié)果也有所差異，造成一定的漏診和誤診，甚至引發(fā)醫(yī)患矛盾和醫(yī)療糾紛［2］。為了找到一種適合基層醫(yī)院應(yīng)用的方法，筆者對三種方法進(jìn)行了試驗(yàn)觀察，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 血清標(biāo)本 血清標(biāo)本選自本院住院的患者共259例，其中已確診的乙肝患者126例，健康對照133例。

1.2 試劑與儀器 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑由上海科華生物工程有限公司提供，膠體金免疫層析實(shí)驗(yàn)(GICA)試紙條由藍(lán)十字生物藥業(yè)(北京)有限公司提供，化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA)試劑由羅氏生物診斷產(chǎn)品(上海)有限公司提供及Rodche170發(fā)光儀。

1.3 方法 259份標(biāo)本用三種方法同步進(jìn)行檢測，均嚴(yán)格按照試劑盒說明書及儀器操作規(guī)程進(jìn)行操作。

1.4 檢測結(jié)果評價(jià)標(biāo)準(zhǔn) ELISA以肉眼觀察，以陰、陽性對照孔為參照，有顏色者為陽性。CLIA以超過正常參考值為陽性，正常參考值以內(nèi)為陰性。GICA以在檢測線和質(zhì)控線位置上各出現(xiàn)一條紫紅色條帶為陽性結(jié)果，僅質(zhì)控線位置上出現(xiàn)一條紫紅色條帶為陰性結(jié)果，質(zhì)控線位置上沒有紫紅色條帶為無效結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用PEMS 3.1醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

對三種方法所測得結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在126例陽性標(biāo)本檢測中，CLIA的靈敏度最高(98.4%)，特異度為98.5%;ELISA的靈敏度為97.6%，特異度為95.5%;GICA的靈敏度為93.6%，特異度為97.0%。見表1。

表1 三種方法測得259份血清HBsAg結(jié)果

3 討論

GICA是用膠體金標(biāo)記技術(shù)和蛋白質(zhì)層析技術(shù)結(jié)合的以微孔濾膜為載體的快速的固相膜免疫分析技術(shù)，交聯(lián)抗HBs單克隆抗體，與待檢血清中HBsAg結(jié)合，形成雙抗體夾心一步法測定方法，簡便快捷，標(biāo)本隨到隨做，能滿足獻(xiàn)血員篩查以及急診患者的需要，無需儀器，但假陰性率較高，有報(bào)道顯示，對于全血標(biāo)本，由于血細(xì)胞的干擾，GICA的檢測限值更高，只能達(dá)到 2 ～5 ng/ml［3］，易引起不必要的醫(yī)患糾紛，而且成本較高，在基層醫(yī)院不適宜推廣應(yīng)用。

CLIA是將發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立起來的一種新的檢測微量抗原或抗體的新型標(biāo)記免疫分析技術(shù)。它兼有發(fā)光分析的高靈敏性和抗原抗體反應(yīng)的高特異性，無放射性污染，是近年來發(fā)展較快的新一代標(biāo)記免疫分析技術(shù)。此方法靈敏度和特異度均高于其他兩種方法，操作起來也很方便，但其試劑成本貴，也需要特殊儀器，更適宜標(biāo)本量較多的單位使用，絕大多數(shù)的基層醫(yī)院不適宜推廣和應(yīng)用。

ELISA基本原理是將抗體(抗原)包被在固相表面后，按不同步驟加入待測抗原(抗體)和酶標(biāo)抗體(抗原)，經(jīng)充分反應(yīng)再洗滌，最后加底物，根據(jù)酶對底物催化的顯色反應(yīng)程度，而對標(biāo)本中的抗原(抗體)進(jìn)行定性或定量。此方法靈敏度和特異性均較好，操作也不繁瑣，成本低廉，為實(shí)驗(yàn)室所喜愛，是目前各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用最廣泛的HBsAg檢測方法［4］，也更適合在基層醫(yī)院普及和應(yīng)用。

本文通過對三種方法的實(shí)驗(yàn)觀察，認(rèn)為ELISA檢測HBsAg因其診斷指標(biāo)較理想(靈敏度和特異度均較好)，質(zhì)量穩(wěn)定，試劑成本低，操作也簡便，較適合基層醫(yī)院應(yīng)用。

［1］倪語星.臨床微生物學(xué)與檢驗(yàn)［M］.第4版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2007:445.

［2］張瑞青，尹艷霞，楊聰慧.常用乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物的意義及臨床評價(jià)［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2010，19(22):2827 －2827.

［3］刑培清，溫濤，方建華，等.膠體金免疫層析法檢測HBsAg在無償獻(xiàn)血中的應(yīng)用研究［J］.河南醫(yī)學(xué)研究，2003，12(1):17 －19.

［4］許倩.HBsAg檢測的膠體金法與ELISA法效果比較［J］.中外醫(yī)療，2008，27(13):107.

10.3969/j.issn.1674 －4985.2012.06.042

225401江蘇省泰興市腫瘤醫(yī)院

蔡鳳萍

2011－12－20)

(本文編輯:梅宏偉)