Maspin在肝細胞癌中的表達及其與Caspase－3的關系

蘇州大學醫學院附屬常州腫瘤醫院普外科（常州213001） 張 駿

原發性肝癌（HCC）是最常見的惡性腫瘤之一，其發病率、病死率明顯增加。Maspin是1994年Zou等［1］用消減雜交的方法在比較正常乳腺與乳腺癌組織時發現的一種抑癌基因，是絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族成員之一。Maspin在乳腺、前列腺、角膜、卵巢、小腸等人體器官組織中有高水平表達，而在相應的惡性腫瘤中表達下調或不表達，提示它可作為腫瘤轉移及預后評估的一個重要指標。我們采用免疫組織化學方法分別檢測了50例肝癌組織及癌旁肝組織中Maspin的表達并分析其與Caspase－3的關系，旨在探討Maspin在肝細胞癌發生發展中的作用及可能機制。

材料與方法

1 一般資料 隨機選取2004年1月至2008年8月間在蘇州大學附屬第三醫院肝膽外科，原發性肝癌行腫瘤切除的50例病例，術前均未行放化療、肝動脈栓塞及免疫治療等。其中男42例，女8例，年齡38～81歲，平均53．10±10．96歲。同時取距離上述肝癌腫塊2c m以上的癌旁肝組織標本50例作為對照。

2 方 法 免疫組織化學采取Envision T M二步法。鼠抗人Maspin免疫組化單克隆抗體（濃縮型）購自英國Neo mar ker公司，配制成工作液濃度為1∶50；兔抗人Caspase－3免疫組化多克隆抗體（即用型）購自北京中杉生物公司。石蠟包埋的組織制成4μm厚切片。免疫組織化學染色步驟按試劑盒說明進行，Maspin單克隆抗體用人乳腺組織標本做陽性對照，Caspase－3多克隆抗體用人扁桃體組織標本作陽性對照，以磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對照。

3 免疫組化結果判定 Maspin、Caspase－3以胞漿、胞核內出現棕黃色顆粒作為陽性細胞。每例切片隨機選取5個高倍視野進行結果判定。按染色強度及陽性細胞數占腫瘤細胞總數的百分比綜合計分。

4 統計學方法 采用SPSS10．0軟件包進行統計分析。P＜0．05為差異有統計學意義。

結 果

1 Maspin、Caspase－3在肝癌和癌旁肝組織中的表達 見表1。肝癌組織中Maspin的陽性率28%（14/50），與Caspase－3的陽性率36%（18/50），均低于相應癌旁肝組織，分別為66%（33/50）和76%（38/50）。二者比較差異有統計學意義（P＜0．05）。

表1 肝癌與癌旁組織中Maspin、Caspase－3的蛋白表達比較

2 Maspin、Caspase－3的表達與肝癌臨床病理參數的關系 見表2。表2顯示Maspin蛋白表達與Edmonson病理分級、有無肝內外轉移有關；Caspase－3的表達與Ed monson病理分級、有無肝內外轉移、有無包膜有關。均具有統計學差異（P＜0．05）。

表2 Maspin、Caspase－3蛋白表達與肝癌患者臨床病理特征的關系

3 肝癌中Maspin的表達與Caspase－3的關系見表3。肝癌組織中，Maspin的表達與Caspase－3呈正相關 （r＝0．553，P＜0．01）。

表3 肝細胞癌中Maspin與Caspase－3的關系

討 論

有臨床研究表明Maspin與腫瘤抑制明顯相關，原發乳腺癌組織中Maspin蛋白含量較自體對側正常組織明顯減少［2］；口腔鱗癌組織中Maspin蛋白高表達者淋巴結轉移率明顯降低，患者的生存率也相對較高［3－4］；對乳腺癌和前列腺癌研究發現從原位癌到浸潤癌再到淋巴結轉移癌，Maspin蛋白含量依次減少［5］。本研究表明，肝癌組織中Maspin蛋白陽性表達率低于癌旁組織，而且與Ed monson病理分級、有無肝內外轉移有關，均具有統計學差異。這就說明了Maspin在人肝細胞癌的發生發展以及侵襲轉移過程中起一定作用。

細胞凋亡在肝癌的發生、發展中起了較為重要的作用。天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶（Caspase）是一組與凋亡密切相關的蛋白水解酶。Caspase－3在細胞凋亡信號轉導過程中起核心作用，是家族中最重要的成員。本研究證明Caspase－3在肝癌組織中較癌旁組織中的表達降低，和Maspin在肝細胞癌的發生發展中存在正相關（r＝0．553，P＝0．000）。與之相符，Wang等［6］在對正常胃粘膜、腸化生胃粘膜和胃癌的分析中發現 Maspin和Caspase－3的表達呈正相關。我們推測，Maspin和Caspase－3在肝細胞癌中的發生過程中作用密切相關，且呈協同作用。

綜上所述，Maspin在肝細胞癌中表達下調，Maspin可能在抑制肝細胞癌的發生發展及侵襲轉移中有重要作用。肝細胞癌發生過程中Maspin低表達導致Caspase－3活性降低，細胞凋亡受抑制，從而導致腫瘤發生，Maspin是腫瘤凋亡治療的調節劑。Maspin通過調節細胞凋來抑制肝細胞癌的發生發展、侵襲轉移。

［1］Zou Z，Anisowicz A，Hendrix MJ，et al．Maspin，a ser pin with tu mor－suppressing activity in hu man mammary epithelial cells［J］．Science，1994，263（5146）：526－529．

［2］Maass N，Nagasaki K，Jonat W，et al．Expression of t u mor suppressor gene maspin in hu man breast cancer t u mor［J］．ASCO Pr oc，1999，18（10）：2452－2454．

［3］Yasunlatsu R，Nakashi ma T，Hirakawa N，et al．Maspin expression in stage I and II oral tongue squamous cell carcino ma［J］．Head Neck，2001，23（11）：962－966．

［4］Xia W，Lau YK，Hu MC，et al．High t u mour maspin expression is associated with i mpr oved survival of patients with oral squamous cell carcino ma［J］．Oncogene，2000，19（20）：2398－2403．

［5］Maass N，Nagasaki K，Ziebart M，et al．Expression and regulation of t u mor suppressor gene maspin in breast cancer［J］．Clin Breast Caneer，2002，3（4）：281－287．

［6］Wang MC，Yang Y M，LI XH，et al．Maspin expression and its clinic pathological significane in tu morigenesis and progression of gastric cancer［J］．World J Gastronterol，2004，10（5）：634－637．