探討UF-1000i尿沉渣分析儀檢測尿中紅細胞、白細胞的干擾因素

王中全 朱秋紅 宋改芳

尿沉渣檢查在泌尿系統(tǒng)疾病的診斷中具有一定的臨床應(yīng)用價值，并成為治療及療效觀察的重要指標之一。UF-1000i全自動尿有形成份分析儀能對尿液中多種有形成分進行定量計數(shù)分析，定量內(nèi)容主要有:紅細胞、白細胞、上皮細胞、管型、細菌、酵母樣菌、結(jié)晶、精子等成分，同時提供多種有形成分的圖像分析，并能判斷血尿的來源。但我們在臨床工作中發(fā)現(xiàn)，UF-1000i在檢測尿紅細胞時，結(jié)晶、酵母樣菌、細菌、脂肪滴、卵磷脂小體及影紅細胞可對其造成干擾;而對白細胞造成干擾的因素主要是上皮細胞、非晶形鹽類結(jié)晶、大量細菌、小圓上皮細胞、滴蟲等。尿干化學(xué)分析儀通過測定尿液中的化學(xué)物質(zhì)而分析紅細胞及白細胞，易受多種化學(xué)因素的影響，有較高的假陰性率。尿沉渣分析儀與干化學(xué)儀器在分析尿液有形成分時，受到多種因素的影響，兩種儀器的檢測結(jié)果與尿沉渣鏡檢尚存一定的差異。為此，本文通過對2000例尿液標本進行UF-1000i尿沉渣分析儀分析、URIT-1500尿液干化學(xué)分析儀測試、尿沉渣鏡檢，探討這兩種儀器測定尿中紅細胞、白細胞的影響因素，分析引起誤判的主要原因，并提出相應(yīng)的解決方案，為臨床提供真實可靠的檢驗結(jié)果，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機抽取2012年8月至2012年9月我院2000例門診、住院患者，患者年齡2～81歲，男800例、女1200例。用干凈的一次性尿杯留取新鮮中段晨尿。

1.2 儀器與試劑 UF-1000i尿沉渣分析儀及配套試劑、配套低、高值質(zhì)控品;URIT-1500尿液干化學(xué)分析儀及配套試紙條、專用定標條;Olympus顯微鏡;Xiang Yi L500水平離心機;10ml帶刻度離心管。

1.3 檢測方法 每天檢測前，用專用定標條對URIT-1500尿液干化學(xué)分析儀進行定標，UF-1000i用低、高值質(zhì)控品做質(zhì)控，在保證儀器運行良好狀況下，嚴格按照操作說明書進行檢測。每例標本充分混勻后分3管，各10ml，其中第1管進行UF-1000i分析儀檢測;第2管進行尿干化學(xué)檢測;第3管用水平離心機RCF400g 1200～1300r/min離心5min后，棄去上清液，留取沉渣0.2ml混勻，吸取20μl滴在載玻片上，用18 mm×18 mm蓋玻片覆蓋，用10×40鏡頭觀察鑒定紅細胞、白細胞數(shù)量，觀察10個視野所見最低和最高值，記錄結(jié)果，兩小時內(nèi)檢測完畢。

1.4 參考范圍與判定標準 ①UF-1000i分析儀檢測:男性:紅細胞0～12μl，白細胞:0～12μl;女性:紅細胞0～24/μl，白細胞:0～26/μl[1]。②尿干化學(xué)法:潛血:陰性;LEU:陰性。③顯微鏡鏡檢結(jié)果:紅細胞:0～3/Hp;白細胞:0～5/Hp[2]。超過以上參考范圍為陽性，3種方法以尿沉渣鏡檢做為“金標準”，當尿沉渣鏡檢陰性而UF-1000i和(或)干化學(xué)陽性時為假陽性;當尿沉渣鏡檢陽性而UF-1000i和/或干化學(xué)陰性時為假陰性。

