濕證患者外周血TCRVβ亞家族表達(dá)及意義探討

項 婷 林佑武* 張詩軍 陳澤雄 孫保國 胡 斌

（1 中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院，廣東 廣州 510080；2 中山大學(xué)達(dá)安基因診斷中心，廣東 廣州 510080）

濕證是臨床常見證候，隨著氣候環(huán)境、生活方式等的變化，“新”的致病因素、“新”的疾病不斷出現(xiàn)，其中不乏與濕證相關(guān)的“新”的疾病，如SARS、禽流感等疾病[1]。我們通過采用FQ-PCR技術(shù)檢測濕證患者外周血T淋巴細(xì)胞受體β鏈V區(qū)（TCRVβ）基因亞家族的表達(dá)， 以及采用化濕法治療后的變化，以TCRVβ亞家族的表達(dá)為切入點從免疫識別的角度來探討濕證病機(jī)的“蒙蔽性”特點，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

2例濕證患者均來自中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院中醫(yī)科門診，男性2例，年齡分別為25歲，36 歲，正常對照組1例，為男性，29歲。

1.2 樣本收集標(biāo)準(zhǔn)

①濕證的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《中醫(yī)證候規(guī)范》[2]一書中的濕證相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。②健康對照者來自健康體檢者，無特殊不適，檢查三大常規(guī)、肝腎功能 、腫瘤標(biāo)志物檢測、病毒標(biāo)志物檢測均正常。

1.3 治療方法

對濕證患者進(jìn)行化濕治療（藿樸夏苓湯加減），療程半年，治療前后抽血備檢，同時對健康對照組抽血備檢。組成：白蔻仁 10g ，川樸12g，茯苓15g，豬苓15g，澤瀉9g，杏仁9g，苡仁9g，藿香12g，法半夏15g，淡豆豉3g。服藥方法：每次100ml，3次/日。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 癥狀、體征改善情況

主要觀察脘悶腹脹，頭重身肢困倦，口粘淡或甜膩，飲食減少，面色淡黃垢濁，口渴不欲飲或喜熱飲，大便溏泄等主要癥狀和舌苔白厚膩等體征變化，根據(jù)主要癥狀、體征輕重程度—輕(+)、中(++)、重(+++)評估。

1.4.2 TCRV β 基因表達(dá)的檢測

熒光定量PCR檢測TCRVβ表達(dá)[3]。

2 結(jié) 果

2.1 癥狀、體征變化情況

2例濕證患者治療前后癥狀、體征變化比較，治療后主癥全部消失，主舌、主脈、或見癥都有明顯改善。2例濕證患者治療后，按照濕證診斷標(biāo)準(zhǔn)均為非濕證者。見表1。

表1 治療前后癥狀、體征變化比較

2.2 TCRVβ亞家族表達(dá)水平變化情況（數(shù)值結(jié)果）

2例濕證患者治療前較正常對照組TCRVβ表達(dá)均低下的亞家族是TCRVβ4、TCRVβ5.1、TCRVβ8、TCRVβ14、TCRVβ21.1、TCRVβ21.3、TCRVβ23；2例治療前較正常對照組TCRVβ表達(dá)均偏高的亞家族是TCRVβ3、TCRVβ16、TCRVβ18、TCRVβ24。2例治療前TCRVβ表達(dá)均偏低，經(jīng)治療后表達(dá)均升高的亞家族是TCRVβ4、TCRVβ14、TCRVβ21.3、TCRVβ23；2例治療前TCRVβ表達(dá)均偏高，經(jīng)治療后表達(dá)均降低的亞家族是TCRVβ3和TCRVβ18。見表2。

表2 治療前與正常組比較

3 討 論

雖然現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對TCRVβ基因譜系與某些疾病發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性的研究也越來越受重視，但主要集中于對某一疾病相關(guān)的病原體或其代謝產(chǎn)物、或某一相關(guān)抗原的識別上，而對多種致病因素的條件下其變化如何則研究很少，如濕證所包含的可能不僅僅是某一組病原體或某一相關(guān)抗原的分子模式，還可能包括幾組病原體或多種相關(guān)抗原所公有的分子模式。

我們以前的研究發(fā)現(xiàn)濕證患者細(xì)胞免疫功能降低，特別是慢性乙型肝炎濕證患者激活和功能T淋巴細(xì)胞亞群水平紊亂，以及 T細(xì)胞受體可變區(qū)β7（TCRVβ7）表達(dá)低下與T細(xì)胞免疫功能障礙密切相關(guān)，導(dǎo)致了病情的遷延發(fā)展，經(jīng)化濕法治療后濕證不同程度減輕，部分HBV-DNA、HBeAg陰轉(zhuǎn)且肝功能水平正常的患者TCRVβ7基因表達(dá)明顯增強(qiáng)、功能T淋巴細(xì)胞亞群水平明顯升高，提示優(yōu)勢克隆參與HBV的清除及細(xì)胞毒作用，化濕法清除病毒的療效，可能與其提高T細(xì)胞受體識別功能和功能T淋巴細(xì)胞亞群水平有關(guān)，因此有必要從免疫識別角度深入開展?jié)裥爸虏C(jī)理的研究[3,4]。

本研究發(fā)現(xiàn)，在濕證患者TCRVβ亞家族表達(dá)中，TCRVβ4、TCRVβ5.1、TCRVβ8、TCRVβ14、TCRVβ21.1、TCRVβ21.3、TCRVβ23表達(dá)低下，TCRVβ3、TCRVβ16、TCRVβ18、TCRVβ24表達(dá)偏高；經(jīng)化濕治療后表達(dá)上調(diào)的亞家族是TCRVβ4、TCRVβ14、TCRVβ21.3、TCRVβ23，表達(dá)降低的亞家族是TCRVβ3和TCRVβ18，提示濕證患者TCR Vβ譜系表達(dá)紊亂，經(jīng)化濕治療后，TCR Vβ譜系不同程度上得以調(diào)節(jié)，提示化濕中藥對濕證患者可能通過調(diào)節(jié)TCR Vβ的表達(dá)，改善免疫識別，激活有效免疫反應(yīng)來清除外來邪氣。

綜上所述，TCR Vβ的表達(dá)異常可能是濕邪的“蒙蔽性”所致， 進(jìn)而導(dǎo)致濕邪致病患者免疫功能障礙。通過祛濕治療之后， 濕邪的“蒙蔽性”逐漸減輕或消退， TCR Vβ的表達(dá)得以改善，激活細(xì)胞免疫功能而驅(qū)邪外出。由于濕證包含的分子模式的多樣性和濕證TCRVβ譜系表達(dá)的復(fù)雜多變性，以及本研究的例數(shù)尚少，有必要在今后的研究中采用病證結(jié)合等方式來分層研究濕證TCRVβ譜系表達(dá)，揭示濕邪致病的“蒙蔽性”特點。

[1]張明雪,曹洪欣,翁維良,等.論濕邪在SARS發(fā)病中的作用[J].中醫(yī)藥學(xué)刊,2006,24(5):773-776.

[2]鄧鐵濤,鄧中炎,羅益寬.中醫(yī)證候規(guī)范[M].廣東:廣東科技出版社,1990:145-146.

[3]董霄,林佑武,張詩軍.慢性乙型肝炎濕證患者外周血TCRVβ亞家族譜系表達(dá)及意義探討[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2010,16(10):179-182.

[4]張詩軍,陳澤雄,林佑武,等..化濕中藥對慢性乙型肝炎濕證患者激活和功能T淋巴細(xì)胞亞群水平的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2006,26(12):1078-1081.