抑制素B對卵巢儲備功能的預測作用

程 萍 楊 飚 張麗萍

1.湖北醫藥學院附屬太和醫院婦產科，湖北 十堰 442000；2.湖北醫藥學院，湖北 十堰 442000

抑制素B （inhibin B，INHB） 是轉化生長因子 β（transforming growth factor-beta，TGF-β）超家族的成員之一，是由人類性腺分泌的重要激素，女性體內INHB僅在卵巢的顆粒細胞中表達。近年來一系列的研究表明INHB對生殖系統具有內分泌、自分泌和旁分泌作用，生理狀況下的INHB參與了人類配子發生[1]、卵泡發育[2]、卵子成熟[3]、胚胎發育[4]等生殖過程的調節，與人類生殖過程密切相關。此外，INHB還參與了子宮內膜異位癥[5]、男女性腺腫瘤[6-7]、多囊卵巢綜合征（PCOS）[8-9]、卵巢過度刺激綜合征（OHSS）[10]等疾病的病理生理過程。然而，我們對INHB在IVF-ET（體外受精-胚胎移殖）促排卵過程中的動態變化、它與卵巢儲備功能之間的關系以及它在IVF-ET助孕過程中的可能作用機制卻了解甚少。

本研究對行IVF-ET的不孕患者體液中INHB的水平進行測量，了解血清及卵泡液中INHB水平在超促排卵（COH）過程中的動態變化及它與卵巢儲備功能之間的關系，以進一步了解體液中INHB在IVF-ET過程中的作用及可能的調節機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2009年1月～2010年10月在湖北醫藥學院附屬太和醫院因輸卵管因素行IVF-ET的不孕患者72例 （72個周期）作為研究對象，年齡 24～35 歲，平均（29.83±3.75）歲。

1.2 方法

1.2.1 IVF-ET過程

1.2.1.1 COH過程GnRH-a長方案 從上一個月的黃體中期開始使用GnRH-a達必佳（Decapeptyl，瑞士輝凌制藥有限公司）或達菲林（Diphereline，法國博福-益普生工業公司）0.05～0.1 mg，每日1次，皮下注射，至月經第3～5天垂體降調節達標后，加用促性腺激素（Gn）Gonal-F（r-hFSH，瑞士雪蘭諾大藥廠）和（或）HMG（麗珠集團麗寶生物化學制藥有限公司）至注射人絨毛膜促性腺激素（hCG）日。促排卵期間B超監測卵泡的發育情況，并在卵泡中期（開始促排卵后7～8 d）、注射hCG 日、取卵（OPU）日、胚胎移植（ET）日、ET 后 3 日（ET+3）繼續監測血清雌二醇（E2）、孕酮（P）、促黃體素（LH）水平。 當①B 超監測卵泡直徑達 18 mm×1個，16 mm×2個，14 mm×3個；②子宮內膜≥9 mm；③宮頸瞳孔現象明顯，黏液拉絲度達10 cm，羊齒狀結晶達Ⅲ級時停用Gn，于當晚9時注射hCG 10 000 IU，35 h后經陰道B超引導下穿刺取卵。

1.2.1.2 常規IVF-ET移植 所有患者每周期均移植2個優質胚胎；黃體酮40～60 mg肌注行黃體期支持治療。

1.2.2 標本的收集

血清標本分別于卵泡早期（月經第3天，促排卵前），卵泡中期（開始促排卵后7～8 d）、注射hCG日、OPU日、ET日、ET+3日收集，3 000 r/min，10 min離心后取上清，置于-20℃冰箱保存待用。取卵時記錄卵泡數，撿卵后收集第1管卵泡液（盡可能不含血），3 000 r/min，10 min離心，去除細胞等有形成分，取上清并置于-20℃冰箱保存待用。

1.3 激素及血清INHB水平的測定

均采用ELISA檢測試劑盒 （diagnostic system laboratories，Inc.USA）進行檢測。INHB理論的靈敏度或最小檢測值為7 pg/mL，檢測范圍為10～531 pg/mL。按試劑盒說明書進行檢測。

1.4 統計學方法

采用統計軟件SPSS 11.0對實驗數據進行分析，計量資料數據以均數±標準差（）表示，進行Mann-whitney U檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義，以P<0.01為差異有高度統計學意義。

2 結果

2.1 血清INHB濃度在COH過程中的變化

在COH過程中，隨著卵泡的逐漸發育成熟，血清中INHB濃度從卵泡早期開始迅速升高，卵泡中期達峰值，之后逐漸下降，卵泡早期、卵泡中期、hCG日及OPU日的血清INHB濃度分別為 [（52.38±88.96）pg/mL、（979.18±606.89）pg/mL、（809.09±532.97）pg/mL、（354.06±228.25）pg/mL]， 差異均有高度統計學意義（均P＜0.01）。見圖1。

圖1 血清中INHB濃度在COH過程中的變化

2.2 取卵日卵泡液及血清中INHB濃度比較

取卵日卵泡液 INHB濃度為 （1 670.21±42.65）pg/mL，遠遠高于血清中INHB濃度（354.06±228.25）pg/mL，兩者比較差異有高度統計學意義（P＜0.01）。

2.3 不同時期血清及卵泡液INHB濃度在不同獲卵數組間的濃度比較

隨著獲卵數的增加，OPU日前不同時期血清INHB濃度明顯升高，不同獲卵數組間差異均有統計學意義 （均P＜0.05），而OPU日血清INHB在不同獲卵數組間差異無統計學意義 （P＞0.05）；OUP日卵泡液中INHB濃度隨著獲卵數增加而降低，不同獲卵數組間差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

