高效液相色譜法測定橘紅痰咳液中柚皮苷的含量

2012-07-28 03:21:30李慧

中國醫藥導報 2012年5期

李慧

山東省淄博市婦幼保健院藥劑科，山東淄博 255000

橘紅痰咳液為本院制劑，由化橘紅、蜜炙百部、苦杏仁、茯苓、制半夏、五味子、甘草7味藥物組成，具有理氣祛痰、潤肺止咳之功效，用于感冒、支氣管炎、咽喉炎引起的痰多咳嗽、氣喘等。其中化橘紅為君藥，柚皮苷為化橘紅的主要有效成分之一，參照相關文獻[1-6]，本文通過系統的方法學考察，建立了該制劑中柚皮苷的HPLC含量測定方法，并在此基礎上測定了柚皮苷的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀，包括Lab Alliance型恒流泵、Waters966二極管陣列檢測器[活德國際貿易（上海）有限公司]、Millen nium 32 色譜工作站，Phenomenex-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），BP211D 型分析天平（德國賽多利斯），FOEA26810D 型純水機（Millipore公司）。

1.2 試藥

柚皮苷對照品（購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110722-200610），橘紅痰咳液樣品（自制，批號：100801、100802、100803），缺少化橘紅的陰性對照樣品（自制）；水為超純水，甲醇為色譜純（國藥集團化學試劑有限公司），其余試劑均為分析純（國藥集團化學試劑有限公司）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamosil-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-醋酸-水（38.0∶0.5∶62.0）；檢測波長：283 nm；柱溫：40℃；流速：1.0 mL/min；理論塔板數按柚皮苷峰計算不低于3000。

2.2 對照品溶液的制備

取110℃減壓干燥至恒重的柚皮苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含45 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取供試品1 mL，加甲醇稀釋并定容至25 mL，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 陰性溶液的制備

按照供試品溶液的制備方法，取缺少化橘紅的陰性對照樣品，制備成陰性對照溶液。

2.5 干擾試驗

按照“2.1”項下的色譜條件，吸取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，有色譜峰出現，而陰性對照液無相應峰出現，表明陰性無干擾。見圖1。

2.6 線性關系考察

分別吸取柚皮苷對照品溶液（44.8 μg/mL）2、4、6、8、10、12、16、20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積。以峰面積（Y）為縱坐標，進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程為：Y=12162X-27556，r=0.9999。表明柚皮苷在89.6～896.0 μg范圍內，峰面積值與進樣量（μg）之間線性關系良好。

2.7 精密度試驗

精密吸取柚皮苷對照品溶液（44.8 μg/mL）10 μL，按“2.1”項下色譜條件，重復進樣6次，測得柚皮苷峰面積積分值分別為 5400267、5413236、5440989、5455261、5454005、5411008，平均 5429128，RSD=0.44%（n=6），表明儀器的精密度良好。

圖1 柚皮苷對照品、供試品陰性對照溶液、樣品色譜圖

2.8 穩定性試驗

取同一供試液（批號：100801），分別于制備后 0、1、2、3、4、5、6 h進樣，測得樣品中柚皮苷峰面積值分別為4886932、4846555、4855303、4830029、4831674、4815527、4801096，平均4838159，RSD=0.58%，表明供試品溶液在制備后6 h內基本穩定。