不同酸度的乳酸菌飼料添加劑對6月齡梅花鹿消化率及小腸微生物氮流量的影響

張曉勇

(山東環山集團，山東煙臺 264006)

乳酸菌等益生菌對動物的消化和健康起著至關重要的作用，尤其在反芻動物的瘤胃微生物蛋白生產中作用更加突出。乳酸菌添加劑作為一種新型的微生態飼料添加劑，替代抗生素，提高動物飼料效率、促進畜禽生長、預防疾病、提高經濟效益方面發揮著越來越重要的作用[1]。微生態制劑在單胃動物和水產方面的應用效果顯著，但在反芻動物方面應用的報道較少[2]。反芻動物體內本身含有大量的益生菌與微生態制劑的成分有相似之處。成年反芻動物對粗飼料的消化能力取決于瘤胃內微生物的數量，增加瘤胃內微生物的含量后，從而提高動物的反芻能力，促進小腸中微生物蛋白的總流量，從而使蛋白的沉積增加。本試驗通過在飼糧中添加不同酸度的乳酸菌飼料添加劑，研究其對6月齡梅花鹿的采食量、消化率以及小腸微生物氮流量的影響，從而確定乳酸菌飼料添加劑在梅花鹿飼喂時的最適酸度，測定乳酸菌飼料添加劑對6月齡梅花鹿飼喂效果，以便在生產中應用。

1 材料與方法

1.1 試驗日糧

精料補充料（購于吉林公主嶺漢紅牧業）,粗飼料使用揉制的玉米秸稈。

1.2 試驗動物與飼養管理

選擇健康、6月齡馴化好的梅花鹿4只，裝入代謝籠中，進行編號，每天飼喂1次（16:30飼喂），先喂精料補充料（200 g/d），然后添加粗飼料，粗飼料自由采食，自由飲水。

1.3 試驗設計

試驗時間：2010年12月5日至2011年1月25日,整個試驗每期20 d，預試期15 d，試驗期5 d，試驗期每天記錄動物的采食量，排糞量與排尿量，在集尿盆中每天加入10 ml的10%的稀硫酸。試驗以乳酸菌飼料添加劑在綿羊中的添加水平為參考；同時考慮動物體重差異性，采用（自身）配對的單因素試驗,試驗分3期進行，設第一期為對照組飼喂基礎日糧，第二期為未調酸組（pH值5.6乳酸菌組），飼喂基礎日糧+10 g/d未調酸乳酸菌添加劑，第三期為調酸組（pH值3.72乳酸菌組），飼喂基礎日糧+10 g/d酸度調到3.72乳酸菌飼料添加劑，具體試驗方案見表1。

表1 試驗方案

1.4 樣品采集與處理

在試驗前采集精飼料與粗飼料，每天飼喂前采集前1 d的糞樣并稱重，收集剩料量，記錄采食量，取糞便總量的10%，使用10%的稀硫酸噴霧10 ml固氮，在65℃進行干燥，并記錄干燥后重量，將每期每只梅花鹿的5個樣品混合并保存；收集全部尿液并稱重，取尿液總量的10%裝在一個密閉的容器內混勻，于冰箱中冷凍保存。

1.5 測定指標及方法

測定指標：干物質、有機物質、粗纖維、粗蛋白[3-4]、氮平衡和小腸微生物氮流量。

小腸微生物氮流量測定方法：將尿酸標準樣品（Sigma色譜級試劑）溶于堿化的熱水中（用1 N的氫氧化鉀溶液調節pH值為10），當尿酸溶解后再用稀磷酸調節pH值為6，配制成1 N的母液。分別取1.25、2.5、5、7.5、10、15、20 ml母液定容到 100 ml，配制成濃度為 12.5、25、50、75、100、150、200 μmol的尿酸溶液，以蒸餾水為空白樣，利用紫外分光光度計(型號：UV-1800)在260 nm處測定A值分別為0.033、0.069、0.109、0.158、0.268、0.358、0.482，繪制標準曲線，并得出回歸方程，利用回歸方程計算出尿酸當量。然后以尿液中尿酸當量值來估測梅花鹿小腸微生物氮流量。公式為：Y=4.137+1.245X（盧天鳳，2004）[5]；其中 Y(g/d)為小腸的微生物氮流量。X(mmol/d)為鹿的尿酸當量值。