2 結(jié)果

2.1 UF-1000i、尿沉渣鏡檢檢測尿紅細胞、白細胞結(jié)果 見表1。

2.2 干化學(xué)、尿沉渣鏡檢檢測尿紅細胞、白細胞結(jié)果 見表2。

2.3 兩種方法檢測尿紅細胞、白細胞的影響因素 見表3。

表1 UF-1000i、尿沉渣鏡檢尿紅細胞、白細胞檢測結(jié)果比較

表2 干化學(xué)、尿沉渣鏡檢尿紅細胞、白細胞檢測結(jié)果比較

表3 兩種方法檢測尿紅細胞、白細胞的影響因素

3 討論

UF-1000i尿沉渣分析儀利用流式細胞技術(shù)和熒光染色的方法，通過前向側(cè)向散射光及其脈沖寬度、熒光強度及其脈沖寬度以及細胞電阻抗等參數(shù)，對尿液中有形成分定量分析，從而區(qū)分尿中各種有形成分。具有操作簡便、速度快、可報告多項參數(shù)等優(yōu)點。干化學(xué)測定尿中隱血是根據(jù)血紅蛋白接觸活性法原理，通過血紅蛋白具有的類過氧化物酶樣作用催化分解過氧化物，使四甲基聯(lián)苯胺氧化呈色;檢測尿中白細胞是根據(jù)酯酶法的原理，粒細胞漿內(nèi)的酯酶能水解3-羥基吲哚酚酯類底物，釋放出酚，再與重氮試劑反應(yīng)生成紫紅色化合物。但由于儀器本身的局限性及尿液中有形成分的復(fù)雜性和多變性，容易對儀器分析尿液中的紅細胞、白細胞造成干擾。有學(xué)者認為用單一尿沉渣分析儀或其他方法分析存在一定數(shù)量的假陽性和假陰性結(jié)果[3]。本文通過對2000例尿液中有形成分的檢測發(fā)現(xiàn)，這兩種檢測方法與沉渣鏡檢相比較有一定的差異。

正常形態(tài)的紅細胞直徑約8 μm、雙凹圓盤狀，分布在散點圖中熒光強度較低的區(qū)域，尿液中的紅細胞可因多種因素的影響而使其變形。本文通過對2000例尿液中有形成分分析，UF-1000i尿沉渣分析儀檢測紅細胞的假陽性率占17.9%，常引起假陽性的有形成分分別如下:結(jié)晶、酵母樣菌、細菌、脂肪滴、卵磷脂小體。大小形態(tài)與紅細胞相似的尿酸結(jié)晶和雙凹形草酸鈣結(jié)晶，在散點圖中與紅細胞交叉分布，易造成假陽性;酵母樣菌、脂肪滴或卵磷脂小體、數(shù)個非晶形結(jié)晶或細菌聚集成大小如紅細胞，通過儀器分析，其熒光強度和散射光強度與紅細胞相似，可對紅細胞計數(shù)造成干擾。假陰性率占8.6%，影紅細胞和紅細胞碎片則常是引起假陰性的主要原因。這類細胞因其體積小、形態(tài)不規(guī)則，熒光強度極弱、位于低熒光區(qū)，儀器不能辨認可造成假陰性。尿中出現(xiàn)大量血紅蛋白尿，沉渣中無紅細胞，潛血試驗呈陽性，常見于陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、血型不合輸血、急性溶血疾病、病毒感染、手術(shù)后所致紅細胞大量破壞等疾病，報告結(jié)果時須強調(diào)注明其物理性狀，以提示尿中紅細胞溶解，并及時和臨床聯(lián)系。干化學(xué)檢測紅細胞的假陽性率占10.2%，主要的影響因素有:產(chǎn)過氧化物酶的細菌、尿液中含強氧化劑、某些藥物、對熱不穩(wěn)定酶等;干化學(xué)檢測紅細胞的假陰性率較高，占19.5%，主要的影響因素是尿液中含有大量的VitC，卡托普利、羅丁緩釋片亦可降低測試靈敏度。

