鼻咽癌組織中MAD2表達及臨床意義

(華中科技大學同濟醫學院附屬孝感醫院，湖北孝感 432100)

細胞周期“質控機制”的最后關卡—紡錘體檢查點(SAC)的功能缺陷可引起細胞染色體不穩定即形成非整倍體及多倍體，進而引起細胞惡變，是當今腫瘤發生與治療的研究熱點。研究發現，有絲分裂阻滯缺陷蛋白2(MAD2)作為檢查點的重要成員之一，其表達異常與人類多種腫瘤的發生、發展密切相關，而其與鼻咽癌的相關性研究鮮見報道。2005年1月～2011年12月，我們采用免疫組化EliVision二步法檢測了鼻咽癌組織中的MAD2表達情況，旨在探討其在鼻咽癌發生、發展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2005年1月～2011年12月我院手術切除的初治鼻咽癌組織標本60份(鼻咽癌組)，患者男39例，女21例;中位年齡48歲，其中＜48歲31例。所有標本均經病理診斷(低分化鱗癌)，且術前均末接受放化療及其他抗癌治療。按國際抗癌聯盟(UICC)1997年標準分期，T1期10例、T2期19例、T3期21例、T4期10例;臨床分期Ⅰ期3例，Ⅱ期14例，Ⅲ期27例，Ⅳ期16例。CT或MRI檢查顯示27例有顱底破壞，根據臨床癥狀判定18例有顱神經損傷。另選同期門診體檢者慢性鼻咽炎組織標本25份(鼻咽炎組)，兩組一般資料無統計學差異，具有可比性。

1.2 MAD2陽性表達檢測 所有組織標本均用10%中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚切片。免疫組化染色按ElivisionTMsuper試劑盒操作說明書進行，鼠抗人MAD2單克隆抗體(購自Santa Cruz公司)的工作濃度為1∶50，以已知陽性切片做陽性對照，用PBS代替一抗做陰性對照。結果判斷標準:與陰性對照相比，細胞質或細胞核出現淡黃色至棕黃色產物判斷為MAD2陽性。每張切片隨機觀察10個高倍鏡視野(×400)，每個視野計數100個細胞，計數陽性細胞。陽性細胞＞10%為陽性，≤10%為陰性。

1.3 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件。數據比較采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 MAD2陽性表達 鼻咽癌組及鼻咽炎組MAD2 陽性表達率分別為 51.7%(31/60)、80.0%(20/25)，兩組比較 P ＜0.05。

2.2 MAD2表達與鼻咽癌臨床病理參數的關系見表1。

表1 MAD2表達與鼻咽癌臨床病理參數的關系

3 討論

在細胞有絲分裂的過程中，有一個由多種蛋白組成的紡錘體檢查點(又稱有絲分裂檢查點)，能準確地識別紡錘體微管與染色體動粒的連接，從而保證染色體的正常分離，染色體不穩定即形成非整倍體及多倍體，是癌前細胞及癌細胞本質特征之一［1］。MAD2蛋白是紡錘體檢查點的重要成員之一，可通過磷酸化和去磷酸化來調節紡錘體微管和染色體動粒的連接作用，MAD2的異常表達可能導致紡錘體檢查點的功能減弱或消失，無法監控腫瘤細胞內異常的微管與動粒結合，使染色體出現異常分離，造成細胞非整倍體異常而導致腫瘤的發生發展［2］。

本研究發現，MAD2在鼻咽癌組中的表達明顯低于鼻咽炎組，提示MAD2的表達缺失可能與鼻咽癌癌變的發生有關。這與一些學者在食管鱗癌、卵巢癌等中的研究結果相似［3，4］。而另外一些學者發現，在肝癌、肺癌等中MAD2的陽性表達顯著高于正常組織［5，6］。此外 Sotillo 等［7］發現，使鼠體內MAD2高表達后伴有較高的非整倍體率，而通過RNA干擾MAD2表達后亦出現一定非整倍體率，MAD2高表達的鼠體內更易患不同類型腫瘤并伴較高非整倍體率。這些說明，一定量的MAD2是維持正常細胞有絲分裂所必須的，MAD2的上調或下調都可誘發染色體失衡而導致腫瘤發生，MAD2在人類腫瘤中的表達失衡(上調或下調)可能與腫瘤的遺傳學背景不同有關，但具體機制尚需進一步研究。本研究還發現，MAD2陽性表達與鼻咽癌臨床分期相關，提示MAD2低表達在鼻咽癌的發展過程中起促進作用。其機制可能為MAD2低表達提高了抑癌基因如p53、Rb等的缺失率，使紡錘體分離時產生的非整倍體細胞經G0期進入G1期，抑癌基因的缺失導致細胞分裂無法阻止在G1期，使非整倍體細胞逃避了凋亡并進一步發展［8］。

總之，鼻咽癌組織中MAD2呈低表達，與鼻咽癌的發生、發展有關;MAD2可為鼻咽癌的早期診斷、病情及預后判斷提供依據。

［1］Barbosa J，Nascimento AV，Faria J，et al.The spindle assembly checkpoint:perspectives in tumorigenesis and cancer therapy［J］.Front Biol，2011，6(2):147-155.

［2］Michel L，Benezra R，Dlaz-Rodriguez E.MAD2 dependent mitotic checkpoint defects in tumorigenesis and tumor cell death:a double edged sword［J］.Cell Cycle，2004，3(8):990-992.

［3］姚伶俐，張洪福，李昊，等.食管癌組織中Mad2蛋白的表達［J］.安徽醫科大學學報，2006，41(5):519-520.

［4］Furlong F，Fitzpatrick P，O'toole S，et al.Low MAD2 expression levels associate with reduced progression-free survival in patients with high-grade serous epithelial ovarian cancer［J］.J Pathol，2012，226(1):746-755.

［5］Zhang SH，Xu AM，Chen XF，et al.Clinicopathologic significance of mitotic arrest defective protein 2 over expression in hepatocellular carcinoma［J］.Human Pathology，2008，39(7):1827-1834.

［6］Kato T，Daigo Y，Aragaki M，et al.Overexpression of MAD2 predicts clinical outcome in primary lung cancer patients［J］.Lung Cancer，2011，74(1):124-131.

［7］Sotillo R，Hernando E，Díaz-Rodríguez E，et al.Mad2 Overexpression promotes aneuploidy and tumorigenesis in mice［J］.Cancer Cell，2007，11(1):9-23.

［8］Schvartzman JM，Duijf PH，Sotillo R，et al.Mad2 is a critical mediator of the chromosome instability observed upon Rb and p53 pathway inhibition［J］.Cancer Cell，2011，9(6):701-714.