1.6 數據統計與分析

數據采用Excel 2003和SPSS16.0軟件輔助進行統計分析（±Sd），統計顯著水平預設為 P＜0.05。

2 試驗結果與分析

2.1 不同酸度水平的乳酸菌添加劑對6月齡梅花鹿干物質采食量、可消化干物質及干物質消化率的影響(見表2)

表2 梅花鹿的干物質采食量、可消化干物質及干物質消化率

由表2可知：添加不同酸度的乳酸菌添加劑可明顯提高梅花鹿干物質采食量(P＜0.05)，其中以pH=5.6乳酸菌組最高，各組間差異顯著(P＜0.05)；不同酸度的乳酸菌添加劑可提高梅花鹿可消化干物質，pH=5.6的乳酸菌組最高，各處理組間差異不顯著(P＞0.05)；不同處理組間梅花鹿干物質的消化率差異不顯著(P＞0.05)。

2.2 不同酸度水平的乳酸菌添加劑對6月齡梅花鹿有機物采食量、可消化有機物及有機物消化率的影響（見表3）

表3 梅花鹿的有機物采食量、可消化有機物及有機物消化率

由表3可知：添加不同酸度的乳酸菌添加劑可明顯提高梅花鹿有機物質采食量(P＜0.05)，其中以pH值5.6乳酸菌組最高，各組間表現差異顯著(P＜0.05)；添加pH值5.6乳酸菌組的梅花鹿可消化的有機物顯著高于對照組(P＜0.05)，其余各組間差異不顯著(P＞0.05)；各處理組間梅花鹿有機物消化率差異不顯著(P＞0.05)。

2.3 不同酸度水平的乳酸菌添加劑對6月齡梅花鹿蛋白的采食量、可消化蛋白及蛋白消化率的影響（見表4）

表4 梅花鹿的蛋白采食量、可消化蛋白及蛋白消化率

由表4可知：添加不同酸度的乳酸菌添加劑與對照組相比，可顯著提高梅花鹿蛋白采食量（P＜0.05），其中以pH=5.6乳酸菌組最高，pH=5.6乳酸菌組梅花鹿蛋白采食量與pH=3.72乳酸菌組相比差異不顯著（P＞0.05）；不同酸度的乳酸菌添加劑組與對照組相比，有提高梅花鹿可消化蛋白的趨勢，其中以pH=5.6乳酸菌組最高，但各處理間差異不顯著（P＞0.05）；各處理間梅花鹿蛋白消化率差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 不同酸度水平的乳酸菌添加劑對6月齡梅花鹿采食氮、排出氮及沉積氮的影響（見表5）

表5 采食氮、排出氮（糞氮與尿氮量）及氮沉積(g/d)

由表5可知：添加不同酸度的乳酸菌添加劑與對照組相比，可顯著提高梅花鹿氮采食量（P＜0.05），其中以pH＝5.6乳酸菌組最高，pH＝5.6乳酸菌組梅花鹿氮采食量與pH＝3.72乳酸菌組相比差異不顯著（P＞0.05）；各處理水平梅花鹿氮排出量差異不顯著（P＞0.05）；添加pH＝5.6乳酸菌組梅花鹿的氮沉積顯著高于對照組（P＜0.05），其余各處理組間差異均不顯著(P＞0.05)。