UF-1000i尿沉渣分析儀檢測白細胞的假陽性率達20.1%，常引起假陽性的因素主要有:上皮細胞、非晶形鹽類結(jié)晶、大量細菌、小圓上皮細胞、滴蟲等。干擾機制可能是尿中非晶形鹽類結(jié)晶、小圓上皮細胞、上皮細胞等成分的大小及染色程度與白細胞類似，產(chǎn)生的散射光、熒光及電阻信號與白細胞部分重疊[4];另外當尿液中有大量細菌聚集成團時，其散射光、熒光信號與白細胞相似，也有可能使白細胞檢測結(jié)果呈假性升高。在臨床工作中發(fā)現(xiàn)，孕婦尿液中常有大量的上皮細胞，會導(dǎo)致白細胞假性增多。白細胞的假陰性率較低，僅占3.3%，白細胞破碎常是引起假陰性的主要原因。對于肉眼血尿、混濁的尿標本，建議沖洗儀器，待儀器空白值通過后再進行下一個標本的測試，以免污染下一個標本造成假陽性。尿干化學(xué)通過粒細胞漿內(nèi)的酯酶檢測白細胞，中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、單核細胞和巨噬細胞均有白細胞酯酶，試帶法呈陽性結(jié)果，而淋巴細胞不含這種酯酶呈陰性結(jié)果。干化學(xué)檢測白細胞的假陽性率占11.8%，主要的影響因素是陰道分泌物污染，分泌物中的鱗狀上皮細胞漿內(nèi)含有的磷酸酯酶與粒細胞酯酶化學(xué)性質(zhì)相似導(dǎo)致假陽性;假陰性率占14.3%，主要的影響因素是淋巴細胞或者尿液中含有大量的葡萄糖(＞30 g/L)、高濃度白蛋白(＞5 g/L)及一些藥物如呋喃妥因、慶大霉素、頭孢氨芐、先鋒霉素;草酸濃度增高時可抑制反應(yīng)，也可導(dǎo)致干化學(xué)中的白細胞酯酶呈陰性反應(yīng)[2]。

綜上所述，多種因素可能干擾UF-1000i尿沉渣分析儀檢測紅細胞、白細胞。在分析紅細胞過程中，易受結(jié)晶、酵母樣菌及其他大量雜菌、精子等干擾，當儀器出現(xiàn)報警時，必須用鏡檢確認[5];也有學(xué)者認為，當尿沉渣分析儀與干化學(xué)檢測結(jié)果不一致和出現(xiàn)異常散點圖時，報告管型、酵母樣菌、精子、不均一紅細胞時沉渣鏡檢十分必要[6]。而白細胞易受上皮細胞、非晶形鹽類結(jié)晶、大量細菌、小圓上皮細胞、滴蟲等的影響。目前，UF-1000i和尿干化學(xué)檢測尿液只能快速篩查，一定要重視沉渣鏡檢，尿沉渣鏡檢被公認為尿液有形成分檢查的經(jīng)典方法，只有三者結(jié)合互檢，才能有效排除假陽性和假陰性結(jié)果，為臨床相關(guān)疾病的診斷和治療提供真實可靠的檢驗結(jié)果。

[1]叢玉隆，馬駿龍，李云蓮，等.尿沉渣測定四種方法參考值范圍調(diào)查.中華醫(yī)學(xué)檢驗雜志，1997，20(4):229-230．

[2]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程.第3版.南京:東南大學(xué)出版社，2006:290-295．

[3]程穎，程燃.UF-100全自動尿沉渣分析儀影響因素的探討.重慶醫(yī)學(xué)，2006，35(4):349．

[4]陳忠，鄒曉月，袁立新.UF-100尿沉渣分析儀和干化學(xué)檢測尿中紅細胞和白細胞及管型的干擾因素分析.中國實驗診斷學(xué)，2008，12(4):534-536．

[5]叢玉隆，馬駿龍.幾種檢測尿紅細胞方法的價值與互補關(guān)系.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2002，25(5):263-264．

[6]Ottiger C，Huber A R.Quantitative urine particle analysis:integrative approach for the optimal combination of automation with UF2100 and microscopic review with KOVA cell chamber.Clin Chem，2003，49(4):617-623．