枯草芽孢桿菌對地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞生產性能及血液指標的影響

程志斌 吳淑云 張紅兵 楊建發(fā) 李曉珍 蘇子峰

（1.云南農業(yè)大學，云南昆明 650201；2.陜西省銅川市動物疫病預防控制中心，陜西銅川 727031；3.云南西南集團，云南昆明 650224；4.大理學院農學與生物科學學院，云南大理 671003）

近年來已有很多動物試驗和文獻綜述顯示，枯草芽孢桿菌(Bacillus Subtilis)是一種替代飼用抗生素使用的安全畜禽飼用微生態(tài)制劑，具有廣闊的商業(yè)價值和潛力(解廣勤等,2011；張博等,2011；張紅兵等，2011；卞國順等，2012；侯玉潔等，2012；楊光宇，2012；周映華等，2012a、b)。本課題組前期針對我國云南省肉雞養(yǎng)殖業(yè)相對落后的大量地面平養(yǎng)的實際情況（程志斌等，2011a；程志斌等，2012a、b；蘇子峰等，2012），開展了日糧添加枯草芽孢桿菌對不同飼養(yǎng)方式（地面平養(yǎng)或籠養(yǎng)）肉雞生長性能影響的初步研究（廖國周等，2011），結果顯示，無論是地面平養(yǎng)還是籠養(yǎng)方式，枯草芽孢桿菌替代抗生素對改善肉雞的生長性能具有良好效果。良好的生長性能取決于畜禽對飼料營養(yǎng)物質的充分消化吸收與高效代謝利用（Cheng等，2006a；劉影等，2010；程志斌等，2011b、c、d）。已有報道證明，枯草芽孢桿菌能夠補充畜禽腸道多種內源酶不足（解廣勤等，2011；黃璠等，2012；侯玉潔等，2012），綜合提高肉雞對飼料營養(yǎng)物質的消化與利用（張博等，2011；卞國順等，2012；楊光宇，2012）。然而，過去的試驗結果和報道大多是在模擬肉雞現代化規(guī)模養(yǎng)殖的籠養(yǎng)生產條件下獲得。本課題組發(fā)現（廖國周等，2011），以地面平養(yǎng)為代表的肉雞傳統散養(yǎng)模式，與現代化規(guī)模養(yǎng)殖的籠養(yǎng)模式相比，肉雞的生產性能和健康狀況差異很大。在提倡環(huán)保養(yǎng)殖與安全飼料及飼料添加劑使用日益高漲的今天（程志斌等，2011e、f、g），以我們的前期工作為基礎，深入研究枯草芽孢桿菌改善肉雞、尤其是地面平養(yǎng)肉雞生長性能的作用機理十分必要，這對指導當前云南省地面平養(yǎng)肉雞的生產實際有重要意義和經濟價值。因此，本試驗重點研究枯草芽孢桿菌飼料添加劑對地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞生長性能、養(yǎng)分利用率及血液生化指標的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與分組

本試驗選擇1日齡新出生的羅斯 308（ROSS 308）肉仔雞240只，按照飼養(yǎng)方式（地面平養(yǎng)或籠養(yǎng)）和枯草芽孢桿菌的添加不同，分成4個試驗處理組，試驗處理組設計見表1。每個處理組設6個重復，每個重復10只，公母各半。

表1 試驗處理組設計

1.2 試驗日糧

參考農業(yè)部標準《雞飼養(yǎng)標準（NY/T 33—2004）》，并結合云南省肉雞養(yǎng)殖實際情況，配制1～21日齡肉仔雞試驗飼料，基礎日糧配方及營養(yǎng)水平見表2。處理組1和處理組2肉仔雞日糧添加飼用抗生素金霉素，并遵守農業(yè)部發(fā)布的《飼料藥物添加劑使用規(guī)范》；處理組3和處理組4肉仔雞日糧替代抗生素使用枯草芽孢桿菌飼料添加劑，添加量為5×1011cfu/kg全價日糧，枯草芽孢桿菌由云南師范大學生命科學學院提供。試驗肉仔雞飼料中均不使用飼用植酸酶，試驗飼料在65℃低溫加工成顆粒飼料，由云南西南集團(云南西爾南飼料有限公司)生產。

