DNA定量分析系統(tǒng)用于非典型鱗狀細胞檢查的評估

李文峰 張慧晶

目前，非典型鱗狀細胞（atypical squamouscells,ASC）是指鱗狀上皮已經(jīng)增生，并且出現(xiàn)了異型性，包括無明確診斷意義的非典型的鱗狀上皮細胞(ASC—US)和不除外高度病變的非典型鱗狀上皮細胞(ASC—H)[1],其診斷一直沒有一個統(tǒng)一的標準，各實驗室細胞學醫(yī)生的診斷標準亦有差別，且主觀性強[2]。導致對ASC的處理意見多樣，根據(jù)2001年美國陰道鏡和子宮頸病理學會（the American Society for Colposcopy and Cervical Pathology,ASCCP）制定的處理指南，提出了3種處理意見：（1）直接行陰道鏡檢查。（2）4～6個月復查細胞學。（3）行高危型HPV DNA檢測，陽性者行陰道鏡檢查，陰性者6～12個月復查細胞學。但由于我國宮頸病發(fā)病率高，本地區(qū)經(jīng)濟欠佳，隨訪條件受到制約等原因，我們嘗試對ASC的病人進行DNA定量分析系統(tǒng)檢測，取得了較好的效果，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2008年6月～2010年11月湖北省鐘祥市計劃生育服務站檢測出的ASC病例60例，其中意義不明的非典型鱗狀上皮細胞（ASCUS，atypical squamous cells of undetermined significance）52例，非典型鱗狀上皮內(nèi)病變，不排除高度病變（ASC-H,atypical squamous cells,cannot exclude hig-grade squamous intraepithelial lesion）8例。年齡20～53歲，平均年齡34歲。

1.2 方法

1.2.1 器材 SPICM-DNA型全自動細胞腫瘤篩查分析系統(tǒng)，F(xiàn)euigen染液等。

1.2.2 液基薄層制片及染色 將裝有固定液和刷頭的標本收集管，加入0.1%DTT消化液放在震蕩器上震蕩2小時，然后將消化后的細胞懸液離心5分鐘（1000轉(zhuǎn)/分），棄上清液后，加50%酒精分別清洗、離心兩次（1000轉(zhuǎn)/分，5分鐘/次）。然后將用固定液稀釋的細胞混懸液，放入細胞涂片離心機甩片5分鐘，每例制成1張薄層細胞學片，進行FeulgenDNA染色做DNA定量測定。

1.2.3 細胞DNA定量分析 SPICM-DNA型全自動細胞腫瘤篩查分析系統(tǒng)根據(jù)不同細胞成分所具有的不同特征參數(shù)來完成自動細胞分類和計數(shù)過程，標準對照細胞為同張玻片上的100個正常上皮細胞，所測出的平均光密度（IOD,Intergrated Optical Density）為2C的參考值，其CV（Coefficient of Variation）值小于5%。

根據(jù)SPICM-DNA型全自動細胞腫瘤篩查分析系統(tǒng)所做的細胞DNA倍體分析結(jié)果及處理方法有如下三種情況：⑴正常2C細胞為主，未見異倍體細胞及異倍體細胞峰，建議一年復查。⑵出現(xiàn)DNA指數(shù)（D1）大于2.5細胞及DI在1～2之間的細胞數(shù)超過被測細胞總數(shù)的10%，建議病理活檢。⑶出現(xiàn)異倍體細胞峰及大量D1大于2.5的細胞，建議病理活檢。

1.2.4 病理診斷 對60例ASC病例均在陰道鏡下對宮頸可疑部位進行組織活檢。病理診斷報告為：正常、宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變CINI級、CINⅡ級、CINⅢ級或原位癌及浸潤癌。

1.3 統(tǒng)計學方法 以宮頸活檢病理診斷結(jié)果為標準，評價DNA定量分析系統(tǒng)篩查ASC中宮頸癌及癌前病變的敏感性、特異性。敏感性（%）=[真陽性/（真陽性+假陰性）]×100%，特異性（%）=[真陰性/（真陰性+假陽性）]×100%。

2 結(jié)果

DNA定量分析系統(tǒng)用于非典型磷狀細胞篩查結(jié)果如下：

在52例ASCUS患者中，DNA定量分析系統(tǒng)檢測異常36例，病理組織活檢異常（包括CINI、CINⅡ、CINⅢ或原位癌及浸潤癌）符合34例，DNA定量分析系統(tǒng)檢測假陰性1例，假陽性2例。敏感性為97.1%，特異性為90.0%。

在8例ASC-H患者中，DNA定量分析系統(tǒng)檢測異常6例，病理組織活檢異常（包括CINI級、CINⅡ級、CINⅢ級或原位癌及浸潤癌）符合6例。DNA定量分析系統(tǒng)檢測無漏診，假陽性1例。其敏感性為100%，特異性為66.7%。