2.5 不同酸度水平的乳酸菌添加劑對6月齡梅花鹿粗纖維的采食量、可消化粗纖維及粗纖維消化率的影響（見表6）

由表6可知：不同酸度的乳酸菌添加劑可顯著提高梅花鹿粗纖維采食量（P＜0.05），其中以pH=5.6乳酸菌組最高，各組間表現差異顯著（P＜0.05）；添加不同酸度的乳酸菌對梅花鹿可消化粗纖維有影響，其中除pH=5.6乳酸菌組梅花鹿的可消化粗纖維顯著高于對照組外（P＜0.05），其余各處理間差異均不顯著(P＞0.05)；不同酸度的乳酸菌添加劑對梅花鹿粗纖維消化率影響差異不顯著（P＞0.05）。

表6 梅花鹿的粗纖維采食量、可消化粗纖維及粗纖維的消化率

2.6 不同酸度水平的乳酸菌添加劑對6月齡梅花鹿尿液中尿酸當量的影響

以測定的A值為橫坐標，尿酸標準樣品的濃度為縱坐標，建立尿酸濃度標準曲線（見圖1），表明尿酸濃度值與A值兩者之間強正相關（r=0.995，R2=0.991，P＜0.01），其回歸方程為：Y=410.75(Se17.538)X+0.831 9（Se4.569）。

式中：Y——尿酸濃度值（μmol/l）；

X——對應濃度的吸光度A值。

圖1 尿酸標準曲線

表7 梅花鹿小腸微生物氮流量

表明利用751在260 nm處測定的A值，通過回歸方程可求出尿中尿酸濃度值。然后以尿液中尿酸當量值來估測梅花鹿小腸微生物氮流量（見表7）。由表7可知：pH=5.6乳酸菌組梅花鹿小腸微生物氮流量顯著高于對照組(P＜0.05)，pH=3.72乳酸菌組梅花鹿小腸微生物氮流量與對照組和pH=5.6乳酸菌組差異不顯著（P＞0.05）。

2.7 梅花鹿氮沉積與小腸微生物氮流量之間的回歸分析

以小腸微生物氮流量為橫坐標，梅花鹿氮沉積為縱坐標，檢測兩者的直線回歸關系（見圖2），表明小腸微生物氮流量與氮沉積兩者之間強正相關（r=0.993 3，R2=0.986 7，P＜0.01）,其回歸方程為：Y=0.281 9X（Se0.033）-0.793 1（Se0.297）。

式中：Y——氮沉積量（g/d）；

X——對應的小腸微生物氮流量。

圖2 6月齡梅花鹿小腸微生物氮流量與氮沉積關系

3 討論

3.1 不同酸度的乳酸菌添加劑對6月齡梅花鹿采食量的影響

反芻動物的采食量受日糧特性的影響，采食量與日糧在瘤胃中降解率和食糜在小腸中排空的速度成正相關（金立明等，2004）[6]。本研究添加未調酸的乳酸菌添加劑與對照組相比，可明顯提高6月齡梅花鹿的采食量；添加調酸的乳酸菌添加劑與對照組相比，采食量明顯增加，增加幅度不如未調酸組。原因如下：①對于試驗結果中采食CP量、采食氮兩項指標，如果調酸組與對照組間干物質采食量差異顯著，飼喂日糧中蛋白含量測定準確，那么調酸組與對照組間蛋白采食量、氮采食量也應該差異顯著，試驗結果則是差異不顯著，顯著性檢測結果為P=0.065。原因可能是試驗采集的粗飼料樣混合不均，誤差造成。②乳酸菌飼料中添加的乳酸菌促進瘤胃微生物的增長，使微生物分泌的酶濃度增加，促進飼糧營養物質在瘤胃內的降解率；乳酸菌在瘤胃內大量增殖后，分泌大量的乳酸，降低了瘤胃內食糜的酸度，從而促進了食糜在小腸中排空的速度；瘤胃內日糧的降解率與食糜在小腸中排空的速度加快，致使動物的采食量提高。③調酸后的乳酸菌飼料添加劑進入瘤胃內，使瘤胃內酸度降低，在一定程度上可能會抑制微生物的生長，降低梅花鹿的消化性能，最終會影響動物的采食；這與李忠寬等（2001）[7]的報道一致。