表2 試驗基礎日糧配方及營養(yǎng)水平

1.3 飼養(yǎng)管理

籠養(yǎng)采用三層重疊式肉雞籠，水泥地面平養(yǎng)為每個重復一個小圈,放置食料桶和飲水桶。所有試驗雞均飼養(yǎng)于同一有窗雞舍內,專人負責飼養(yǎng)與記錄。自然光照輔以人工照明,光照時間22 h。按常規(guī)免疫程序進行免疫。試驗在云南農業(yè)大學試驗雞場進行，從2012年5月3日開始，試驗周期21 d。

1.4 測定指標

1.4.1 生長性能

測定試驗肉仔雞出生重和末重、飼料消耗，統計死亡肉仔雞數量，計算肉仔雞平均日增重、平均日采食量、料重比（飼料轉化效率）等生長性能指標。

1.4.2 飼料養(yǎng)分利用率

采用Cr2O3指示劑法測定肉仔雞對飼料營養(yǎng)物質養(yǎng)分的表觀代謝率，具體操作過程與分析測定方法參考丁雪梅等（2011）報道方法：試驗肉仔雞15～21日齡進行代謝試驗，期間試驗日糧添加0.4%的Cr2O3指示劑。預飼4 d，隨后3 d是正式試驗期，每天定時收集部分排泄物，用于分析代謝能、粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、鈣、磷的表觀利用率。

1.4.3 血液生化指標

試驗肉仔雞21日齡早晨空腹稱重后，每個試驗重復組隨機抽取2只健康肉仔雞(1公、1母)，心臟采血后制備血清。使用全自動生化分析儀(Olympus Au 600型)測定相關血液生化指標，分析測定在云南省動物營養(yǎng)與飼料科學重點實驗室完成。

1.5 數據處理

試驗數據采用雙因素（因素1：枯草芽孢桿菌；因素2：飼養(yǎng)方式）方差分析，分別比較枯草芽孢桿菌、飼養(yǎng)方式及其互作對肉仔雞生長性能、養(yǎng)分利用率及血清生化指標的影響。同時，4個處理組間各測定指標進行多重比較分析。數據統計顯著性均表示為P＜0.05。

2 結果

2.1 枯草芽孢桿菌對地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞生長性能的影響（見表3）

表3 枯草芽孢桿菌對地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞生長性能的影響

表3結果顯示：枯草芽孢桿菌顯著影響（P＜0.05）肉仔雞平均日增重、料重比指標。處理組4顯著優(yōu)于（P＜0.05）處理組1，處理組2和處理組3之間差異不顯著（P＞0.05）。末體重、平均日采食量指標，所有處理組之間無顯著差異（P＞0.05）。

2.2 枯草芽孢桿菌對地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞飼料養(yǎng)分表觀代謝率的影響（見表4）

表4結果顯示：枯草芽孢桿菌顯著影響（P＜0.05）肉仔雞對飼料粗蛋白的表觀代謝率，飼養(yǎng)方式顯著（P＜0.05）影響代謝能的表觀利用率。2個指標均顯示：處理組4肉仔雞顯著大于（P＜0.05）處理組1，處理組2和處理組3之間差異不顯著（P＞0.05）。

表4 枯草芽孢桿菌對地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞飼料養(yǎng)分表觀代謝率的影響（%）

2.3 枯草芽孢桿菌對地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞血清生化指標的影響（見表5）

表5結果顯示：枯草芽孢桿菌、飼養(yǎng)方式及其互作顯著影響肉仔雞血清白蛋白、尿酸的濃度(P＜0.05)。肉仔雞血清白蛋白濃度指標，處理組4和處理組2之間無顯著差異(P＞0.05)，且二者都顯著大于（P＜0.05）處理組1。血清尿酸濃度指標，處理組4肉仔雞的尿酸濃度最低（P＜0.05），處理組 1最高（P＜0.05），處理組 2和處理組3之間差異不顯著（P＞0.05）。枯草芽孢桿菌顯著（P＜0.05）影響肉仔雞的血糖濃度，處理組4血糖濃度顯著低于（P＜0.05）處理組1，處理組2和處理組3之間差異不顯著（P＞0.05）。

表5 枯草芽孢桿菌對地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞血清生化指標的影響

3 討論

3.1 枯草芽孢桿菌對地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞生長性能的影響

在所有處理組肉雞采食量無顯著差異基礎上，枯草芽孢桿菌顯著影響肉仔雞的平均日增重和料重比（見表3），其中以籠養(yǎng)方式并采食添加枯草芽孢桿菌日糧的處理組4肉仔雞生產性能最佳。這一結果與我們的前期試驗（廖國周等，2011）結果一致，說明枯草芽孢桿菌替代抗生素對改善肉仔雞的生長性能具有良好效果。