3 討論

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，在女性惡性腫瘤中位居第二位，占癌癥患者總數(shù)的15%，嚴重威脅女性的健康，每年有371200個新發(fā)病例，約200000例死亡。特別是在經(jīng)濟水平低下以及缺乏宮頸腫瘤普查手段的發(fā)展中國家，宮頸癌發(fā)病率更高[3]。現(xiàn)在降低宮頸癌病死率的最有效手段依然是早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療，故準確地檢測出宮頸癌前病變顯得尤為重要。在宮頸癌前病變中，ASC是一類不能明確診斷為無上皮內(nèi)病變及惡性改變（negative for intraepithelial lesion or malignancy，NILM）和鱗狀上皮內(nèi)病變（squamous intraepithelial lesion，SIL）的一類細胞。有研究資料表明，ASC中真正低于CIN的病變僅占40%，半數(shù)以上病例為CIN與癌，其中高級別病變與癌在ASC-US和ASC-H中的比例分別達18.68%與33.3%[4]。由于受到感染、變性改變、炎癥刺激、可能存在癌細胞、出現(xiàn)風干現(xiàn)象以及實驗室在染色和制片技術上的差別等原因，ASC的診斷標準一直難以統(tǒng)一；2001年TBS（The Bethesda System，TBS）系統(tǒng)更新，將ASC分為ASCUS和ASCH[5],但細胞學醫(yī)生對它并不能作出準確并可重復性的判讀。而對ASC的處理，ASCCP作出了明確的說明，但受到經(jīng)濟條件、隨訪條件等原因的影響，而DNA定量分析系統(tǒng)能夠解決這些問題，它不需要長時間的隨訪，也不需要對病人再行宮頸部位的各種檢查，且準確性和特異性均較好。

在ASCUS檢查中出現(xiàn)的1例假陰性，系統(tǒng)只掃描出2027個細胞，且炎癥細胞比例占62%，固縮核細胞比例占15%，可供分析的細胞只占23%。可能是分析細胞數(shù)目過少導致儀器沒檢測出。而出現(xiàn)的2例假陽性，其中1例有口服避孕藥史，另1例經(jīng)檢查，維生素B12低于正常參考范圍，而口服避孕藥、維生素B12缺乏等因素，均可影響細胞DNA異常。在判讀為ASC-H的患者，提示潛在的CINⅡ或CINⅢ，其陽性預測價值較ASC-US更高，但比明確診斷為HSIL預測CINⅡ或更嚴重病變的價值要低[6-7]。此次在ASC-H中出現(xiàn)的1例假陽性為老年女性，宮頸萎縮，可能因該患者年齡偏大（53歲），激素水平紊亂導致核改變有關。

總之，DNA定量分析系統(tǒng)用于ASC的檢測中，不管是敏感性還是特異性均較好。用該方法進行檢測值得嘗試。

此次分析病例數(shù)較小，下次將在更大群體和更廣的范圍中進行。但DNA定量分析系統(tǒng)用于ASC患者檢查，可以使ASC的病變更明確；結(jié)合本單位實際，對ASC患者的處理，在征得患者理解的前提下，進行DNA定量分析系統(tǒng)檢測，結(jié)果異常者，進行宮頸組織活檢；結(jié)果正常者1年復查。

[1]劉君芬.TCT結(jié)合HR-HPV檢測在宮頸癌篩查中的應用[J].當代醫(yī)學,2008,14（11）：55.

[2]馬博文.子宮頸細胞病理學診斷圖譜[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2008：90-101.

[3]常玉梅,蔣旭東,鄭娜,等.宮頸癌前病變研究進展[J].河北醫(yī)藥,2010,32(9):1136-1138.

[4]張新瑩,郭東輝,張小晶,等.宮頸細胞涂片中的非典型鱗狀細胞與低度鱗狀上皮內(nèi)病變[J].診斷病理學雜志,2006,13(6):407-409.

[5]Boulanger JC,Sevestre H,ASCUS:an update[J].Gynecol Obstet Fertil,2006,34(1):44-48.

[6]Quddus MR,Sung CJ,Steinhoff MM,et al.A typical squamous metaplastic cell:reproducibility,outcome,and diagnostic features on Thinprep Pap test[J].Cancer Cytopathol,2001,93,(1):16-22.

[7]Sherman ME,Solomon D,Schiffman M (for the ALTS Group).Qualification of ASCUS.A comparison of equivocal LSIL and equivocal HSIL cervical cytology in the ASCUS LSIL Triaye Study[J].Am J Clin Pathol,2001,116(3):386-394.