抗酸桿菌冷染色法的臨床應用分析與研究

趙斌 賈繼芳

抗酸桿菌冷染色法的臨床應用分析與研究

趙斌 賈繼芳

目的 探討抗酸桿菌冷染色法對結核病臨床診斷的應用價值。方法 用直接涂片熱染法和冷染法對2008年1月～2011年12月送檢的肺結核病患者或可疑患者的痰標本、支氣管刷片、尿液、胸腔積液、腹腔積液、關節(jié)腔積液、腦脊液等1680份標本做同步檢測。結果 1680份送檢標本中熱染法和冷染法的陽性率分別為9.46%（159/1680）和9.28%（156/1680）。熱染法的失敗率為0.48%（8/1680），冷染法為0%。結論 直接涂片冷染法直觀、簡便、價廉，是診斷臨床結核病的重要手段。

結核?。豢顾釛U菌；冷染色法；臨床；診斷

我國作為世界上結核病疫情最嚴重的國家之一，快速準確地診斷是控制結核病的重要手段。臨床結核分枝桿菌檢查方法主要有；細菌培養(yǎng)、抗體檢測、聚合酶連反應、抗酸染色等多種。在結核病的防治工作中，細菌學檢查占有重要的地位，目前標本直接涂片找抗酸桿菌是發(fā)現傳染源的主要手段，此方法操作簡便、快速、高效而被廣泛應用于臨床，我們就本院1680份標本分別用石炭酸復紅熱染法與冷染法進行比較分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 資料來源于本院2008年1月～2011年12月送檢的肺結核病患者或可疑患者的痰標本、支氣管刷片、尿液、胸腔積液、腹腔積液、關節(jié)腔積液、腦脊液等，共計1680份。

1.2 實驗方法 加熱染色法試劑完全按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》配制。冷染色法試劑選用《臨床微生物學檢驗》金永染色法試劑配方并加以改進。

染色液：石炭酸復紅工作液新法配制：⑴配制5%石碳酸水溶液：40～50℃水浴加熱石碳酸使其溶化，取液態(tài)石碳酸4.5mL溶于80mL預加熱的蒸餾水中，再加蒸餾水至90mL。⑵向上述石炭酸溶液中加入無水乙醇10mL，在將其溶液加熱至50℃左右。⑶向上述預加熱的石碳酸乙醇溶液中加8g堿性復紅，充分振蕩使其完全溶解。

脫色復染合劑：美藍5g，加入95%乙醇160mL，溶解后加入蒸餾水250mL，混勻，邊搖邊加入硫酸9mL，加入硫酸不宜太快，以確保安全。

1.3 儀器 奧林巴斯顯微鏡（OLYMPUS CX-41）。

1.4 標本處理

1.4.1 痰標本從送檢盒中用棉簽挑取干酪樣，膿樣等可疑部分痰標本進行涂片。支氣管刷片標本直接涂片。其他標本經離心（3000r）取管底沉淀直接涂片。

1.4.2 以上標本涂片自然風干，滴加1%稀鹽酸或5%冰醋酸溶液固定。

1.5 方法 直接涂片加熱染色法：涂片自然干燥后固定，染色方法完全參照全國臨床檢驗操作規(guī)程》。

直接涂片冷染色法：涂片自然干燥后滴加1%稀鹽酸或5%冰醋酸溶液固定，之后加石碳酸復紅冷染15min水洗，依據室溫適當可延長冷染時間，脫色和堿性美藍復染合為一步染5min，干后鏡檢。

1.6 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件進行數據處理，計數資料采用χ2檢驗分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

1680 份標本中加熱染色法陰性1521份，陽性159份，陽性率9.46%，失敗8份，失敗率0.48%；冷染色法陰性1524份，陽性156份，陽性率9.28%，失敗0份，失敗率0%；兩種方法的陽性率在統(tǒng)計學上無顯著性差異（P＞0.05）。陰性率則有顯著性差異。直接涂片熱染法的操作步驟比直接涂片冷染法復雜，而且有假陽性，還有因操作失誤而導致玻片斷裂，實驗失敗。

3 討論

結核病是人體感染結核桿菌而發(fā)生的一種非常常見的傳染病，也是傳染病中的頭號殺手，病死率為各種傳染病之首，是全球關注的重大公共衛(wèi)生問題之一，也是我國規(guī)定的乙類法定報告?zhèn)魅静　ｋS著人們生活水平的提高、醫(yī)療技術的發(fā)展、采取群防群治、卡介苗的接種、使結核病的發(fā)病率和病死率大為降低。但近年來，結核病似乎死灰復燃，發(fā)病率有所回升。在臨床作為確診結核病診斷的方法之一就是標本直接涂片染色鏡檢找抗酸桿菌，這也是確診肺結核最簡單最有效的手段之一，同時也是診斷肺結核的重要指標[2]。直接涂片我們依然采用的是傳統(tǒng)的熱染色法，所說的熱染色法就是石碳酸復紅加熱法，直接涂片自然干燥后，加染液石碳酸復紅鋪滿整個玻片，在酒精燈上加熱5min，邊加熱邊繼續(xù)滴加染液，防止染液干燥，之后用鹽酸酒精脫色，堿性美藍復染，干燥后在顯微鏡下找抗酸桿菌[3]。采用此方法中，加熱的石碳酸復紅能夠加快抗酸桿菌的著色能力，有利于鏡下觀察，但加熱過程中染液外溢，產生大量的氣溶膠，污染環(huán)境，不利于工作人員的健康。在加熱過程中時間不好把握，容易造成染液干燥，甚至玻片斷裂，需用的染液量相對比較大，染液干燥容易使染液碴子殘留在玻片上而影響鏡檢，也導致了假陽性率有所增加。而采用的冷染法，石碳酸復紅的配制采用了新的配制方法，試劑配制時預加熱可促使堿性復紅更充分的溶解，減少染料渣殘留于玻片上，加大堿性復紅的濃度，能使抗酸桿菌在不加熱的條件下更好更快地著色，改變了固定方法，取消了石碳酸復紅加熱的步驟，用延長初染時間使抗酸桿菌更好的著色，依環(huán)境溫度的高低適當延長初染時間[4]，染液用量相對于加熱法有所減少，降低了試驗成本，將鹽酸酒精脫色和堿性美藍復染兩步合作一步，使脫色能更徹底，背景比較干凈，提高鏡檢率。

本研究通過比較這兩種方法，結果兩種方法的陽性率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。由于冷染法將三步染色法簡化為兩步法，免去了加熱的步驟減少了環(huán)境污染，節(jié)約成本，操作方法相對簡便，節(jié)省了工作人員的時間，提高工作效率，染色后背景干凈、提高鏡檢率，值得推廣。

[1] 彭志文.聚合酶鏈反應檢測結核分枝桿菌的臨床應用價值[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2010,7(14):1490-1491.

[2] 徐秀琴，張惠琴，徐秀霞，肺結核患者痰標本質量對抗酸桿菌的影響及護理對策[J].臨床肺科雜志，2010,15(2)：300.

[3] 中華人民共和國醫(yī)政司.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版.南京：東南大學出版社，2006：726-727.

[4] 王仙、吳翠、袁例.溫度對結核桿菌抗酸染色檢出率的影響[J].中華現代內科學雜志，2006,3(3):269-270.

10.3969/j.issn.1009-4393.2012.25.076

744000 甘肅省平涼市第二人民醫(yī)院（趙斌 賈繼芳）