HPLC 法測定注射用鹽酸普魯卡因中普魯卡因的含量

陸 瀅（江蘇鹽城市第一人民醫院，江蘇鹽城 224001）

鹽酸普魯卡因是局部麻醉藥，主要用于浸潤麻醉、阻滯麻醉、硬膜外麻醉及封閉療法等，該藥含量測定方法主要是永停滴定法（采用亞硝酸鈉滴定液滴定）[1]，但永停滴定法操作煩瑣且費時，干擾因素較多。為此，筆者查閱文獻[2]并加以摸索，建立了高效液相色譜（HPLC）法測定其含量，該法操作簡便，結果準確，可用于注射用鹽酸普魯卡因的質量控制。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型HPLC測定儀，包括G1314B紫外檢測器、AgiLent色譜工作站（美國Agilent科技有限公司）；BP 211D型電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；TB224S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）。

鹽酸普魯卡因對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100098-2007009）；注射用鹽酸普魯卡因（常州蘭陵制藥有限公司，批號：200910232、201001031、201005032、201007093、201009031）；甲醇、庚烷磺酸鈉均為色譜純（Fisher），其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Aglient C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：0.1%庚烷磺酸鈉的0.05 moL·L－1磷酸二氫甲溶液（用磷酸調節pH至3.0）-甲醇（70∶30）；流速：1.0 mL·min－1；檢測波長：290 nm；進樣量：10μL；柱溫：25℃。在該色譜條件下標準品、供試品色譜見圖1。理論板數以鹽酸普魯卡因峰計在2 000以上。

圖1 高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品；C.陰性對照Fig 1 HPLC chromatogramsA.test sample；B.substance control；C.negative control

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取鹽酸普魯卡因對照品，精密稱定100.03 mg，置于5 mL容量瓶中，加流動相適量溶解，并加至刻度，搖勻。精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，分別置于5 mL容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取注射用鹽酸普魯卡因5瓶，取其內容物，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于鹽酸普魯卡因0.2 g），置于10 mL容量瓶中，加水適量振搖使主藥成分溶解，并加水至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方量取缺普魯卡因的其他組分，按“2.2.2”下方法制備，即得。

2.3 線性關系考察

精密量取對照品0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，分別置于5 mL容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻。分別取10μL，注入HPLC儀測定。以鹽酸普魯卡因進樣量為橫坐標（c），峰面積積分值為縱坐標（A），繪制標準曲線，得普利卡因的回歸方程c＝57.660 8A－45.950 9（r＝0.999 6）。結果表明，普魯卡因檢測濃度在2.0～160.0 mg·mL－1范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.4 精密度試驗

精密吸取同一對照品溶液適量，重復進樣6次，按照“2.1”項下色譜條件測定。結果，RSD＝0.33%，表明該方法的精密度良好。

2.5 穩定性試驗

精密量取鹽酸普魯卡因對照品溶液適量，按樣品含量測定項下操作，隔3 h測1次，共測定5次，計算含量。結果，日內RSD＝0.19%，說明供試品在16 h內穩定。另取上述不同濃度的溶液適量，同法處理，3 d重復測定3次，計算含量。結果，日間RSD＝0.36%，說明供試品在3 d內穩定。

2.6 重復性試驗

取含量測定項下的供試品溶液（批號：201005032）適量，重復測定6次。結果，RSD＝0.39%，說明重復性良好。

2.7 回收率試驗

取陰性對照溶液適量（批號：200910232、201001031、201005032），精密測定，按照相當于樣品含量80%、100%、120%加入對照品，照“2.1”項下方法操作，記算回收率，結果見表1。

表1 回收率試驗結果Tab 1 Results of recovery tests

2.8 樣品含量測定

分別取供試品溶液和對照品溶液各10μL，注入HPLC儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，結果詳見表2。

表2 永停測定法和HPLC法檢測結果比較（n＝5）Tab 2 Comparison of results between the permanent stop determination of test sample and HPLC（n＝5）

由表2可見，二者無顯著性差異（P＞0.05），表明本法可作為注射用鹽酸普魯卡因的質量控制方法。

3 討論

筆者選擇參考文獻[2]介紹的290 nm波長測定，結果有較好的線性且無干擾，故選用290 nm波長作為檢測波長。

流動相首先選用甲醇-水，結果分離效果不好。在進行多次試驗后，選用以含0.1%庚烷磺酸鈉的0.05 mol·L－1磷酸二氫甲溶液（用磷酸調節pH至3.0）-甲醇（70∶30）作為流動相，取得了較好的峰形、分離度。

綜上所述，采用HPLC測定注射用鹽酸普魯卡因的含量，方法操作簡便、靈敏、結果準確、重復性好，可用于注射用鹽酸普魯卡因的質量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：794.

[2]魏世超，汪秋蘭，張 南，等.高效液相色譜法同時測定鹽酸普魯卡因注射液中鹽酸普魯卡因含量及對氨基苯甲酸限量[J].藥物分析雜志，2007，27（8）：1 249.

[3]黃玲霄.高效液相色譜法測定胃炎干糖漿中鹽酸普魯卡因的含量[J].中國藥業，2003，12（9）：42.

[4]劉曉玲，單 敏，呼延玲.復方益康寧膠囊中鹽酸普魯卡因和維生素B6的含量測定[J].中國藥業，2004，13（6）：44.