江蘇某規(guī)模化豬場(chǎng)回腸炎感染狀態(tài)監(jiān)測(cè)與防控建議

曲向陽(yáng)

（1.美國(guó)禮來(lái)亞洲公司上海代表處，上海 200021；2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 210095）

豬回腸炎又名增生性腸炎、增生性出血性腸炎,是由胞內(nèi)勞森氏菌(Lawsonia intracellularis)感染所致的以回腸、盲腸、結(jié)腸黏膜呈腺瘤樣增生為主要特征的一種重要豬腸道疾病。該病易感染生長(zhǎng)育肥豬、后備母豬，嚴(yán)重影響豬只飼料效率與生長(zhǎng)速度，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益影響嚴(yán)重[1]。據(jù)Jensen報(bào)道，在美國(guó)每頭回腸炎感染豬的經(jīng)濟(jì)損失至少1.531美元[2]。

依據(jù)臨床癥狀差異，本病可分為急性型、慢性型與亞臨床型。急性型多發(fā)于后備母豬及17周齡以上的育肥豬，健康豬群似乎更易感染急性型回腸炎[3]。常表現(xiàn)為出血性下痢（圖1），甚至突然死亡。慢性型與亞臨床型回腸、盲腸與結(jié)腸增厚（圖3），糞便無(wú)成型（圖4），但無(wú)典型臨床癥狀，2周齡～20周齡的豬只均易感染[4]，無(wú)法依據(jù)臨床癥狀進(jìn)行診斷。

本試驗(yàn)采用LawsoniaFIRSTtestTM回腸炎診斷試劑盒對(duì)該豬場(chǎng)糞便樣品中的胞內(nèi)勞森氏菌進(jìn)行了檢測(cè)，以期了解回腸炎的感染狀態(tài)與感染時(shí)間點(diǎn)，為該病的精準(zhǔn)化策略性用藥預(yù)防或疫苗免疫提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2011年12月，在江蘇省某規(guī)模化豬場(chǎng)隨機(jī)采集特定周齡的新鮮松軟或水泥樣的糞便樣品，各3 g。樣品主要來(lái)自于4、6、8、10、12、14周齡的保育豬、后備母豬與經(jīng)產(chǎn)母豬，每階段作2～3份重復(fù)，采樣后立即檢測(cè)。

1.2 檢測(cè)試劑

圖1 后備母豬急性出血性下痢

圖2 回腸、盲腸等部位出血

圖3 慢性回腸炎，腸黏膜增厚，呈腦回狀

圖4 慢性回腸炎導(dǎo)致糞便松軟

本檢測(cè)采用德國(guó)Microcoat公司開發(fā)的LawsoniaFIRSTtestTM回腸炎現(xiàn)場(chǎng)診斷試劑盒（免疫磁珠法，美國(guó)禮來(lái)公司擁有專利權(quán)）。其原理與雙抗體夾心ELISA類似。以包被在磁珠上的多克隆抗體捕捉糞便中的胞內(nèi)勞森氏菌，然后通過(guò)連接在多克隆抗體上的過(guò)氧化物酶（POD）催化TMB顯色，通過(guò)顏色變化，對(duì)胞內(nèi)勞森氏菌的感染狀態(tài)進(jìn)行定性檢測(cè)。通過(guò)對(duì)比顏色變化，對(duì)胞內(nèi)勞森氏菌的感染狀態(tài)進(jìn)行半定量檢測(cè)。（圖5）。

圖5 FIRSTtestTM 試劑盒作用原理圖

1.3 檢測(cè)方法

依照FIRSTtestTM試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。①樣品稀釋與 沉淀：將1 g糞便樣品與5 mL樣品稀釋緩沖液在樣品收集管中混合，搖勻后，放在試管架上靜置5 min；②樣品轉(zhuǎn)移：分別使用不同的移液管吸取0.5 mL的上清液至分析管（管內(nèi)含有勞森氏菌多克隆抗體包被的免疫磁珠）中，設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照組（陽(yáng)性對(duì)照為0.5 mL勞森氏菌菌液），搖勻后，將分析管放在試管架上孵育30 min；③磁珠分離與洗滌：將分析管轉(zhuǎn)移至磁體架上進(jìn)行磁頭分離，然后洗滌2次；④加入抗體－過(guò)氧化物酶共軛物：分別向分析管中加入0.5 mL的抗體－過(guò)氧化物酶共軛物，搖勻后，將分析管放置在試管架上孵育20 min；⑤磁珠分離與洗滌：同步驟③；⑥加入TMB顯色：分別向分析管中加入0.5 mL的TMB底物顯色液，并設(shè)立陰性對(duì)照（陰性對(duì)照管內(nèi)含有勞森氏菌多克隆抗體包被的免疫磁珠），搖勻后，孵育7 min；⑦結(jié)果判讀：將分析管放置在磁鐵架上，記錄顏色變化，陽(yáng)性呈藍(lán)色，陰性液體透明。

