不同精子密度儀測定豬精子密度的準確性比對試驗

魏文棟，張 亮*，張 偉

（1.重慶市畜牧科學院，農業部養豬科學重點實驗室，重慶 402460；2.重慶隆生農業發展有限公司，重慶 401120）

2009年至今，中央每年安排至少6.25億元項目資金，對26個省（區、市）及大連、青島、黑龍江農墾和廣東農墾的400個生豬人工授精普及率30%以上、技術服務網絡比較健全、能繁母豬存欄2萬頭以上的縣（區、農場），補貼1650萬頭能繁母豬，支持開展豬人工授精工作。各地紛紛建立豬人工授精站，使得優秀公豬的基因能夠被迅速地推廣，同時也使得豬人工授精技術的發展取得了長足的進步。但是由于許多豬場對豬精子密度的測定多采取目測估計的方法，生產出來的精液產品質量不穩定，嚴重地影響了母豬的繁殖效率[1]。

所以我們就目前使用較多的進口的精液密度儀minitube SDM1[2]（圖1）、國產的721分光光度計（圖2）以及血細胞計數板（圖3）手工計數法測定精液密度的結果進行比較，希望對廣大從事豬鮮精生產的工作者的實際工作能有所幫助。

1 材料與方法

試驗于2012年7月12～30日在重慶市畜牧科學院養豬研究所育種豬場進行，試驗期間公豬舍溫度為25 ℃左右。試驗中分別用3種方法對8頭公豬的18份精液樣品進行密度測定。

圖1 minitube SDM1

圖2 分光光度計

1.1 精液采集

采用手握法進行采精，使用保溫杯收集精液。采集精液時用3～4層過濾紙濾除精液中的膠質等雜質，過濾的精液保存在集精杯中。

1.2 精液密度測定

采精后用minitube SDM1、分光光度計[3]以及手工計數法3種方法測定公豬精液密度，每種方法測定3次，并記錄其密度值。

圖3 血細胞計數板

1.3 數據處理

數據在excell 2010中進行準確性和精確性比較，然后在SPSS 17.0中進行配對樣本T檢驗，比較不同儀器測定結果與方法的相關性和差異。

2 結果與分析

從圖4可見Minitube SDM1和分光光度計測定精液的結果與手工計數法測定結果相比都偏大，且分光光度計的測定結果較大。

2.1 不同測定儀器的準確性和精確性比較

圖4 3種方法測定的精液密度分析

表1 不同檢測方法檢測結果相關性

表2 配對T檢驗結果

對不同儀器3次測定結果的標準差求平均值即對2種儀器的精確性作出判斷。Minitube SDM1與分光光度計測定精子密度的標準差分別為0.115和0.266，所以用Minitube SDM1測定精子密度的精確性高于分光光度計。

在精液密度檢測的方法中手工計數法被認為是金標準，所以我們在本次試驗中將手工計數法得到的結果看作真實值。將這2種儀器的測定結果與真實值之差求絕對值后，再求平均值，即可估計出該方法與真實值的接近程度。Minitube SDM1 與 分光光度計 的|x-μ|均值分別為0.73（億/mL）和1.32（億/mL），所以用Minitube SDM1測定精子密度的準確性高于分光光度計。

2.2 配對樣本的相關性

從表1表明2種檢測方法與手工計數的檢測結果都有極顯著的相關性（P<0.01），而其中分光光度法與手工計數法測出的結果有更高的相關性。

2.3 配對T檢驗結果

如表2所示，用Minitube SDM1和分光光度計的測定結果分別與手工計數法的測定結果進行配對T檢驗，其T值分別為2.51和5.562，且mintibe SDM1的P值均小于0.05卻大于0.01，而分光光度計的P值小于0.01。故mintibe SDM1測定結果與手工計數法的測定結果存在顯著差異，而和分光光度計測定結果與手工計數法的測定結果存在極顯著差異。

3 結論與討論

本實驗所用的2種儀器測定精子密度的原理都是利用精液光度值與空白液體光度值的比值來估計樣品中的精子密度[4]，故精液中雜質的存在同樣會使精液對光的通透性降低從而使得精子密度被過高地估計，這與我們得到的這2種儀器測定豬精子密度偏高的試驗結果相符。另外，我們發現當樣品中精子密度超過800萬/mL或小于100萬/mL時，Minitube SDM1會報36和35錯誤，也就是說Minitube SDM1測定的范圍為100萬～800萬/mL，所以在精液太濃或太稀的情況下不適合使用Minitube SDM1來測定精子密度。

雖然Minitube SDM1和分光光度計測定精子密度的原理相同，但前者的精確性和準確性都高于分光光度計的測定結果。這可能由于分光光度計測量精子密度是根據光度值和精子密度的對應關系來估計精子密度，精子樣本容量以及精液取樣的誤差都對測定結果產生直接的影響。配對T檢驗的結果表明這兩種儀器與手工計數法的測定結果均存在顯著差異，那么這2種儀器的測定結果最好作為精子密度測定的參考值。

而在豬人工授精的實踐中，在大型的人工授精站中每天有大量精液樣品需要測定的情況下，可以發揮Mnitube SDM1操作簡單、測定迅速的優點，在稀釋過程中適當減少稀釋倍數，使得精子數量達到輸精要求。然而Mnitube SDM1的耗材價格較高且不可重復使用，這是制約該儀器無法廣泛應用的主要因素。而對于規模較小的人工授精站或場內人工授精站，在檢測樣品數量較少的情況下，可以使用手工計數法，能夠得到更準確的測定結果。

[1] 王佳輝，高圣明，唐玲玲，等.應用種公豬精子密度圖片估算精子數方法的研究[J].養殖技術顧問，2010(5):211-212.

[2] Mario Baracaldo， Jim Ward，溫鵬，等.稀釋公豬精液的品質控制[J].今日養豬業， 2009(3):31-34.

[3] 張亮，郭宗義，潘紅梅，等.分光光度法快速測算公豬精子密度的研究[J].廣東農業科學，2012，5（39）：103-105.

[4] 張濤，張龍珍，莊平，等.分光光度法測定俄羅斯鱘精子密度標準的研究[J].海洋漁業，2009，31(1):87-91.