采用地面平養(yǎng)方式的處理組3肉雞雖然也采食添加枯草芽孢桿菌的飼料，但處理組3肉雞的料重比指標與飼用抗生素組的處理組1和處理組2相比無顯著差異（P＜0.05），但數據統計分析結果顯示有一定的改善趨勢（0.05＜P＜0.1），且試驗期處理組 3 肉仔雞的死亡率較低。這些結果與我們的前期試驗（廖國周等，2011）報道一致，說明在傳統肉雞地面平養(yǎng)方式下，枯草芽孢桿菌具有替代飼用抗生素的潛能。

3.2 枯草芽孢桿菌對地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞飼料養(yǎng)分利用率的影響

肉雞良好的生長性能取決于對飼料營養(yǎng)物質的充分消化、吸收與利用（Kalmendal等，2009；程志斌等，2011e、f、g），采用 Cr2O3指示劑法測定的飼料養(yǎng)分表觀代謝率能夠客觀地反映肉雞對日糧營養(yǎng)的消化與利用狀況（丁雪梅等，2011）。本試驗采用了“玉米-豆粕-魚粉”典型日糧（見表2），排除了基礎飼料原料對本試驗的干擾。表4結果顯示：枯草芽孢桿菌顯著影響肉仔雞對飼料粗蛋白的利用率，處理組4肉仔雞的飼料粗蛋白利用率最高，顯著大于處理組1（P＜0.05）；處理組2和處理組3之間差異不顯著。這些結果綜合說明：枯草芽孢桿菌有利于提高肉仔雞對飼料蛋白的利用率，增加飼料蛋白質的攝入量，從而提高肉仔雞生長性能；且枯草芽孢桿菌在籠養(yǎng)肉仔雞上的使用效果明顯優(yōu)于地面平養(yǎng)肉仔雞。以上得到的結論也印證了過去關于枯草芽孢桿菌具有補充或維持動物腸道多種消化酶，提高營養(yǎng)利用率而改善畜禽生長性能的機理（卞國順等，2012；黃璠等，2012；周映華等，2012a、b；楊光宇，2012）。

本次試驗沒有發(fā)現枯草芽孢桿菌對飼料代謝能、粗脂肪、粗纖維、磷等養(yǎng)分利用率的改善效果，其原因可能與本次試驗的日糧營養(yǎng)水平一致以及低纖維、高消化率的優(yōu)質基礎飼料原料（玉米、豆粕、魚粉）選擇有關。此外，飼養(yǎng)方式顯著影響肉仔雞飼料代謝能的表觀利用率（見表4），總體而言，籠養(yǎng)方式的處理組4和處理組2肉仔雞代謝能的表觀利用率數值大于地面平養(yǎng)的處理組1和處理組3的肉仔雞。顯然，這與肉雞生活空間不同、運動造成的能量消耗差異有關。當然，我們也不排除地面平養(yǎng)肉雞由于疫病、應激等因素造成的能量額外消耗，這可以從表3雞的死亡率初步判斷。為此，我們進一步分析反映肉仔雞營養(yǎng)物質代謝利用的主要血液生化指標(見表5)。

3.3 枯草芽孢桿菌對地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞血清生化指標的影響

血液生化指標是反映畜禽體內物質代謝變化和某些組織器官機能狀態(tài)變化的指標，可以作為機體營養(yǎng)代謝利用、應激、健康狀態(tài)的綜合表征（姚浪群等，2003；Cheng，2006b；Woyengo 等,2010；成廷水等,2010；李芳林等，2012）。血清總蛋白包括白蛋白與球蛋白，血清白蛋白由肝臟合成，是機體蛋白質營養(yǎng)需求的主要來源，用于修補組織器官和提供能量（姚浪群等，2003；Cheng，2006b；李芳林等，2012）。此外，血清白蛋白還具有維持血漿滲透壓及作為其他營養(yǎng)物質的載體等多種功能（姚浪群等，2003；Cheng，2006b；Woyengo等，2010）。因此，測定血清白蛋白的濃度可以作為畜禽蛋白質營養(yǎng)攝入和代謝利用的主要指標之一（姚浪群等，2003；李芳林等，2012）。表5結果顯示：枯草芽孢桿菌顯著影響肉仔雞血清白蛋白濃度，處理組4肉仔雞血清白蛋白濃度為12.1 g/l,顯著高于處理組1（10.4 g/l），這與處理組4肉雞對飼料蛋白利用率大于處理組1的結果（見表4）相符。由此可見，籠養(yǎng)條件下，添加枯草芽孢桿菌的處理組4肉仔雞攝入了更多的蛋白質，反映在血清白蛋白濃度適度較高，且主要用于生長發(fā)育，促使處理組4肉仔雞獲得更好的生長性能。