2 檢測(cè)結(jié)果

FIRSTtestTM是一種定性檢測(cè)勞森氏菌的方法，通過(guò)待檢樣品與陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照間的顏色對(duì)比（圖6），將回腸炎在該場(chǎng)的感染狀況匯總于表1。從檢測(cè)結(jié)果可發(fā)現(xiàn)：4周齡與6周齡各有1份樣品（33%）呈陽(yáng)性，8周齡的樣品胞內(nèi)勞森氏菌檢測(cè)呈陰性，而自10周齡保育仔豬起至14周齡的生長(zhǎng)豬及母豬的胞內(nèi)勞森氏菌檢測(cè)均呈陽(yáng)性，特別是14周齡與母豬樣品呈強(qiáng)陽(yáng)性。

3 分析與討論

目前回腸炎的主要診斷方法包括利用PCR、免疫過(guò)氧化酶法檢測(cè)糞便樣品中的勞森氏菌或采用ELISA、IFA等檢測(cè)胞內(nèi)勞森菌抗體[5]。本檢測(cè)采用的FIRSTtestTM檢測(cè)可在豬場(chǎng)現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)糞便中是否含有感染劑量的勞森氏菌，適用于規(guī)模化豬場(chǎng)回腸炎感染狀態(tài)與防控效果的自我評(píng)估。

回腸炎多發(fā)生于生長(zhǎng)育肥階段，但各場(chǎng)間感染時(shí)間存在差異[6]，所檢樣品來(lái)自于4周齡～14周齡的保育豬、生長(zhǎng)豬、后備母豬及經(jīng)產(chǎn)母豬。本次檢測(cè)時(shí)未刻意挑選有頑固性腹瀉的糞便進(jìn)行檢測(cè)。但豬群從第10周開始感染，說(shuō)明該場(chǎng)回腸炎處于亞臨床感染狀態(tài)。

圖6 該豬場(chǎng)不同周齡豬糞樣中胞內(nèi)勞森氏菌的檢測(cè)結(jié)果

表1 胞內(nèi)勞森氏菌感染分布狀況

由于該場(chǎng)母豬已感染胞內(nèi)勞森氏菌（強(qiáng)陽(yáng)性），母豬通過(guò)主動(dòng)免疫自身可產(chǎn)生抗勞森氏菌的抗體，并通過(guò)母乳傳遞給仔豬，使仔豬特別是哺乳仔豬獲得被動(dòng)免疫，抑制了胞內(nèi)勞森氏菌在哺乳仔豬腸上皮細(xì)胞內(nèi)的大量增殖。哺乳仔豬于3周齡斷奶，4周齡的糞便樣品胞內(nèi)勞森氏菌66.7%呈陰性。但斷奶后(3周齡后)，失去了母源抗體的保護(hù)。據(jù)Guedes等人[7]發(fā)現(xiàn)抗體陽(yáng)性的母豬所產(chǎn)仔豬的母源抗體可持續(xù)至5周齡，可保護(hù)哺乳仔豬與保育前期豬免受勞森氏菌感染。隨著母源抗體的消退，加之保育轉(zhuǎn)群應(yīng)激、環(huán)境溫度變化與衛(wèi)生消毒等生物安全措施不到位等，豬只自身抗病能力下降，促進(jìn)了胞內(nèi)勞森氏菌的繁殖，并通過(guò)糞便相互傳染，特別是衛(wèi)生消毒工作不徹底時(shí)，往往造成全群帶菌。故該場(chǎng)自4周齡與6周齡開始部分豬只（33%）被感染并排菌。10周以后的豬及母豬勞森氏菌的感染率高達(dá)100%。14周齡保育豬與母豬的糞便樣品顏色最深（超過(guò)陽(yáng)性對(duì)照的顏色），即說(shuō)明14周齡以后的糞便中的胞內(nèi)勞森氏菌濃度最高，豬只感染壓力大。母豬群回腸炎感染壓力大，是回腸炎重要的傳染源。