3 討論

卵巢的儲備功能是女性生育能力的重要標志，而卵巢中存留的健康卵泡數量和質量決定了卵巢的儲備功能。在IVF-ET過程中，卵巢對促性腺激素的反應能力，是卵巢儲備功能的一個重要指標，而獲卵數是反映卵巢反應能力即儲備功能的金指標，適宜的獲卵數既是提高IVF妊娠率的前提，又可預防OHSS的發生，因此，評價IVF助孕患者卵巢儲備功能及反應性具有很高的臨床價值，既有利于指導醫生及早調整COH方案或取消助孕周期，以提高IVF妊娠率，又可估計預后，減少并發癥。因此，為了更好地評價儲備功能，一些與卵巢反應能力相關的細胞因子已逐漸成為人們研究的熱點。

INHB作為TGF-β家族的成員之一，是由一個α亞單位和一個β亞單位通過二硫鍵連接形成的二聚體糖蛋白激素，其分子量約為32 kD，女性體內的INHB主要由卵巢中、小竇狀卵泡的顆粒細胞分泌，人黃體組織也可產生INHB。INHB的分泌主要受促性腺激素的調節，促卵泡激素（FSH）、激活素（activin）、胰島素樣生長因子（IGFs）可促進INHB的分泌；而表皮生長因子（EGF）、轉化生長因子 α（TGF-α）、制卵泡素（follistatin，FS）[11]則抑制 INHB的分泌。在正常的月經周期中，血清抑制素B水平呈周期性變化：在卵泡早期逐漸上升，卵泡中期達高峰，排卵后逐漸下降。

組織學研究發現在卵泡發育的不同階段，人和禽類卵巢中INHB表達呈顯著變化[12]，提示INHB參與了卵泡募集和發育。本研究對行IVF-ET的不孕患者COH過程中卵泡發育不同時期（卵泡早期、卵泡中期、hCG日及OPU日）的血清INHB水平進行測定，發現在COH過程中，隨著卵泡的逐漸發育成熟，血清中的INHB水平從卵泡早期開始迅速升高，卵泡中期達峰值，之后逐漸回落，不同時期的血清INHB水平差異有高度統計學意義（P＜0.01），這一結果從生化角度表明了在IVFCOH過程中血清INHB水平與卵泡的募集及發育的密切關系。INHB可能以內分泌方式特異性作用于腦垂體調節FSH分泌，參與卵泡的生長發育。

表1 不同時期血清及卵泡液INHB濃度在不同獲卵數組間濃度比較（）

表1 不同時期血清及卵泡液INHB濃度在不同獲卵數組間濃度比較（）

時間 獲卵數0～9個 獲卵數10～15個 獲卵數≥16個 P值卵泡早期血清INHB卵泡中期血清INHB hCG日血清INHB OPU日血清INHB OPU日卵泡液INHB周期數495.58±324.52 495.58±314.52 510.72±299.95 392.05±257.52 1 708.65±58.33 24 961.43±637.74 937.55±667.04 790.06±617.64 355.72±277.02 1 666.30±59.48 30 1 653.78±467.86 1 563.07±453.12 1 279.88±421.35 433.28±166.65 1 649.35±31.19 18＜0.05＜0.05＜0.05＞0.05＞0.05

比較OPU日血清及卵泡液中INHB水平，發現血清中的INHB水平明顯低于同時期卵泡液中的水平，差異有高度統計學意義（P＜0.01），證明在卵巢局部存在高濃度的INHB，同時也進一步證實了卵巢是循環中INHB的主要來源。

正常月經周期中血清INHB水平來源于中小竇狀卵泡的顆粒細胞，隨著顆粒細胞增生和竇卵泡數目增加，卵泡期INHB水平隨之升高，直接反映了卵巢的儲備功能。有研究[13]表明月經第3天血清INHB水平與FSH及FSH/LH呈負相關，與hCG日E2水平、獲卵數、優質胚胎數及妊娠率呈正相關。Fried等[14]提出取卵前2 d血清INHB水平可預測獲卵數，Dzik等[15]實驗結果也有類似發現。由此看出，盡管血清INHB濃度與卵巢儲備功能的關系此前已有研究，但卻存在頗多爭議。本研究結果發現在整個COH期間，OPU日前，隨著獲卵數的增加，不同時期血清INHB濃度隨之顯著增高，不同獲卵數組間差異均有統計學意義（均P＜0.05），而OPU日血清及卵泡液中INHB水平在不同獲卵數組間差異無統計學意義（P＞0.05）；提示Gn在促排卵過程中，血清INHB水平可以預測IVF促排卵后的獲卵數目，并且血清INHB對卵巢儲備功能的預測作用在促排卵開始就已發生[16]。卵泡早期即COH前的基礎血清INHB水平和卵泡中期即Gn促排卵7～8 d后的血清INHB水平對獲卵數具有相似的預測價值（P值分別為0.006 606和0.006 68），而hCG日血清INHB水平的預測價值相對較低（P=0.019 008），卵泡液INHB水平則不能預測獲卵數。

綜上所述，在IVF-ET助孕過程中，INHB主要通過內分泌方式在卵泡期參與生殖調節，COH各個時期的血清INHB水平均能反映卵巢的儲備功能，COH前的基礎血清INHB水平和卵泡中期即Gn促排卵7～8 d后的血清INHB水平對獲卵數具有相似的預測價值，因此基礎血清INHB可以作為獨立的、最早的卵巢儲備功能預測因子。這對于醫生及早調整COH方案，預防并發癥的發生，提高IVF-ET成功率具有重要的臨床指導作用。

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