結腸癌組織中BRMS1的表達及臨床意義

(郴州市第一人民醫院，湖南郴州 423000)

乳腺癌轉移抑制基因1(BRMS1)是新發現的一種腫瘤轉移抑制基因(MSG)，研究證實其并不影響腫瘤形成，而僅僅是抑制腫瘤細胞向遠隔部位轉移。BRMS1抑制乳腺癌轉移的功能在其發現時就已十分明確?，F有的資料顯示其還與多種高侵襲惡性腫瘤的浸潤轉移密切相關，然而其在結腸癌中的表達情況目前卻未見明確報道。我們收集了本院2007年2月～2010年8月結腸癌根治標本，通過檢測BRMS1蛋白在結腸癌組織中的表達，探討其在結腸癌發生、發展中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 手術切除經病理確診為結腸癌且臨床資料完整的存檔蠟塊98份，患者術前均未行化療和放療，其中男54例，女44例;年齡32～73歲，平均54歲;其中年齡≥60歲46例，＜60歲52例;腫瘤直徑≥5 cm 44例，＜5 cm 54例;高分化腺癌32例、中分化腺癌48例、低分化腺癌18例;有淋巴結轉移60例，無淋巴結轉移38例。腫瘤浸潤達深肌層39例(淺層組)，達漿膜層或漿膜外59例(深層組)。同時選取距離癌組織5 cm以上正常結腸組織作為正常對照組。BRMS1兔抗人多克隆抗體購自上海滬尚生物科技有限公司，工作濃度1∶200，即用型非生物素免疫組化EliVision TM plus免疫組化檢測試劑盒，購自福州邁新生物技術開發公司。DAB顯色試劑盒，購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.2 BRMS1基因檢測 每例標本均作4 μm厚連續切片2張，1張行HE染色，另1張進行BRMS1免疫組織化學染色。以福州邁新生物工程有限公司提供的已知陽性片作對照，PBS取代一抗作陰性對照。免疫組織化學染色方法參照即用型非生物素免疫組化EliVision TM plus免疫組化檢測試劑盒說明書，DAB顯色，蘇木素復染，中性樹脂封片，光鏡觀察。結果判定:BRMS1陽性表達位于胞質內，染色均呈淡黃色至棕黃色顆粒，顯微鏡下見有呈棕黃色細顆粒狀染色的細胞為陽性細胞。在高倍鏡下(×400)隨機選取5個視野，選取染色較為集中的區域計數陽性細胞數，陽性細胞數 ＜10%為(－)，10% ～25%為(+)，26% ～50%(++)，＞50%為(+++)，(++)和(+++)為陽性。分析BRMS1表達與結腸癌臨床病理參數的關系。

1.3 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件，對所得數據采用χ2檢驗。檢驗水準α=0.05。