該場(chǎng)保育階段使用過(guò)強(qiáng)力霉素，使得8周齡的仔豬樣品完全呈陰性，此時(shí)體內(nèi)沒(méi)有足夠量的抗原使機(jī)體形成主動(dòng)免疫，故不能徹底地阻斷胞內(nèi)勞森氏菌在該場(chǎng)的傳播。10周齡時(shí)，胞內(nèi)勞森氏菌再次感染，并在14周齡時(shí)達(dá)到高峰，將嚴(yán)重影響飼料的轉(zhuǎn)化率、豬只生長(zhǎng)速度與經(jīng)濟(jì)效益。

4 防控建議

4.1 強(qiáng)化科學(xué)良好的飼養(yǎng)管理與衛(wèi)生消毒工作

1)盡量降低轉(zhuǎn)群并欄時(shí)的應(yīng)激，減少不良環(huán)境因素的影響，如：加強(qiáng)通風(fēng)，避免豬舍內(nèi)溫度的波動(dòng)，合理的飼養(yǎng)密度以提供足夠的飼喂空間與飲水供給。

2)在飼養(yǎng)管理上，實(shí)行全進(jìn)全出，批次管理，加強(qiáng)清潔與消毒工作，特別是轉(zhuǎn)群后批次間的棟舍的清掃，消毒與干燥等工作。

3)加強(qiáng)生物安全防范。特別應(yīng)避免因鳥類、工作人員及鼠類傳播病原菌。在引進(jìn)新的后備母豬或公豬時(shí)，應(yīng)做好隔離適應(yīng)工作，在確認(rèn)沒(méi)有回腸炎感染時(shí)或完成適宜的藥物干預(yù)后，尚可混群。

4.2 選擇適宜的藥物與策略性給藥方案

胞內(nèi)勞森氏菌屬于專一性的細(xì)胞內(nèi)病原菌，在藥物防控方面應(yīng)注意以下3點(diǎn)：第一，敏感藥物及其藥動(dòng)學(xué)。所選藥物應(yīng)在腸道上皮細(xì)胞內(nèi)有較高藥物濃度[8],如泰樂(lè)菌素、替米考星、泰妙菌素等。第二，用藥周期。用藥周期應(yīng)在14 d以上，最好可達(dá)到21 d；第三，用藥時(shí)間。在胞內(nèi)勞森氏菌感染高峰期到達(dá)之前給藥可取得良好效果。若給藥時(shí)間“太早”，豬群就無(wú)法產(chǎn)生針對(duì)胞內(nèi)勞森氏菌的主動(dòng)免疫，潛在暴發(fā)急性出血性回腸炎的風(fēng)險(xiǎn)。

泰樂(lè)菌素在控制回腸炎感染時(shí)，既抑制了胞內(nèi)勞森氏菌在腸壁的大量繁殖，又不影響動(dòng)物機(jī)體針對(duì)胞內(nèi)勞森氏菌形成主動(dòng)免疫，停藥后能依賴機(jī)體的主動(dòng)免疫進(jìn)行自我保護(hù)，因此泰樂(lè)菌素目前是全球控制回腸炎的首選藥物。結(jié)合本次檢測(cè)結(jié)果，對(duì)回腸炎的策略性投藥作如下推薦：

方案一，生長(zhǎng)育肥期:為了降低生長(zhǎng)豬回腸炎的感染壓力，建議在10周齡～12周齡使用磷酸泰樂(lè)菌素110 mg/kg拌料，連續(xù)3周，以后每月用一周，110 mg/kg拌料，直到上市前5 d。

方案二，分娩母豬群：為了降低環(huán)境中的勞森氏菌的感染壓力及阻斷勞森氏菌由母豬傳遞給仔豬，建議在產(chǎn)前1周至產(chǎn)后2周使用磷酸泰樂(lè)菌素（110 mg/kg拌料）。

方案三，后備母豬：為防止后備母豬引種時(shí)引入胞內(nèi)勞森氏菌，后備母豬混群后造成母豬群呈持續(xù)性高感染壓力狀態(tài)，建議在后備母豬群轉(zhuǎn)入到基礎(chǔ)母豬群前，利用磷酸泰樂(lè)菌素（110 mg/kg拌料）連續(xù)3周。使母豬群更健康，在降低回腸炎感染的同時(shí)，也可防控支原體，萎縮性鼻炎等呼吸系統(tǒng)疾病。

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