尿酸是禽類動物體內氨基酸及核苷酸等含氮化合物代謝的終產物,也是禽類動物排出體內多余氨,維持機體正常機能的重要方式之一(陳家祥等,2011)。日糧粗蛋白水平、日糧氨基酸平衡狀況、動物的生理代謝、健康狀況等多種因素綜合影響禽類血清尿酸濃度(陳家祥等，2011)。一般認為，較低血清尿酸濃度表征禽類對飼料蛋白質和氨基酸的良好代謝利用，有利于禽類的生長發(fā)育和健康(陳家祥等，2011)。本試驗在日糧粗蛋白、氨基酸等營養(yǎng)水平和飼養(yǎng)管理相同的前提下，處理組4肉仔雞的血清尿酸濃度為38.6mg/l，較處理組1肉雞血清尿酸濃度52.5mg/l有了較大幅度地降低（見表5）；結合處理組4肉仔雞的飼料蛋白表觀代謝率最高結果（見表4），綜合說明：枯草芽孢桿菌不僅使肉仔雞提高對飼料蛋白的消化率，而且減少了氮（尿酸）排放而增加機體蛋白沉積，飼料蛋白的綜合利用率的提高促進了肉雞生長性能改善。此外，地面平養(yǎng)方式飼養(yǎng)的處理組3和處理組1肉仔雞血清尿酸濃度相比，采食添加了枯草芽孢桿菌日糧的處理組3肉仔雞顯著低于處理組1（見表5）。這一結果與處理組3肉仔雞的料重比、飼料蛋白表觀代謝率等指標，具有優(yōu)于處理組1肉仔雞的趨勢相符。因此，綜合以上分析：無論是傳統的肉雞地面平養(yǎng)方式還是現代的規(guī)模化肉雞籠養(yǎng)方式，添加優(yōu)質枯草芽孢桿菌飼用微生態(tài)制劑，可以有效替代飼用抗生素，改善肉仔雞生長性能，其作用機理與提高飼料蛋白的消化和代謝利用率有關。

血清中葡萄糖、甘油三酯和總膽固醇綜合反映了畜禽對飼料蛋白、糖類、脂質營養(yǎng)物質的消化及其在機體內的代謝利用（李焰等，2007；陳家祥等，2011；李芳林等，2012），這些指標易受到日糧營養(yǎng)水平（尤其是氨基酸種類、含量）、飼料原料選擇（谷物、油脂等能量飼料）、血清激素水平（主要是甲狀腺素、胰島素、胰高血糖素、生長激素、糖皮質激素等）、肝臟脂質相關代謝酶（脂肪酸合成酶、乙酰輔酶A羧化酶、激素敏感性甘油三酯脂酶、肝脂酶、脂蛋白脂酶等）、動物日齡、健康狀況等多種因素影響（李焰等，2007；李芳林等，2012）。表5結果顯示：枯草芽孢桿菌顯著影響肉仔雞血糖濃度，處理組4肉仔雞血糖濃度為11.2 mmol/l，低于處理組1肉仔雞的12.9 mmol/l。我們推測，在日糧營養(yǎng)水平一致和良好飼養(yǎng)管理條件下，由于枯草芽孢桿菌增加了飼料蛋白和氨基酸的攝入量，血液中較高濃度的蛋白和(或)氨基酸，激發(fā)了甲狀腺素和(或)胰島素分泌。經典的動物生理學和內分泌學知識提示我們，這2種激素均有增加血清蛋白向機體組織沉積，以及適當降低血糖濃度的作用，以符合機體組織正常對營養(yǎng)物質及能量的代謝需求（姚浪群等，2003）。當然，這一推測有待于進一步試驗分析相關指標。

此外，本試驗沒有發(fā)現枯草芽孢桿菌對肉仔雞血清甘油三酯及總膽固醇濃度的影響，這可能與肝臟脂質相關代謝酶的活性有關。

4 小結

本試驗證明，無論是傳統的肉雞地面平養(yǎng)方式還是現代的規(guī)模化肉雞籠養(yǎng)方式，添加微生態(tài)制劑枯草芽孢桿菌，可有效替代飼用抗生素，改善肉仔雞生長性能，其作用機理主要是提高飼料蛋白質的利用率。

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