2 結果

結腸癌組織及癌旁組織BRMS1陽性率分別為32.65%、91.84%，二者比較，P＜ 0.01。結腸癌中BRMS1的蛋白表達與臨床病理因素的關系見表1。

3 討論

腫瘤侵襲轉移對患者預后起重要作用，常為患者臨床的主要死因，其發生發展是一個極其復雜的多基因調控和多步驟發展的過程，有腫瘤細胞與宿主環境的相互影響和作用，還涉及到一系列腫瘤侵襲轉移相關基因(癌基因、抑癌基因、腫瘤轉移抑制基因等)結構和功能的異常。腫瘤轉移抑制基因是近年來隨著分子克隆技術的發展而認識和提出的一類與腫瘤轉移有關的基因，其定義是抑制自發和大體上可見的腫瘤轉移而不影響原發腫瘤生長的基因，近年來倍受關注。從1988年發現首個腫瘤轉移抑制基因NM23至今，共有數十個基因被確定為腫瘤轉移抑制基因。BRMS1是2000年由賓夕法尼亞州立大學Hershey醫學中心Welch DR研究組發現的一種新的抑癌基因，因其能顯著降低乳腺細胞的轉移能力而得名。現有的研究證實BRMS1不但與乳腺癌的侵襲轉移有關［1，2］，還參與了多種惡性腫瘤的侵襲轉移調控。Cromer等［3］通過對下咽癌基因微陣列分析發現BRMS1與下咽癌的轉移相關;穩定轉染BRMS1基因的小鼠和人的黑色素瘤［4，5］、膀胱癌細胞［6］及骨肉瘤細胞［7］轉移能力顯著降低;趙曉蘭等［8］發現BRMS1在卵巢癌和子宮內膜癌［9］等實體腫瘤中表達下調或缺失與卵巢癌和子宮內膜癌的浸潤和轉移密切相關。本研究結果顯示，結腸癌中BRMS1的表達明顯低于癌旁正常結腸組織，BRMS與腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移和臨床分期呈明顯的負相關，提示BRMS1在結腸癌的侵襲轉移中亦發揮重要的調節作用，至于具體的作用機制仍有待于進一步研究。研究顯示BRMS1基因并不影響乳腺癌細胞粘附到細胞外基質成分的能力、體外生長率、基質蛋白水解酶和乙酰肝素酶的表達，而對BRMS1氨基酸序列的分析提示BRMS1蛋白與其他的一些蛋白存在相互間的作用。Meehan等［11］發現BRMS1與視網膜母細胞瘤結合蛋白1和mSin3-組氨酸去乙酰化酶復合物(mSin3-HDAC)有相互作用，推測BRMS1可能通過沉默轉移促進基因或通過負相調節組蛋白脫乙酰作用而上調MSG的表達來抑制癌細胞的轉移。近來研究發現BRMS1抑制腫瘤侵襲轉移的能力與下調核因子κB依賴型的轉移相關基因［12］及細胞內磷酸肌醇信號，特別是4，52二磷酸肌醇的表達水平存在一定的關系。研究發現，高侵襲力的乳腺癌細胞株MDA-MB-231細胞轉染BRMS1基因后，細胞表面的超微結構顯著改變，微絨毛顯著減少，絲狀偽足縮短，提示BRMS1基因抑制腫瘤細胞侵襲、轉移與細胞表面超微結構改變有關。

表1 BRMS1表達與結腸癌臨床病理參數的關系(n)

綜上所述，BRMS1在結腸癌組織中的低表達可促進浸潤深度、淋巴結轉移。檢測結腸癌中BRMS1的表達情況有助于判斷結腸癌的侵襲轉移情況和預后，對BRMS1深入、廣泛的研究將對包括結腸癌在內的許多惡性腫瘤轉移的干預性治療提供重要依據。

［1］唐魯兵，高海東，劉煥濤，等.BRMS1 mRNA在乳腺癌中的表達與腋淋巴結轉移的關系［J］.山東大學學報(醫學版)，2005，43(12):1163-1165，1169.

［2］何雄斌，吳海燕，崔明.轉移相關基因BRMS1和MMP-9在乳腺癌中的表達及意義［J］.實用癌癥雜志，2009，24(4):351-354.

［3］Cromer A，Carles A，Millon R，et al.Identification of genes associated with tumorigenesis and metastatic potential of hypopharyngeal cancer by microarray analysis［J］.Oncogene，2004，23(14):2484-2498.

［4］Shevde LA，Samant RS，Goldberg SF，et al.Suppression of human melanoma metastasis by the metastasis suppressor gene，BRMS1［J］.Exp Cell Res，2002，273(2):229-239.

［5］孫謙，江浩.BRMS1基因在腫瘤中的研究進展［J］.中華全科醫學，2011，9(6):962-964.

［6］Seraj MJ，Harding MA，Gildea JJ，et al.The relationship of BRMS1 and RhoGD12 gene expression to metastatic potential in lineage related human bladder cancer cell lines［J］.Clin Exp Metastasis，2000，18(6):519-525.

［7］龔維明，宋宏亮，徐鵬，等.轉移抑制基因BRMS1mRNA在骨肉瘤細胞株中的表達及臨床意義的研究［J］.中國骨腫瘤骨病，2006，5(6):353-355.

［8］趙曉蘭，王平.SATB1、BRMS1在卵巢漿液性腺癌中的表達及其與臨床病理特征的關系［J］.四川大學學報(醫學版)，2011，42(1):82-85，105.

［9］余德榮，游力，許曉群，等.BRMS1 mRNA和CD44V6 mRNA在子宮內膜癌組織中的表達及意義［J］.中華腫瘤防治雜志，2007，14(4):287-290.

［10］Meehan WJ，Samant RS，Hopper JE，et al.Breast cancer metastasis suppressor 1(BRMS1)forms complexes with retinoblastomabinding protein 1(RBP1)and the mSin3 histone deacetylase complex and represses transcription［J］.J Biol Chem，2004，279(2):1562-1569.

［11］Cicek M，Fukuyama R，Welch DR，et al.Breast cancer metastasis suppressor 1 inhibits gene expression by targeting nuclear factor-kappaB activity［J］.Cancer Res，2005，65(9):3586-3595.