3.2 不同酸度的乳酸菌添加劑對6月齡梅花鹿可消化物質的影響

李忠寬等（2001）[7]報道：反芻動物瘤胃酸度pH值偏低，會影響飼料營養物質在體內正常消化。本試驗顯示：添加乳酸菌可提高動物的可消化營養物質，調酸組與對照組相比雖有增幅，但不如未調酸組與對照組間的增幅明顯；而且未調酸組與對照組間DOM、DCF差異顯著。結果分析：①蛋白的可消化量雖有增加，但差異不大，部分原因分析如下：尿液中含有部分嘌呤衍生物，在糞尿分離時進行的不完全，可能有部分誤差，因此最好應參考氮沉積的數據。②對于試驗結果中DOM量大于DDM量這樣的試驗結果，無論從營養學還是從物質守恒角度考慮都是不正確的，分析考慮原因如下：動物采食的精料采用的是顆粒飼料(風干樣200 g/d)，粗料采用的是揉碎的玉米秸稈(動物自由采食)，測定粗料OM含量若與真實值差1%，就會出現這樣的結果?？紤]粗料的加工、采樣過程，造成這樣的結局就可以理解了，但是在比較DOM量時是不受影響的。③由于乳酸菌等瘤胃微生物在瘤胃內的大量增值，提高了有機物質（CF）的利用，從氮沉積上就可以知道瘤胃內微生物的增殖情況。因此就會出現未調酸組與對照組間DOM、DCF差異顯著的情況。④調酸后的乳酸菌飼料添加劑進入瘤胃內，使瘤胃內酸度降低，在一定程度上可能會抑制微生物的生長，降低梅花鹿可消化物質的量。

3.3 不同酸度的乳酸菌添加劑對6月齡梅花鹿消化率的影響

本試驗結果表明：添加不同酸度的乳酸菌添加劑，各處理間梅花鹿消化率雖有變化，但差異不顯著。據Lessard(1987)報道[8],0.1%的乳酸菌添加量雖然提高豬生長9.8%,但對飼料轉化率卻毫無影響。據丁保安報道：在羔羊全混合基礎日糧中添加益生素可明顯提高羔羊的日增重、鈣、磷以及CP的表觀消化率[9]。金立明等研究乳酸菌類加酶益生素對梅花鹿仔鹿和羔羊日糧營養物質消化率影響的結果表明：添加益生素可明顯提高仔鹿和羔羊的干物質采食量，但試驗組干物質、有機物質、粗蛋白和中性洗滌纖維的消化率顯著低于對照組[6]，本試驗動物采食量研究結果與金立明（2004）的報道一致,而消化率則與 Lessard（1987）報道一致。

3.4 不同酸度的乳酸菌添加劑對6月齡梅花鹿小腸微生物氮流量的影響

對于反芻動物，評價一種飼料的優劣應該以瘤胃內微生物的生產量或小腸中微生物的流量為依據。據報道小腸中微生物的流量與尿液中嘌呤衍生物的量成正相關（Chen等，1992）[10]，尿中嘌呤衍生物的量與尿中尿酸當量強正相關（盧天鳳，2004）[5]；本試驗通過分析氮沉積與尿中尿酸當量間的關系，結果表明二者間呈現強正相關，確定采用尿酸當量法來評價反芻動物對氮的利用是可靠的。通過尿酸當量值來估測小腸微生物氮流量的試驗結果與通過氮沉積來評價反芻動物對添加劑的利用效果是一致。

4 結論

在6月齡梅花鹿飼養中添加10 g/d未調酸的乳酸菌飼料添加劑能提高梅花鹿的采食量、氮沉積和小腸微生物氮流量，在本試驗范疇內是最適宜的選擇。

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[6]金立明，趙全民，車亮，等.益生素對梅花鹿仔鹿和羔羊日糧營養物質消化率的影響[J].經濟動物學報,2004，8（2）：68-73.

[7]李忠寬,馬澤芳.引起反芻動物胃酸過高的原因及防治措施[J].特產研究,2001（2）：59-63.

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